Summary

Sagittale flyet kinematiske ganganalyse hos C57BL/6 mus udsat for MOG35-55 induceret eksperimentelle Autoimmune Encephalomyelitis

Published: November 04, 2017
doi:

Summary

Kinematiske ganganalyse i sagittale flyet giver meget præcise oplysninger om, hvordan flytning udføres. Vi beskriver anvendelsen af disse teknikker til at identificere gangart underskud for mus underkastes autoimmun-medieret demyelinering. Disse metoder kan også bruges til at karakterisere gangart underskud for andre musemodeller med nedsat bevægelsesevne.

Abstract

Kinematiske ganganalyse i sagittale flyet er ofte blevet brugt til at karakterisere motor underskud i multipel sklerose (MS). Vi beskriver anvendelsen af disse teknikker til at identificere gangart underskud i en musemodel af MS, kendt som eksperimentelle autoimmune encephalomyelitis (EAE). Lammelse og motor underskud i mus udsættes for EAE vurderes typisk ved hjælp af en klinisk scoring skala. Dog, denne skala udbytter kun ordinal data, der indeholder lidt information om den nøjagtige art af de motoriske underskud. EAE sygdommens sværhedsgrad er også blevet vurderet af rotarod ydeevne, som giver en foranstaltning af generel motoriske koordination. Derimod genererer kinematiske gangart analyse af hind lemmer i sagittale flyet meget præcise oplysninger om, hvordan bevægelse er nedsat. Hvis du vil udføre denne procedure, er reflekterende markører placeret på en hind lemmer til at opdage fælles bevægelse mens musen gå på et løbebånd. Bevægelse analyse software bruges til at måle bevægelse af markører under gang. Kinematiske gangart parametre udledes derefter de resulterende data. Vi viser, hvordan disse gangart parametre kan bruges til at kvantificere nedsat bevægelser i hofte, knæ og ankel leddene i EAE. Disse teknikker kan bruges til bedre at forstå sygdomsmekanismer og identificere potentielle behandlinger for MS og andre neurodegenerative sygdomme, der forringer mobilitet.

Introduction

Gangart er en serie af gentagne bevægelser af arme og ben bruges til at opnå locomotion. Gangart består af trin cyklusser, der er opdelt i to faser: den holdning fase, som er, når foden går baglæns på jorden til at drive kroppen frem; og swing fase, hvor foden er slukket på jorden og bevæger sig fremad. Forstyrrelser af gangart er kendetegnende elementer i mange neurodegenerative sygdomme, såsom rygmarvsskade (SCI), multipel sklerose (MS), amyotrofisk lateral sklerose (ALS), Parkinsons sygdom (PD) og slagtilfælde; prækliniske gnavere modeller af disse lidelser sammenfatte ofte deres respektive gangart funktionshæmninger1. De grundlæggende kontrolmekanismer for bevægelse i mus har været intensivt undersøgt2,3. Derudover er der musemodeller af mange menneskelige neurologiske4. Ganganalyse hos mus er derfor et attraktivt tilgang til at måle flere aspekter af motor underskud, der har kendt anatomiske korrelerer. Studiet af gangart i musemodeller kan give indsigt i det neuropatologiske grundlag af bevægeapparatet underskud i neurodegenerative sygdomme, og identifikation af mulige behandlinger.

Nogle teknikker, der er blevet brugt til at måle gangart i gnavere omfatter besigtigelse (fx, Basso mus skala5 og open field test6) og analyse af gangart fra den ventrale fly7. Mere nylig, metoder til at måle sagittale flyet kinematik hindlimb bevægelser har vundet popularitet, fordi de giver yderligere oplysninger om udførelse af bevægelse og er derfor mere følsomme over for subtile ændringer i gangart8, 9 , 10 , 11. kinematiske teknikker udviklet for at studere hindlimb bevægelse i sagittale flyet mens du går på et løbebånd9,12 er blevet grundigt undersøgt i forbindelse med SCI, ALS, traumatiske kortikale skader, slagtilfælde, og Huntington’s chorea8,9,10,11,13,14,15,16. Derimod har disse teknikker set begrænset anvendelse i studiet af bevægeapparatet underskud for musemodeller af multipel sklerose17.

Eksperimentelle autoimmune encephalomyelitis (EAE) er den mest almindeligt anvendte musemodel af MS18. De to vigtigste metoder til inducerende EAE er via aktiv eller passiv podning. I aktive EAE, er mus immuniseret med myelin antigener, forårsager autoreactive T-celle-medieret neuroinflammation og demyelinering i rygmarven og lillehjernen. Passiv EAE, på den anden side er foranlediget ved at overføre autoreactive T celler fra en mus med aktive EAE til en naiv mus19. Som beskrevet andetsteds, sygdomsforløb og neuropatologiske er påvirket af det centrale nervesystem (CNS) antigen og mus stamme20,21,22,23,24 ,25. I EAE eksperimenter, er kontrol mus indsprøjtet med komplet Freund’s adjuvans (CFA) uden myelin antigen. EAE er karakteriseret ved stigende lammelse, som begynder med halen svaghed og kan potentielt indebærer forbens, medførende ataksi og lammelse20. Vi har for nylig karakteriseret gangart ændringer i C57Bl/6 mus underkastes myelin oligodendrocyte glykoprotein 35-55 (MOG35-55)-induceret EAE. Disse undersøgelser har vist gangart analyse at være overlegen end klassisk adfærdsanalyse fordi afvigelser fra normale ankel bevægelse er stærkt korreleret med graden af hvid substans tab i lumbal rygmarv fra EAE mus26. Derimod var styrken af sammenhængen mellem hvide substans tab og to andre traditionelle adfærdsmæssige foranstaltninger (klinisk scoring og rotarod) meget svagere26.

Her beskrives brug af kinematiske gangart analyse til at opdage bevægelse underskud i sagittale flyet af EAE mus gå på et løbebånd. Fem reflekterende markører blev placeret på en hindlimb til at identificere bevægelse af hofte-, knæ- og ankelled i high-speed video optagelser. Bevægelse analyse software blev brugt til at udtrække kinematiske data om fælles udflugter. Nytten af disse teknikker til at kvantificere bevægelse underskud for MOG35-55 model af EAE diskuteres. Disse teknikker anvendes også til undersøgelse af gangart underskud i andre musemodeller for neurodegenerative lidelser.

Protocol

denne protokol i overensstemmelse med den canadiske Rådet om dyrs pleje retningslinjer og blev godkendt af Regionsudvalget Dalhousie University på laboratoriedyr. 1. konstruere reflekterende markører: ved hjælp af en håndholdt hul punch, punch det ønskede antal små cirkler fra en reflekterende ark. Hvert dyr kræver 5 markører for en enkelt optagelse; to store og tre små markører. Bruger fine saks, gøre et lige snit, der strækker sig fra omkredsen til midten a…

Representative Results

Figur 1 er en skematisk fremstilling af den procedure, der anvendes til kinematiske ganganalyse. Første, reflekterende markører er lavet og placeret på en mus på 5 anatomiske punkter. Gangart er indspillet mens musen gå på et løbebånd. Bevægelse analyse software bruges til at udtrække kinematiske data til efterfølgende analyse. Figur 2A -C repræsenterer trin cyklus kontrol CFA musen for hofte, knæ og anke…

Discussion

I mus med EAE, de to mest almindelige metoder til måling af motor underskud er klinisk scoring og falde ventetid fra en rotarod27,28. Disse teknikker har flere begrænsninger. Selvom bekvemme og udbredte, er klinisk scoring begrænset af giver kun ordinal niveau data, hvilket betyder, at omfanget af forskellene mellem kliniske scoringer ikke er kendt. Klinisk scoring lider også af at være ude af stand til at give præcise oplysninger om karakteren af de motori…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Vi vil gerne anerkende Sid Chedrawe for sin tekniske bistand med optagelserne. Dette arbejde blev støttet af midler fra MS Society of Canada (Gid 2983).

Materials

Camera Nikon Nikon D750 Used to film the video
Reflective tape B&L Engineering MKR-Tape-2
Fine scissors Fine Science Tools 15023-10
Forceps Fine Science Tools 11252-20
Glue gun Craftsmart E231647
scalpel handle #4 Roboz R5-9884
Scalpel Blade No.10 Feather 2020-12
C57BL/6 mice Charles River Laboratories
Anesthetic machine EZ Anesthesia EZ-AF9000 Auto Flow System
Recirculating water heating blanket Androit HTP-1500
topical eye lubricant Refresh DIN00210889
Shaver Oster 78997-010
High speed camera Fastec Fastec IL3-100
High power light Smith Victor Corporation Model 700 SG (600 Watt quartz light, 120 Volts)
Light Stand Promaster LS1
Treadmill Custom built at the Zoological Institute, University of Cologne
Microsoft Excel 2016 Microsoft Version 2016
KinemaJ Nicolas Stifani This is a script generated for use with ImageJ
KinemaR Nicolas Stifani This is a script generated for use with Rstudio
Vicon Motus Vicon Motus Version 9.00
GraphPad Prism GraphPad Version 6.00

Referencias

  1. Giladi, N., Horak, F. B., Hausdorff, J. M. Classification of gait disturbances: distinguishing between continuous and episodic changes. Mov Disord. 28 (11), 1469-1473 (2013).
  2. Kiehn, O. Decoding the organization of spinal circuits that control locomotion. Nat Rev Neurosci. 17 (4), 224-238 (2016).
  3. Akay, T., Tourtellotte, W. G., Arber, S., Jessell, T. M. Degradation of mouse locomotor pattern in the absence of proprioceptive sensory feedback. Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (47), 16877-16882 (2014).
  4. Hafezparast, M., Ahmad-Annuar, A., Wood, N. W., Tabrizi, S. J., Fisher, E. M. Mouse models for neurological disease. Lancet Neurol. 1 (4), 215-224 (2002).
  5. Basso, D. M., et al. Basso Mouse Scale for locomotion detects differences in recovery after spinal cord injury in five common mouse strains. J Neurotrauma. 23 (5), 635-659 (2006).
  6. Tatem, K. S., et al. Behavioral and locomotor measurements using an open field activity monitoring system for skeletal muscle diseases. J Vis Exp. (91), e51785 (2014).
  7. Hetze, S., Romer, C., Teufelhart, C., Meisel, A., Engel, O. Gait analysis as a method for assessing neurological outcome in a mouse model of stroke. J Neurosci Methods. 206 (1), 7-14 (2012).
  8. Preisig, D. F., et al. High-speed video gait analysis reveals early and characteristic locomotor phenotypes in mouse models of neurodegenerative movement disorders. Behav Brain Res. 311, 340-353 (2016).
  9. Leblond, H., L’Esperance, M., Orsal, D., Rossignol, S. Treadmill locomotion in the intact and spinal mouse. J Neurosci. 23 (36), 11411-11419 (2003).
  10. Ueno, M., Yamashita, T. Kinematic analyses reveal impaired locomotion following injury of the motor cortex in mice. Exp Neurol. 230 (2), 280-290 (2011).
  11. Zorner, B., et al. Profiling locomotor recovery: comprehensive quantification of impairments after CNS damage in rodents. Nat Methods. 7 (9), 701-708 (2010).
  12. Pearson, K. G., Acharya, H., Fouad, K. A new electrode configuration for recording electromyographic activity in behaving mice. J Neurosci Methods. 148 (1), 36-42 (2005).
  13. Balkaya, M., Krober, J. M., Rex, A., Endres, M. Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 33 (3), 330-338 (2013).
  14. Akay, T. Long-term measurement of muscle denervation and locomotor behavior in individual wild-type and ALS model mice. J Neurophysiol. 111 (3), 694-703 (2014).
  15. Taylor, T. N., Greene, J. G., Miller, G. W. Behavioral phenotyping of mouse models of Parkinson’s disease. Behav Brain Res. 211 (1), 1-10 (2010).
  16. Chen, K., et al. Differential Histopathological and Behavioral Outcomes Eight Weeks after Rat Spinal Cord Injury by Contusion, Dislocation, and Distraction Mechanisms. J Neurotrauma. 33 (18), 1667-1684 (2016).
  17. de Bruin, N. M., et al. Multiple rodent models and behavioral measures reveal unexpected responses to FTY720 and DMF in experimental autoimmune encephalomyelitis. Behav Brain Res. 300, 160-174 (2016).
  18. Steinman, L., Zamvil, S. S. How to successfully apply animal studies in experimental allergic encephalomyelitis to research on multiple sclerosis. Ann Neurol. 60 (1), 12-21 (2006).
  19. Emerson, M. R., Gallagher, R. J., Marquis, J. G., LeVine, S. M. Enhancing the ability of experimental autoimmune encephalomyelitis to serve as a more rigorous model of multiple sclerosis through refinement of the experimental design. Comp Med. 59 (2), 112-128 (2009).
  20. Bittner, S., Afzali, A. M., Wiendl, H., Meuth, S. G. Myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG35-55) induced experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 mice. J Vis Exp. (86), (2014).
  21. Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis. J Vis Exp. (5), e224 (2007).
  22. Barthelmes, J., et al. Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues. J Vis Exp. (111), (2016).
  23. Shaw, M. K., Zhao, X. Q., Tse, H. Y. Overcoming unresponsiveness in experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) resistant mouse strains by adoptive transfer and antigenic challenge. J Vis Exp. (62), e3778 (2012).
  24. Stromnes, I. M., Goverman, J. M. Passive induction of experimental allergic encephalomyelitis. Nat Protoc. 1 (4), 1952-1960 (2006).
  25. Stromnes, I. M., Goverman, J. M. Active induction of experimental allergic encephalomyelitis. Nat Protoc. 1 (4), 1810-1819 (2006).
  26. Fiander, M. D., Stifani, N., Nichols, M., Akay, T., Robertson, G. S. Kinematic gait parameters are highly sensitive measures of motor deficits and spinal cord injury in mice subjected to experimental autoimmune encephalomyelitis. Behav Brain Res. 317, 95-108 (2017).
  27. Jones, M. V., et al. Behavioral and pathological outcomes in MOG 35-55 experimental autoimmune encephalomyelitis. J Neuroimmunol. 199 (1-2), 83-93 (2008).
  28. van den Berg, R., Laman, J. D., van Meurs, M., Hintzen, R. Q., Hoogenraad, C. C. Rotarod motor performance and advanced spinal cord lesion image analysis refine assessment of neurodegeneration in experimental autoimmune encephalomyelitis. J Neurosci Methods. 262, 66-76 (2016).
  29. Sasaki, M., Lankford, K. L., Brown, R. J., Ruddle, N. H., Kocsis, J. D. Focal experimental autoimmune encephalomyelitis in the Lewis rat induced by immunization with myelin oligodendrocyte glycoprotein and intraspinal injection of vascular endothelial growth factor. Glia. 58 (13), 1523-1531 (2010).
  30. Merkler, D., Ernsting, T., Kerschensteiner, M., Bruck, W., Stadelmann, C. A new focal EAE model of cortical demyelination: multiple sclerosis-like lesions with rapid resolution of inflammation and extensive remyelination. Brain. 129 (Pt 8), 1972-1983 (2006).
  31. Franco-Pons, N., Torrente, M., Colomina, M. T., Vilella, E. Behavioral deficits in the cuprizone-induced murine model of demyelination/remyelination. Toxicol Lett. 169 (3), 205-213 (2007).
  32. Goldberg, N. R., Hampton, T., McCue, S., Kale, A., Meshul, C. K. Profiling changes in gait dynamics resulting from progressive 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-induced nigrostriatal lesioning. J Neurosci Res. 89 (10), 1698-1706 (2011).
check_url/es/56032?article_type=t

Play Video

Citar este artículo
Fiander, M. D., Chedrawe, M. A., Lamport, A., Akay, T., Robertson, G. S. Sagittal Plane Kinematic Gait Analysis in C57BL/6 Mice Subjected to MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis. J. Vis. Exp. (129), e56032, doi:10.3791/56032 (2017).

View Video