בידוד אגל ליפידים על ניתוח כמותי ספקטרומטריית מסה

טיפות ליפידים הם מאוד ציטופלסמית דינמיים (ו גרעיניים) אברונים בתא מורכבים ליבה של ליפידים ניטראלי (טריגליצרידים (TG) ואסתר כולסטרול (CE)) מוקפים בשכבה של פוספוליפידים עם חלבונים מוטבעים ^1. כל סוגי התאים לייצר טיפות שומנים, אבל הם משתנים בגודלם, רכב שומנים, ודקורצית חלבון. טיפות ליפידים למלא פונקציות מגוונות, כולל לשמש מאגרי אנרגיה מבשר קרום או פיקדונות חלבון. בנוסף, באמצעות ספיגת שומנים, הם להגן על תאים מפני lipotoxicity, שומני שחרור כמו מולקולות איתות, ומעורבי פירוק חלבונים ו reticulum endoplasmic תגובות דחק (ER) ^2. ככזה, שורה של חלבונים הנקשרים טיפות השומנים והם חלים הדור שלהם, השפלה, סחר, ואינטראקציה עם אברונים אחרים. ביניהם יש את המשפחה perilipin של חלבונים מחייב אגל השומנים בתום לב (PLIN1-5)f "> 3.

Biogenesis אגל ליפידים מתחיל הנראה על ER, שבו אנזימים תושב ER לזרז את הסינתזה של ליפידים נייטרלי שמצטברים בתוך bilayer קרום, להרכיב עדשה של ליפידים נייטרלי, תהליך אשר דמיינו לאחרונה יפה שמרים ^4. ממברנה כיפוף ורמות phosphatidic חומצה diacylglycerol גבוהות נחשבים אז כדי למשוך חלבונים המעורבים ביוסינתזה פוספוליפידים, כמו סינתזה סימולטני של ליפידים נייטרלי הליבה ואת פוספוליפידים מיגון נדרשת אגל השומנים דור ^5. אנזימים מחסה תחומי transmembrane השוכנים בבית ER לזרז את התהליך הזה. הרחבת טיפות שומנים גדולות מחייב הפעילות של מח' אחרת של אנזימים לסינתזה של שומנים כי נמל Helix amphipathic ובכך יכול לנסוע מ ER כדי טיפות שומנים. ניוד השומנים מן טיפות שומנים מתרחש דרך ההפעלה המקומית של triglyceridlipases דואר ו diacylglycerol lipase טריגליצרידים שומני (ATGL) ואת ההורמון רגיש lipase (HSL) או על ידי מסלולי autophagic שונים, כגון מקרו microlipophagy או מלווים בתיווך autophagy ^6. טיפות ליפידים אינטראקציה עם אברונים תאיים אחרים, כגון המיטוכונדריה (עבור חמצון בטא וסינתזה השומנים) ו ER (עבור סינתזה השומנים וסחר חלבון), אלא גם עם lysosomes, endosomes, ואת וקואולות המושרה על ידי חיידקים תאיים ^7. ואכן חיידקים, וירוסים, טפילים ואפילו למקד טיפות שומנים עבור שכפול והתמדה, ביניהם ⁸ HCV.

זיהום HCV הוא אחד הגורמים המובילים לתחלואה ותמותה הקשורות בכבד ברחבי העולם, המהווים כ -0.5 מיליון מקרי מוות בשנה ^9. המספר האמיתי של זיהומים HCV אינו ידוע, אך לפי הערכות שבוצעו לאחרונה ש -130 – -150 מיליון בני אדם נדבקים כרוני. אין vaccinדואר קיים, אך הנגיפים ישיר למשחק שאושר לאחרונה להגדיל באופן דראמטי את התגובות טיפוליות לעומת הטיפול הסטנדרטי מבוסס-אינטרפרון. עם זאת, ברחבי העולם, לטיפול בחולים יוגבל הנראה בשל עלויות גבוהות מאוד של תרופות חדשות. כמחצית מכלל אנשים נגועים כרוני עם HCV לפתח מחלת כבד שומני (steatosis), מצב המאופיין על ידי הצטברות יתר של טיפות השומנים ב hepatocytes. מעניין לציין, טיפות שומנים התגלו גם אברונים הסלולר חיוניים כמו שכפול HCV, putatively המשרתים כאתרי הרכבת ויראלי ^{10, 11.}

בתאים נגועים HCV, ליבת החלבון הנגיפית לבין NS5A למקם את טיפות שומנים בתהליך זה תלוי ביוסינתזה טריגליצרידים, כמו מעכבים של diacylglycerol acyltransferase-1 (DGAT1) לפגוע בסחר טיפות שומנים וייצור חלקיקי HCV עוקבת ¹² </sup^{>, 13, 14, 15.} בנוסף, מוטציות תחומי השומנים מחייבים אגל באחת ליבה או NS5A לדכא HCV הרכבה ^{16, 17.} Core ו NS5A אז לגייס את כל החלבונים הנגיפיים אחרים, כמו גם מתחמי שכפול נגיפי RNA, ממברנות קשורים קשר הדוק עם השומנים טיפות ^16. פעולה מתואמת של כל החלבונים הנגיפיים נדרשת לייצור המוצלח של צאצאים ויראלית מדבקים ^{10, 11.} החלבונים המבניים הם חלק virions, ואת החלבונים nonstructural לקדם אינטראקציות חלבון-חלבון הדרוש לתהליך הזה. מעניין לגלות חלבון שומנים בתום לב מחייב אגל PLIN3 / TIP47 נדרשת הן שכפול RNA HCV ושחרור virions ^{18, 19} <sup>, ^20. למרות ההתקדמות שחלה באחרונה אלה, הפרטים מכניסטית, במיוחד של אינטראקציות המארח וירוס בשלבים המאוחרים של שכפול HCV, להישאר מעורפלים, ואת תפקידו המדויק של טיפות השומנים אינה ידועה.

כאן, אנו מתארים שיטה לבודד טיפות השומנים עבור ספקטרומטריית מסה כמותית של חלבונים הקשורים. באמצעות שיטה זו, מצאנו שינויים עמוקים proteome אגל השומנים במהלך זיהום HCV ו- A3 Annexin מזוהה חלבון המארח כי שיתוף fractionates עם טיפות השומנים ואת נדרשת הבשלה HCV יעיל ^21.