A indução de transições mesenquimais-epiteliais em células de sarcoma

plasticidade fenotípica refere-se a uma transição reversível entre os fenótipos celulares, e é geralmente divididos em dois tipos, epitelial-a-mesenquimal (EMT) transições e transições mesenquimais-a-epitelial (MET). Esta plasticidade fenotípica desempenha um papel importante em processos normais de organismos multicelulares, tais como desenvolvimento e cicatrização de feridas ^1; no entanto, estas mesmas vias e programas de expressão génica também pode levar a doenças, tais como fibrose (revisto em ^{2, 3, 4)} e a metástase de carcinoma (revisto em referências ^{5, 6, 7, 8).} Durante a metástase, por exemplo, EMT perturba polaridade celular, as interacções célula-célula, e promove a invasão ^{9, 10.} Juntos, EMT contribuirs para um estado fenotípico que facilita a disseminação de células de cancro. Além disso, EMT também conduz a uma série de outras alterações fenotípicas que dirigem um fenipo agressivo, incluindo a desregulação do metabolismo celular de cancro ^6, o desenvolvimento de resistência ao fármaco ^{11, 12,} o aumento da capacidade do tumor-iniciação ^{13, 14} e ¹⁵ acolher evasão imune.

plasticidade fenotípica tem sido bem estudada na progressão do carcinoma; no entanto, os sarcomas também exibem plasticidade fenotípica. Curiosamente, parece que alguns dos mesmos drivers de plasticidade fenotípica em carcinomas também contribuem para a plasticidade sarcoma e agressividade. Por exemplo, células tumorais circulantes (CTCs) a partir de pacientes de sarcoma foram mostrados para expressar o EpCAM, uma proteína da superfície celular que é tipicamente encontrado em culas epiteliais ^16. Addicionalmente, 250 amostras de sarcoma dos tecidos moles foram categorizados como epitelial-mesenquimal como ou semelhantes com base na expressão do gene. Pacientes na assinatura biomarcador epitelial-like tiveram melhor prognóstico do que pacientes com a assinatura biomarcador mesenquimais-like ^17. Isto é consistente com muitos carcinomas, em que os doentes com mais de carcinomas epiteliais semelhantes têm melhores resultados em comparação com os pacientes com mais do mesquima semelhante a tumores ^18.

Enquanto alguns sarcomas exibir biomarcadores e vias de expressão génica consistentes com MET, as bases moleculares da plasticidade fenotípica permanecem pouco compreendidos. Para estudar os mecanismos e os condutores de MET em sarcoma foi desenvolvido um modelo de indução MET utilizando dois factores específicos do epitélio, o microARN (MIR) -200 família e grainyhead-like 2 (GRHL2). Os miR-200 são uma família de pequenos RNAs não-codificantes que regulam a expressão de genes por ligao ao dos UTRs 3 de messenger ARN e evitando a tradução na proteína. A família de miR-200 consiste em dois sub-grupos – um contendo miR-141 e miR-200a, e o outro incluindo o miR-200b, miR-200c, e miR-429. Os membros da família de miR-200 são enriquecidos em tecidos epiteliais, e a perda de miR-200 está associado com a metástase em carcinomas ^19. A família de miR-200 também é regulada negativamente nos sarcomas de tecidos moles em comparação com o tecido normal ^20. Similar aos miR-200s, GRHL2 é um regulador chave que é importante para o desenvolvimento epitelial ^21. O factor de transcrição GRHL2 actua em dois modos para regular positivamente genes epiteliais, tais como a E-caderina: 1) Em células epiteliais, GRHL2 reprime directamente o principal regulador EMT, ZEB1 ^22; e 2) GRHL2 activa directamente a transcrição de genes epiteliais ^23. As nossas investigações anteriores mostraram que a expressão combinada de miR-200s e GRHL2 em células de sarcomainduz um fenótipo ^MET-24 como. Aqui, nós apresentamos um protocolo detalhado para criar um modelo in vitro de indução MET em células de sarcoma usando a expressão ectópica de miR-200s e GRHL2.