Tomografia a coerenza ottica: Imaging Mouse ganglionari cellule In Vivo

L’OCT è uno strumento diagnostico che facilita l’esame delle strutture retiniche¹, tra cui la testa del nervo ottico (ONH). Nel corso degli anni è diventato un indicatore affidabile della progressione di malattia in esseri umani^2,3, così come in roditori^4,5. Utilizza interferometria per creare immagini a sezione trasversale degli strati retinici ad una risoluzione assiale di 2 µm. Lo strato più interno è il livello fibre nervose retiniche (RNFL), contenente assoni RGC, cui fa seguito lo strato di cellule del ganglio (GCL), contenenti principalmente RGC corpi. Successiva è lo strato plessiforme interno (IPL), dove si incontrano gli assoni delle cellule bipolari, orizzontali ed amacrine dendriti RGC. Questi, insieme alle cellule orizzontali, formano lo strato nucleare interno (INL) e loro sporgenze connettersi con gli assoni dei fotorecettori nello strato plexiform esterno (OPL). Questo è seguito dallo strato nucleare esterno (ONL), con i corpi delle cellule del fotoricettore ed è separato dallo strato dei fotorecettori di membrana limitante esterna (OLM), chiamata anche il segmento segmento interno/esterno (IS / OS) strato. Infine, gli ultimi strati osservabili nella retina di topo sono l’epitelio pigmentato retinico (RPE) e della coroide (C). Il RNFL da solo normalmente è troppo sottile per essere misurati nei topi; così, analizzando il RNFL/GCL è invece preferibile^4,5. Un’altra possibilità è lo strato complesso di GC, che contiene la seconda oltre l’IPL, rendendo più spessa e quindi ancora più facile per misurare il ott scansioni⁴. Di conseguenza, OCT può fornire informazioni sullo stato patologico della retina, come in OPNs.

In alternativa, lo spessore della retina di topo spesso viene analizzato con l’istologia post-mortem . Tuttavia, questa tecnica volti limitazioni relative alla raccolta di tessuto, fissazione, taglio, colorazione, montaggio, ecc quindi, alcuni difetti, quali i cambiamenti di spessore sottile, non possono essere rilevato. Infine, perché il mouse stesso non può essere testato alle diverse volte punti, il numero di animali per studiare notevolmente aumenta, a differenza per ottobre. Tutto sommato, la non invasività, ad alta risoluzione, con possibilità di ripetizione, monitoraggio in tempo in tempo e la facilità di utilizzo della tecnologia OCT rendono il metodo di scelta negli studi di malattia retinica.

Modelli murini vengono utilizzati per identificare i difetti del gene e per delucidare i meccanismi molecolari alla base di retinopatie⁶. OPN è una forma di retinopatia con notevoli danni al nervo ottico (ON), che si compone di circa 1,2 milioni gli assoni RGC. OPN può essere focalizzata su ON o può essere secondaria ad altre patologie, congeniti o non⁷, che conduce a perdita del campo visivo e più tardi, cecità. Tratti caratteristici di OPN sono RGC la perdita e il danno, che può essere osservata in OCT umano come RNFL e GCL assottigliamento^2,3. Nel frattempo, la patofisiologia di OPN è ancora poco conosciuta, e quindi la necessità di testare le retine del mouse rimane.

Questo manoscritto descrive l’imaging e la quantificazione di spessore di strato retinico, utilizzando l’esempio di Opa1^delTTAG mouse linea^8,9, un modello di atrofia ottica dominante (DOA)¹⁰. Per valutare la patofisiologia RGC, scansioni radiali, rettangolare e anulare sono stati quantificati. Questo è stato fatto con pinze originali fornite dal software OCT o con una macro fatti in casa, sviluppato per un programma di elaborazione di immagini open source. Le pinze di serie sono difficili da manipolare e spesso più spessa di RNFL/GCL, mentre le pinze fatte in casa sono facili da usare, riproducibili e più precisa. La macro esegue una misurazione per un livello rilevato automaticamente, in 5 punti e in posizioni fisse, su entrambi i lati di ONH nella regione peripapillare. L’obiettivo del protocollo presentato è di descrivere acquisizione scansione OCT per specificare il posizionamento della retina, con un focus su RGCs.