人成肌细胞的分离，造血分化的评估和存储操作的钙进入测量

人骨骼肌由肌原纤维前体细胞融合产生的收缩性多核肌肉纤维组成。由于肌肉纤维（肌膜）和基底层之间的骨骼肌干细胞存在于骨骼肌干细胞之间，骨骼肌具有在损伤后再生的能力。在未受伤的肌肉中，SC主要存在于静止状态。响应于机械应力或损伤，雪旺成为激活（成肌细胞），增殖，和经历或者分化以形成新的肌纤维或自我更新来补充SC池^1，2。多年来，开发了几种技术来分离SCs及其后代，成肌细胞，从骨骼肌活组织检查。对这些细胞上表达的细胞表面标志物的更多了解和荧光激活细胞分选（FACS）的方法^3，4，5，现在有可能对人成肌细胞的纯群体从肌肉样品隔离。

钙信号调节骨骼肌发育，体内平衡和再生。尤其是^钙条目是继细胞内储存消耗激活，叫SOCE，是这些过程很重要^6。在细胞刺激后，内/肌质网（ER / SR）中的Ca ²⁺水平降低，这反过来激活允许Ca ²⁺进入以重新填充ER / SR ^7的质膜Ca ²⁺通道。 SOCE中的两种主要蛋白质是ER / SR Ca ^{2+ –}感染基质相互作用分子1（STIM1）蛋白和质膜Ca ²⁺通道Orai1。骨骼肌丰富地表达了这两种蛋白质，以及同一家族的其他蛋白质（STIM2 aND ^{Orai2-Orai3）8,9}和几个的Ca ²⁺瞬时受体电位规范（TRPC）家族^{10，11，12，13}的可透过的通道。通过SOCE通路的Ca ²⁺进入对肌肉形成/再生十分重要¹⁴ 。 STIM1或Orai1蛋白的突变对肌肉功能的有害影响，主要导致肌肉张力减退^15。与SOCE障碍动物模型也具有增强的易疲劳^6，16，17显示降低的肌肉质量和力量，在一起。如上所述，其他STIM和Orai蛋白以及许多TRPC通道在骨骼肌中表达，并且它们各自的作用迄今尚未确定。敲门拥有自己的表达水平，因此可以调查他们对SOCE及其在人类骨骼肌分化过程中的作用的影响。

可以使用两种不同的方法进行SOCE测量：电生理电流记录和Ca ²⁺测量。电生理学肯定是一种更直接的方法，因为它测量了目前的兴趣及其相关的电生理特征。然而，这种技术很难应用于肌肉细胞，主要是因为肌肉细胞的大尺寸和内源性SOCE电流的小尺寸。细胞溶质Ca ²⁺成像在技术上是非常易于使用的，但测量更为间接，因为细胞质中测量的Ca ²⁺水平反映了Ca ²⁺的进入和再次抽出细胞或内部商店。

一种方法，包括从肌肉的小块分离成肌细胞本文解释了酶消化，扩增和FACS后的等信号。肌肉分化和免疫荧光协议遵循分化标志物的表达随时间的过程中描述^18。最后，解释了SOCE的测量和不同离子通道在Ca ²⁺信号和骨骼肌分化中的作用。