Summary

생산 및 하버드 환경 챔버에 유기 미 립 자 물질의 측정

Published: November 18, 2018
doi:

Summary

이 신문은 하버드 환경 챔버 (HEC) 및 가스 측정 및 입자 종에 대 한 관련된 계측에 대 한 작업 절차를 설명 합니다. 환경 챔버는 생산 보조 유기 종 유기 선구자, 특히와 관련 된 대기 유기 미 립 자 물질에서에서 생산을 연구 하는 데 사용 됩니다.

Abstract

생산 및 대기 유기 미 립 자 물질 (PM)의 진화는 충분히 이해 하지 기후 및 대기 화학의 정확한 시뮬레이션에 대 한. 복잡 한 생산 메커니즘 및 반응 경로 확인이 어려운 연구 주제. 이러한 문제를 해결 하려면 보조 유기 물질에 대 한 충분 한 체류 시간 및 선구자의 닫기-주변 농도 제공 하는 환경 챔버를 필요 합니다. 하버드 환경 챔버 (HEC) 휘발성 유기 화합물 (Voc)에서 가스 및 입자 상 종의 생산 시뮬레이션이 필요를 봉사 하기 위하여 건축 되었다. HEC는 4.7 m3 의 볼륨과 일반적인 동작 조건에서 3.4 h의 평균 체류 시간. 그것은 완전히 혼합된 흐름 반응 기 (CMFR), 샘플 수집 및 데이터 분석에 대 한 일간에 걸쳐 무기한 안정 상태 작업의 가능성을 제공으로 운영 한다. 작업 절차는이 문서에 자세히 설명 되어 있습니다. 여러 종류의 계측 생산된 가스 및 입자 특성화 하는 데 사용 됩니다. 고해상도 졸 싸움의 시간 질량 분석기 (HR-ToF-AMS) 입자를 특성화 하는 데 사용 됩니다. 양성자 이전 반응 질량 분석기 (PTR-MS)는 가스 분석을 위해 사용 됩니다. 예제 결과 환경 챔버를 사용 하 여 다양 한 물리 화학적 특성 및 유기 대기 미 립 자 물질의 반응 메커니즘에 관련 된 응용 프로그램에에서 표시 되 게 됩니다.

Introduction

대기 유기 미 립 자 물질 (PM) 휘발성 유기 화합물 (Voc) 방출 생물권 및 인류 기 원론 활동1,2의 산화에서 생산 됩니다. 이들의 중요 한 효과도 불구 하 고에 어로 졸 입자 기후, 인간의 건강, 및 가시성3, 생산 메커니즘에 남아 불완전 하 게 이해 하 고 특징, 둘 질적 및 양적. 실험실 연구는 반드시 제한 된 범위 및 시간, 한 과제는 가스 및 입자 상 종의 대기 진화 시뮬레이션 이다. 거주 시간 충분히 주변 환경4,,56,7에서 마찬가지로 산화 및 위상 반응 가스와 입자 단계에서 화합물 받을 수 있어야 8. 또 다른 도전은 충분히 나타내는 주변 환경9,,1011낮은 농도에서 실험실에서 일 것입니다. 많은 중요 한 프로세스는 농도 함께 규모. 예를 들어, 실험실 실험에서 유기 오후의 지나치게 높은 질량 농도 입자 단계 가스 단계에서 semivolatile 종의 분할 잘못 이동할 수 있다. 가스 및 입자 단계 구성 대기 조건 대표 될 수 있다. 하버드 환경 챔버 낮은 농도 시간과 긴 통합 수 있도록 주로 무기한 날짜 표시줄 아래 운영 연속 흐름 구성의 방법을 사용 하 여 이러한 문제에 대응 하도록 설계 되었습니다. 신호 탐지입니다. 실로 2018에서 과학적 발견의 12 년의 이정표 주년을 맞는다.

환경 챔버 광원 흐름 시스템, 크기와 함께 운영 하는 챔버의 수에 따라 다릅니다. 인공 빛14,15,,1617,18 함께 작동 하는 실내 챔버로 서 자연 햇빛12,13 받을 야외 챔버 있다 ,19,,2021. 야외 챔버도 만들 수 있습니다 벽 효과 의해 도입 될 수 있는 비교적 큰, 최소화 아티팩트 도전 구름으로 온도 차이 때문에 조명의 변화를 포함. 실내 챔버 온도 및 상대 습도 신중 하 게 제어할 수, 강도와 인공 빛에서 스펙트럼은 일반적으로 특정 광화학 반응14에 영향을 미칠 수 있습니다 천연 햇빛 다릅니다. 실 배치 원자로 또는 완전히 혼합된 흐름 반응 기 (CMFR)22로 동작할 수 있습니다. 배치 원자로 일반적으로 운영 하 고 유지 하기 쉽습니다 하지만 CMFR 신호 통합에 대 한 허용 하 고 그로 인하여 낮은, atmospherically 관련 농도에서 작업 필요에 따라 주 동안 작동 될 수 있다.

여기, 하드웨어 및 하버드 환경 챔버 (HEC)7,23,,2425 의 운영 세부 사항에 설명 합니다. 상수-온도 챔버 내부 보관 4.7 m3 PFA 테 플 론 가방 이루어져는 HEC (2.5 × 2.5 × 2.75 m3)26. 반사 알루미늄 시트 가방을 통해 다중 조명 및 광화학의 속도 증가 챔버의 내부 벽을 커버. 현대 건설은 21 sLpm의 총 유량을 사용 하 고 해당 3.4 h27의 평균 체류 시간 하 CMFR로 운영 한다. 온도, 습도, 및 오존 농도 피드백 제어에 의해 유지 됩니다. 염화 황산 염 입자 씨 입자 주변 환경에서 무기 입자에 유기 구성 요소의 응축을 모방 하기 위해 사용 됩니다. 무기 황산 염 입자의 모드 직경 100-200 nm 시뮬레이션 분야28에서 측정 하는 입자 크기를 선택 합니다. 작업 절차는 시각적 프레 젠 테이 션, 응용 프로그램 및 연구 결과 현대 건설의 간단한 토론에 의해 다음을 포함 하 여 여기, 프로토콜 섹션에서 설명 합니다.

Protocol

참고: 키 측정된 환경 변수에 포함 오존 (오존 분석기), 더와 NO2 (NOx 분석기), 상대 습도 (RH 센서), 온도 (K 타입 열전대), 그리고 가방과 챔버 사이 차동 압력. 악기 브랜드 자료의 테이블에 나열 됩니다. 안정적이 고 실험의 시작에 앞서 디자인 요구 사항 내에서 환경 매개 변수는 계기에 의해 측정 되어야 합니다. 환경 챔버는 지속적으로 모니터링 하 고 환경 매개 변수 실험의 과정을 통해 요구 사항 내에서 유지 되도록 조정 하는 피드백 시스템을 사용 합니다. 1. 절차 시작 매개 변수 설정 및 산화 제 주입 피드백 시스템 (PID) 환경 챔버의 물리적 매개 변수를 설정 합니다. 4 차동 압력 설정 Pa (30 mTorr). 압력이 너무 높이 또는 너무 낮게 되 면 솔레노이드 밸브 열립니다 하거나 설정된 범위 내에서 가방의 압력 조절 닫습니다. 자외선 램프를 통해 건조 한 공기를 전달 하 여 오존 흐름을 생성 하는 오존 발전기를 켜고. 현대 건설 내부 최종 오존 농도의 100 ppb에 도달 0.1 sLpm에 흐름 속도 설정 합니다. 오존 모니터를 켜고 해당 소프트웨어를 활성화. 지정 된 값을 가방의 상대 습도 설정 합니다. 이 특정 실험에서 40 %RH 사용 하지만 RH 수준에서 변경할 수 있습니다 < 5% ~ 80%. RH 센서와 피드백 제어 시스템 유지 상대 습도 가방에 안정적인 건조 하 고 습 한 공기 흐름의 비율을 조정 하 여. 건조 한 공기 공급 제로 공기 탄화수소, 물 (RH < 1%), 및 질소의 산화물을 생성 하는 순수한 공기 생성기에서 제공 됩니다. 습 한 공기의 흐름은 고 순도 물 (18 m ω cm) 통해 버블링 건조 공기 근처 포화 공기 흐름을 만드는 데에 준비 됩니다. 25.0 ± 0.1 ° c.에 챔버의 온도 설정 내부 컨디셔닝 플레넘 지정된 값 내 온도 유지 하는 피드백 제어 시스템으로 스테인레스 스틸 천장 통해 균일 하 게 공기를 배포 합니다. 안정적인 것으로 다른 환경 매개 변수 및 디자인 요구 사항 내에서 기다립니다. 환경 챔버에 악기의 후미를 연결 합니다. 시작 단추를 클릭 하 여 자체 개발한 소프트웨어를 시작 합니다. 자체 개발된 소프트웨어를 통합 하는 피드백 제어 (그림 2)에 표시 되는 실시간 데이터를 확인 합니다. 모든 악기를 켜고 그들 완전히 워밍업을 기다립니다. 2. 씨앗 입자 생산 참고: 씨앗 입자 주입, 이전 1 cm-3아래는 초기 입자 농도입니다. 황산 씨 입자의 생산 모두 더 나은 주변 조건을 시뮬레이션 하 고 또한 보조 유기 물질의 condensational 성장 위한 매체 역할을 가방에 준 단 분산 건조 황산 염 입자를 주사. 씨 입자의 주입은 다음과 같이 실시 됩니다. 준비 (NH4) 2SO4 솔루션 (0.1 g∙L-1) 100 mL 부피 플라스 크에 고 순도 물 (18 MΩ∙cm)에 황산 암모늄 (0.01 g)을 분해. 분무기를 사용 하 여 3 sLpm의 유량에 (NH4) 2SO4 연 무질 입자를 생산. 10%까지 졸 흐름 건조 기 보급을 통해 (실리 카 젤)을가지고 상대 습도 전달 합니다. 씨앗 입자 선택과 가방 주입 바이 폴라 충전기 (85Kr)을 통해에 어로 졸 흐름을 통과 하 고 크기를 차동 이동성 분석기 (DMA) 입자를 선택 하 고 전기 이동성으로 준 단 분산 배포 준비. 전송 기능 10: 3의 DMA에 칼 집 졸 흐름을 사용 하 여 확대 됩니다. DMA를 종료 하는 입자의 선택 된 전기 이동성 직경 150 50에서 변화 실험에 따라 nm. 전형적인 수 농도 범위 4000에서 8000 cm-3. 3 sLpm의 유량과 가방을 준 단 분산 연 무질을 피드. 입자는 스캔 이동성 입자 크기 조절기 (SMPS)를 사용 하 여 가방을 종료 모니터링. 안정 되 게 씨 입자의 크기 분포를 기다립니다. 이 실험에 사용 되는 때문에 벤딩 튜브 뿐만 아니라 가방에 정전기는 특히 입자 크기에 대 한 최소한의 입자 손실 (100 보다 큰 nm)29,30. 3입니다. 가스 단계 선구자의 주입 가스 상 선구자의 주입 주사기를 사용 하 여이 소프 렌 솔루션의 1.00 mL 철회. 세 번 최종 철수 이전 솔루션으로 주사기를 씻어. 주사기는 주사기 인젝터에 놓습니다. 둥근 바닥 플라스 크 (25 mL)에 고무 물개를 통해 바늘 팁을 삽입 합니다. 미리 테이프를가 열 하 여 플라스 크 90 ± 1 ° C에 열. 켜고 주사기 주입 한 적절 한 값 (1.1 4.4 μL∙min-1)로 설정 합니다. 전조의 가스 단계 농도 다른 실험 주사기 주입 속도 제어 하 여 조정 된다. 긴 실험에 대 한 필요에 따라 주사기를 새로 고칩니다. 증발 하 고 멀리 둥근 바닥 플라스 크에 주입이 소프 렌을 공기를 정화의 2 sLpm의 흐름을 소개 합니다. 공기의 흐름은 주사기의 끝에 무 방울 플라스 크에 떨어지는 대신 증발은 충분히 큰. 그 결과, 가스 단계 선구자의 농도 유지 안정 됩니다. 현대 건설 내부 자외선 빛의 스위치를 켭니다. 4. 악기 측정 참고:이 소프 렌과 UV 빛의 조합 황산 씨앗 입자에 보조 유기 물질의 생산에 지도 한다. 가방을 종료 하는 입자의 수 직경 분포 샘플 정전기 방지 튜빙을 사용 하 여 부 대에서 유출. 에 어로 졸 측정 소프트웨어를 시작 하 고 새 파일 만들기를 클릭 하 여 새 파일을 만듭니다. 각 매개 변수는 그림 3에 표시 된 대로 설정 됩니다. 확인 버튼을 클릭 하 여 가방을 종료 하는 입자의 수 직경 분포를 기록 합니다. 유기 미 립 자 물질의 화학 특성화 가방 안에 스테인레스 스틸의 샘플링 밸브를 엽니다. 고해상도 졸 시간의 비행 질량 분석기 (HR-ToF-AMS)에서 샘플된 졸 흐름. (그림 4) 패널의 왼쪽 하단에 인식 버튼을 누르면 데이터 수집 소프트웨어를 시작 합니다. 유기 오후의 고해상도 질량 스펙트럼 실험의 시간 과정 기록 됩니다. 총 유기 대량 농도 또한 얻을 수 있다. 가스 상 종의 특성 가방 안에 PTFE 테 플 론 튜브의 샘플링 밸브를 엽니다. 샘플링 된 흐름은 양성자 이전 반응 시간의 비행 질량 분석기 (PTR-TOF-MS)에 가이드. 물 보다 더 높은 양성자 선호도 데 가스 종의 질량 스펙트럼 얻을 수 있습니다. PTR-TOF-MS 소프트웨어 PTR-관리자에서 그림 5 에 표시 된의 이온 소스의 매개 변수 설정을 사용 합니다. 드롭-다운 메뉴 수집 TofDAQ 뷰어 소프트웨어에 액세스 하 고 다음 시작을 눌러 데이터 수집을 시작 합니다. 이 소프트웨어를 통해 각 이온의 시계열을 기록 합니다. 5입니다. 실험 및 가방 청소 끝 가스 단계 일어나 고 졸 씨 입자의 주입을 중지 합니다. 지속적으로 몇 일 동안 가방에 40 L∙min-1에서 순수한 공기를 주사. 모든 자외선 빛을 켜십시오. 600 ppb에 오존 농도 설정 하 고 설정 온도 40 ° c 이 방법에서는, 적극적인 산화 환경 가방 스크럽을 몇 일 동안 유지 됩니다. 챔버 내부에 입자 수 농도 보다 0.2 c m-3 때 챔버 깨끗 한 것으로 간주 됩니다 하 고 실험에 사용할 수 있습니다.

Representative Results

1 개의 실험 동안 HR ToF AMS에 의해 기록 된 유기 대량 농도의 시계열의 예는 그림 6에 표시 됩니다. 실험 조건 오 산화로 급진적인 제공 하기도 UV 빛이 소프 렌의 490 ppb를 했다. 유기 오후의 대량 농도 4 h 정상 상태에 대 한 후 때까지 실험의 시작 부분에 도달 했다 후에 꾸준히 증가 했다. 가스 상 유기 화합물의 진화 했다 동시에 시계열 C4H6O의+ 신호 강도 주요이 소프 렌에서 발생 한 동일한 실험에서 PTR-TOF-양 그림 7 쇼를 사용 하 여 공부 산화 제품 (예: 메 틸 비닐 케 톤, methacrolein, 및 여러 가지 유기 hydroperoxides). 조명, 시작 후 C4H6O+ 신호 강도 증가 하 고 이렇게 안정 된 상태는 50 분 후에 도달할 때까지 계속 했다. 수치는 현대 건설에서 보조 유기 물질의 시간 진화를 보여 줍니다. AMS 데이터 주입 후, 반응, 안정 상태까지 스핀, 입자, 유기 화합물의 구성 유기 구성의 집중 시간 증가 나타냅니다. PTR-MS 데이터 부모 전조는 가스 단계에서 손실 반응 시작 후 1 세대 제품 종 표시 보여줍니다. 온라인 및 오프 라인 측정의 데이터 분석은 일반적으로 정상 상태 기간에 초점. 끝내 종 무기한으로 안정적으로 유지 가스 및 입자 단계의 농도 중요 한 챔버 매개 변수에 피드백 컨트롤 CMFR 작업의 사용 때문에 일을 필요로 하는 실험을 수행 하는 기회가 있다. 요약 하자면,는 HEC 대기 화학 시뮬레이션 함으로써 가설을 테스트 하는 데 사용 하 고 입자와에 어로 졸의 심지어 건강 효과의 기후에 영향을 이해 하는 대기 오염에 관련 된 중요 한 주제에 이해. 그림 1 . 도식 흐름도 하버드 환경 챔버 (HEC)의. 라인에 어로 졸 흐름을 나타냅니다. 왼쪽된 패널 반응 상태를 모니터링 하는 데 사용 하는 악기를 보여줍니다. 오른쪽 패널 입자 특성 및 가스 상 종 하는 데 사용 하는 그 악기를 나열 합니다. 이 그림은에서 적응 킹 외. 26 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.  그림 2 . 자체 개발된 프로그램 모니터 온도, 오존, 상대 습도 및 압력, 다른 종 중 사용에 대 한 그래픽 사용자 인터페이스. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오. 그림 3 . SMPS를 사용 하 여 수 직경 분포를 기록 하는 데 사용 하는 소프트웨어의 그래픽 사용자 인터페이스. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오. 그림 4 . 졸 질량 분석기를 작동 하도록 소프트웨어의 그래픽 사용자 인터페이스. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오. 그림 5 . 양성자 이전 반응 질량 분석기 (PTR-밀리초)을 제어 하는 소프트웨어의 그래픽 사용자 인터페이스 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오. 그림 6 . 특징이 졸 질량 분석기로 유기 오후 예 측정. 빨간색 선은 유기 이온에 대 한 총 신호 강도를 나타냅니다. 표시 된 데이터는이 소프 렌을 주입 하 고 자외선 조명 개시 직후에 해당 합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오. 그림 7 . C 4 H 6 O+ 이온의 신호 강렬의 예를 들어,이 소프 렌 사진-산화 측정의 주요 제품에는 양성자 이전 반응 질량 분석에 의해. 신호 강도 조명 후 8 분 증가 하기 시작 하 고 50 분에 정상 상태에 도달 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Discussion

형성 하 고 유기에 어로 졸의 진화를 이해에 증가 중요성 잘 제어 된 환경에서 이러한 프로세스를 시뮬레이션 환경 챔버를 구성 하는 충 동을 리드. 현재, 대부분의 환경 챔버는 기반 배치 반응 기 모드19,31,32,,3334 에 지속적으로 혼합 사용 하는 거의 약 실 있다 반응 기 모드15,35. 연속 흐름 반응 기 모드에서 환경 챔버 연속에 어로 졸에 대 한 일 또는 심지어 주 샘플링 하 여 주변 같은 농도에서 편의 제공 한다. 그것은 주위 조건에 잘 제어 된 실험실 설정 보다 훨씬 더 복잡 한 지적 가치가 있다입니다. 예를 들어, 주위의 온도 변동 챔버에 그것은 상수 값에 유지 하는 동안. 가스와 챔버에 입자의 반응 시간 제어 하 고 도달 일의 현실 세계에서 반응 시간 보다는 챔버의 거주지에 의해 제한 됩니다. Blacklights 자연 태양 복사, 대신를 사용 하 여도 오 래 디 칼 생성 하 고 주위에 반응을 시뮬레이션 수 있습니다. 하지만 때때로 blacklight 유기 분자의 산화 상태에 영향을 미칠 수 있습니다 하 고 신중 하 게 검사 하는 주변 환경에 비해 오 radicles의 높은 농도에 지도할 수 있다. 그러나, 단 하나 또는 두 개의 변수를 조정 하 고 제어 환경 챔버를 통해 다른 모든 변수, 우리가 체계적으로 이러한 화학/물리적 프로세스 공부할 수 있습니다.

지속적으로 혼합 챔버 운영에 중요 한 단계 중 하나는 최적의 범위 내에서 챔버의 내부 압력을 유지 것입니다. 챔버 내에 고압 챔버 내에서 낮은 압력 챔버에 실험실에서 공기와 입자를 빨 아 하 고 오염 발생 가스와 입자는 상공에서의 누수 발생 합니다. 압력 게이지 안전 값 이내 챔버의 압력을 모니터링 하는 데 필요한 (< 5 Pa) 실험 과정을 통해. 환경 챔버에 대 한 또 다른 일반적인 관찰된 문제는 예상치 못한 유기 입자 자체 nucleation. 낮은 VOC/산화 제 주입 속도 또는 높은 씨 입자 농도이 현상을 피하기 위해 필요 합니다. 실험의 목적에 따라 오존, 휘발성 유기 화합물, 및 씨 입자의 농도 1 개의 크기 순서에 의해 달라질 수 있습니다. F주입, 챔버에 주입 하는 각 종족의 흐름 속도 계산 하는 다음 방정식을 사용할 수 있습니다.

Equation 1(1)

어디 c대상c초기 각 챔버 내부에 반응의 최종 목표 농도 및 소스에서 생성 되는 반응의 초기 농도 나타냅니다. 기호 f 챔버로 주입 했다 모든 종족의 전체 흐름을 나타냅니다.

성공적으로 환경 챔버를 운영 하 고 결과 얻기 위한 세 번째 중요 한 단계는 실험 하기 전에 각 악기를 보정 하는 것입니다. SMPS 시스템 PSL 입자36의 알려진된 크기를 주입 하 여 측정 될 수 있다. 아니x 및 오존 분석기 5 ppm 아무 실린더를 N2, 그리고 10 ppm 오존 의해 N2를 각각26희석의 희석을 사용 하 여 보정 됩니다. AMS와 PTR-MS에 대 한 교정 절차 복잡 및 악기 매뉴얼 또는 이전 문학27,37에서 찾을 수 있습니다.

위에서 설명한 환경 챔버 설치만이 아니라 생산 및 유기에 어로 졸의 진화를 공부 하 고 적합도 유기 코팅으로 가스를 주입 하 여 가스 위상 반응 검사와 다양 한 입자 코팅에 적용 선구자만. 이러한 여러 방향 환경 챔버 공기 질, 기후 변화와 인간의 건강 주제에 관련 된 연구 분야의 다양 한 공부에 유연성을 제공 합니다.

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 자료는 화학의 부의는 미국 국립 과학 재단 (NSF) 미국 국가 과학의 보조금 번호 1111418, 대기 GeoSciences 부문에서 환경 화학 과학 프로그램에서 지 원하는 작업 기반 보조금 번호 1524731, 재단 (NSF) 뿐만 아니라 하버드 교수 출판 상. 우리는 펑 페이 리 우, 치 첸, 유용한 토론 및 실험, 지원에 대 한 Mikinori Kuwata 뿐만 아니라 비디오의 voiceover를 줘 에릭 Etcovitch을 인정 합니다.

Materials

(-)-α-pinene  Sigma-Aldrich 305715
2-butanol  Sigma-Aldrich 294810
5.00 mL syringe  Hamilton 201300
Aerosol particle mass analyzer Kanomax 3600
Condensational particle counter TSI 3022
Differential mobility analyzer TSI 3081
Heating mantle Cole-parmer WU-36225-10
Mass flow controller MKS M100B
Nafion tube Perma Pure MD-700-24F-1
Nanometer aerosol sampler TSI 3089
Ozone generator Jelight 600
Ozone monitor Ecosensors UV-100
Pressure sensor Omega PX409
RH sensor Rotronic 60587161
Round-bottom, three neck flask Aceglass 6944-04
Scanning electron microscope Zeiss N/A Ultra plus FESEM
Scanning mobility particle sizer TSI 3071A+3772 electrostatic classifier is model 3071A and the condensational particle ocunter is 3772
Silicon substrate University Wafer 1707
Syringe Needle Hamilton 90025 25 G, 2 inch
Syringe pump Chemyx Fusion Touch 200
Temperature sensor National Instrument USB-TC01
water circulator Brinkmann RC6

Referencias

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Zhang, Y., Gong, Z., Sa, S. d., Bateman, A. P., Liu, Y., Li, Y., Geiger, F. M., Martin, S. T. Production and Measurement of Organic Particulate Matter in the Harvard Environmental Chamber. J. Vis. Exp. (141), e55685, doi:10.3791/55685 (2018).

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