Tomografía de coherencia óptica: Proyección de imagen de ratón ganglionares de la retina las células In Vivo

OCT es una herramienta de diagnóstico que facilita la examinación de estructuras retinianas¹, incluyendo la cabeza del nervio óptico (HNO). Con los años se ha convertido en un indicador confiable de la progresión de la enfermedad en los seres humanos^2,3, así como en roedores^4,5. Utiliza la interferometría para crear imágenes transversales de las capas retinales con una resolución axial de 2 μm. La capa más interna es la capa de fibras nerviosas retinianas (RNFL), que contiene axones RGC, que es seguida por la capa de células ganglionares (GCL), que contienen en su mayoría grave. El siguiente es la capa plexiforme interna (IPL), encuentro de dendritas RGC axones de células bipolares, horizontales y amacrinas. Éstos, junto con las células horizontales, forman la capa nuclear interna (INL), y sus salientes se conectan con axones de fotorreceptor en la capa plexiforme externa (OPL). Esto es seguido por la capa nuclear externa (ONL), con cuerpos de la célula del fotorreceptor y está separada de la capa del fotorreceptor por la membrana limitante externa (OLM), también llamada segmento segmento interno/externo (IS / OS) capa. Finalmente, las últimas capas observables en la retina de ratón son el epitelio retiniano del pigmento (RPE) y la coroides (C). El RNFL solo normalmente es demasiado fina para medirse en ratones; así, analizando la RNFL/GCL es preferible^4,5. Otra posibilidad es la capa compleja de GC, que contiene el último además de la IPL, lo que es más grueso y así aún más fácil medir en OCT explora⁴. En consecuencia, OCT permiten comprender mejor la situación patológica de la retina, como en OPNs.

Por otra parte, el espesor de la retina de ratón se analiza a menudo con la histología post mortem . Sin embargo, esta técnica enfrenta limitaciones relacionadas con la colección de tejidos, fijación, corte, coloración, montaje, etc. por lo tanto, algunos defectos, tales como cambios de espesor sutil, no pueden ser detectado. Por último, porque el mismo ratón no puede ser probado en tiempo varios puntos, el número de animales por estudiar mucho aumento, a diferencia de OCT. Todo, la no invasividad, alta resolución, posibilidad de repetición, control de tiempo en tiempo y facilidad de uso de la tecnología OCT hacen el método de elección en los estudios de la enfermedad retiniana.

Modelos de ratón se utilizan para identificar defectos del gene y para dilucidar los mecanismos moleculares subyacentes de retinopatías⁶. OPN es una forma de retinopatía con considerable daño al nervio óptico (en), que se compone de axones RGC aproximadamente 1,2 millones. OPN se puede centrar en el o puede ser secundaria a otros trastornos congénitos o no⁷, llevando a la pérdida de campo visual y más tarde, ceguera. Rasgos característicos de OPN son leve pérdida y daño, que pueden observarse en humano OCT RNFL y GCL adelgazamiento^2,3. Mientras tanto, la fisiopatología de la OPN es todavía mal entendida, y por lo tanto, permanece la necesidad de probar la retina de ratón.

Este manuscrito describe la proyección de imagen y cuantificación del espesor de la capa retiniana, usando el ejemplo del Opa1^delTTAG ratón línea^8,9, un modelo de la atrofia óptica dominante (DOA)¹⁰. Evaluar la patofisiología RGC, se cuantificaron exploraciones radiales, rectangulares y anulares. Esto fue hecha con pinzas estándar proporcionadas por el software de OCT o con una macro casera desarrollado para un programa de procesamiento de imágenes de código abierto. Las pinzas estándar son difíciles de manipular y a menudo más grueso que el RNFL/GCL, mientras que las pinzas caseras son más precisos, reproducibles y fáciles de usar. La macro realiza una medición de una capa automáticamente detectada, en 5 puntos y en posiciones fijas, en ambos lados del HNO en la región de pepipapilar. El objetivo del protocolo presentado es describir adquisición de exploración de OCT para especificar posición retiniana, con un enfoque en RGCs.