Summary

Registrering av EEG i fritt bevegelige neonatale rotter ved hjelp av en ny metode

Published: May 29, 2017
doi:

Summary

Her presenterer vi en ny teknikk designet for å registrere elektroencefalografi (EEG) i frittflyttende neonatale epileptiske pupper og beskrive dens prosedyrer, funksjoner og anvendelser. Denne metoden gjør at man kan registrere EEG i mer enn 1 uke.

Abstract

EEG er en nyttig metode for å oppdage elektrisk aktivitet i hjernen. Videre er det et mye brukt diagnostisk verktøy for ulike nevrologiske forhold, som epilepsi og neurodegenerative forstyrrelser. Det er imidlertid teknisk vanskelig å få EEG-opptak hos nyfødte som det krever spesialisert håndtering og stor omhu. Her presenterer vi en ny metode for å registrere EEG hos nyfødte rottepupper (P8-P15). Vi laget en enkel og pålitelig elektrode ved hjelp av PC-pin-loci; Det kan enkelt bli implantert i skallen av en rottepupp for å registrere EEG-signaler av høy kvalitet i normal og epileptisk hjerne. Valpene fikk en intraperitoneal (ip) injeksjon av nevrotoksin kainsyre (KA) for å indusere epileptiske anfall. Den kirurgiske implantasjonen som utføres i denne prosedyren, er billigere enn andre EEG-prosedyrer for nyfødte. Denne metoden gjør det mulig å registrere høy kvalitet og stabile EEG-signaler i mer enn 1 uke. Videre kan denne prosedyren også brukes på voksen raTs og mus for å studere epilepsi eller andre nevrologiske lidelser.

Introduction

Det er godt etablert at kontinuerlig kommunikasjon mellom nevroner er nødvendig for å oppnå normal hjernefunksjon. Den interneuronale kommunikasjonen foregår primært ved synaps, hvor informasjon fra en neuron blir formidlet til et andre neuron. Denne synaptiske overføringen er formidlet av to typer dedikerte strukturelle arrangementer: elektriske eller kjemiske synapser 1 . Elektrofysiologi er feltet som fanger det elektriske potensialet som produseres under interneuronal kommunikasjon som styrer overordnede kroppsfunksjoner og oppførsel 2 . EEG er den mest brukte metoden blant mange elektrofysiologiske teknikker.

EEG er en teknikk som brukes til å oppdage endringer i elektriske signaler produsert av interne eller eksterne stimuli. Videre er det en viktig test for klinisk diagnose og utfallsprognose av ulike nevrologiske forhold som epilepsi, Parkinsons og Alzheimers sykdommerE, samt virkninger av farmakologiske og toksikologiske midler 3 . Generelt viser en epileptisk pasient hyperexcitability og nedsatt funksjonell tilkobling i hjernen; Disse er oppsummert som interictal epileptiform utslipp (IED) og kan registreres av EEG i form av skarpe, forbigående pigger; Skarpe bølger; Spike-bølge komplekser; Eller polyspikes 4 . Hovedtrekket i epileptisk hjerne er den spontane forekomsten av epileptiske anfall, som kan registreres enten fra hodebunnen eller fra hjernens parenchyma for å lokalisere hjerneområdet som er ansvarlig for anfallene 5 . Videre har EEG også svært viktige implikasjoner i nevrodegenerative forstyrrelser som Alzheimers sykdom (AD). Forskning tyder på at endrede EEG-opptak og svekkede oscillatoriske nettverk hos AD-pasienter er vanlige. Men vår kunnskap om patofysiologi av nettverksoscillasjoner i neurodegenerative sykdommer jegEr overraskende ufullstendig og må undersøkes nærmere 6 .

I denne protokollen har vi designet en enkel elektrode som man kan registrere EEG for å forstå den elektriske kommunikasjonen i både den normale og den patologiske hjernen. Den kirurgiske implantasjonen i denne metoden er billigere enn andre tilgjengelige prosedyrer 7 . Videre kan denne metoden brukes til å registrere høye og stabile EEG-signaler for lengre tidsrammer ( dvs. 2-4 timer hver dag i 1 uke). I tillegg brukte vi lettere elektroder (veier ca 26 mg) som gjør at dyrene oppfører seg mer naturlig 8 . Denne metoden er allment gjeldende for studier av EEG hos nyfødte rottepupper som krever forsterker og digitaliseringsapparat, som ofte brukes i elektrofysiologi-laboratoriet og krever ingen tilleggsutstyr.

Protocol

Dyrpleie, kirurgisk prosedyre og innspillingsprosedyrer var i samsvar med retningslinjene for Dyrepleie- og brukskomiteen i Sør-Kina. 1. Elektrodeforberedelse (Figur 1A-C) MERK: Computer pin loci er rett og slett en ledet kontakt som en del av signalgrensesnittet i kommunikasjonsenheter. Den består av en mannlig kontakt som plugger inn i kvinnekontakten. Fjern forsiktig mann- og hunspinnene fra datamaskinstiften loci ( figur 1A ) ved…

Representative Results

Hvis de ovennevnte kirurgiske prosedyrene utføres på riktig måte, vil en neonatal pup-EEG-opptak med en kanal, bli utført med suksess. 10 min etter KA-injeksjonen, oppstod et vanlig mønster av atferdsmessige tegn i form av uregelmessige bevegelser og riper, tremor og tap av balanse. Figur 2 viser de representative rå EEG-sporene og interiktale, ictal-tonic og ictal-clonic utvidede spor. Gjentatte interictale og ictal EEG utladningsmønstre startet 15-60 min (30 ± 5,2 min, gj…

Discussion

Her rapporterer vi kirurgiske og innspillingsprosedyrer for å skaffe EEG i fritt bevegelige neonatale rottepupper ved hjelp av kablet metode ( Figur 3 ). Det har blitt foreslått at P7-P12 rottepuppen er i utviklingsalderen som tilsvarer en fullstendig human neonat 10 , 11 . Det er teknisk vanskelig å skaffe EEG-innspillingsdata av høy kvalitet når de arbeider med rottepups i denne aldersgruppen. I tillegg krever det spesialisert håndtering…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dette arbeidet ble støttet av Natural Science Foundation of China (31171355) og Natural Science Foundation of Guangdong (S2011010003403, 2014A030313440).

Materials

Computer pin
Pincer DELI Group Co., Ltd.
502 super glue DELI Group Co., Ltd. 7144
Drying oven Boxun GZX-9140MBE
Isofluorane RWD Life Science 902-0000-522
Stereotaxic apparatus RWD Life Science 900-0068-507
Anesthesia apparatus RWD Life Science 902-0000-510
Homeothermic Heating Device Harvard Apparatus K 024509
Amplifier Model 3000  A-M Systems 61558
Micro1401 Analog Digital converter Cambridge Electronic Design Ltd. 4383 Data acquisition unit
Spike2 Cambridge Electronic Design Ltd.

Referencias

  1. Pereda, A. E. Electrical synapses and their functional interactions with chemical synapses. Nat Rev Neurosci. 15 (4), 250-263 (2014).
  2. Chorev, E., Epsztein, J., Houweling, A. R., Lee, A. K., Brecht, M. Electrophysiological recordings from behaving animals–going beyond spikes. Curr Opin Neurobiol. 19 (5), 513-519 (2009).
  3. Freeborn, D. L., McDaniel, K. L., Moser, V. C., Herr, D. W. Use of electroencephalography (EEG) to assess CNS changes produced by pesticides with different modes of action: effects of permethrin, deltamethrin, fipronil, imidacloprid, carbaryl, and triadimefon. Toxicol Appl Pharmacol. 282 (2), 184-194 (2015).
  4. Werhahn, K. J., Hartl, E., Hamann, K., Breimhorst, M., Noachtar, S. Latency of interictal epileptiform discharges in long-term EEG recordings in epilepsy patients. Seizure. 29, 20-25 (2015).
  5. Staba, R. J., Stead, M., Worrell, G. A. Electrophysiological biomarkers of epilepsy. Neurotherapeutics. 11 (2), 334-346 (2014).
  6. Nimmrich, V., Draguhn, A., Axmacher, N. Neuronal Network Oscillations in Neurodegenerative Diseases. Neuromolecular Med. 17 (3), 270-284 (2015).
  7. Zayachkivsky, A., Lehmkuhle, M. J., Dudek, F. E. Long-term Continuous EEG Monitoring in Small Rodent Models of Human Disease Using the Epoch Wireless Transmitter System. J Vis Exp. (101), e52554 (2015).
  8. Zayachkivsky, A., Lehmkuhle, M. J., Fisher, J. H., Ekstrand, J. J., Dudek, F. E. Recording EEG in immature rats with a novel miniature telemetry system. J Neurophysiol. 109 (3), 900-911 (2013).
  9. Dzhala, V. I., et al. NKCC1 transporter facilitates seizures in the developing brain. Nat Med. 11 (11), 1205-1213 (2005).
  10. Tucker, A. M., Aquilina, K., Chakkarapani, E., Hobbs, C. E., Thoresen, M. Development of amplitude-integrated electroencephalography and interburst interval in the rat. Pediatr Res. 65 (1), 62-66 (2009).
  11. Savard, A., et al. Involvement of neuronal IL-1beta in acquired brain lesions in a rat model of neonatal encephalopathy. J Neuroinflammation. 10, 110 (2013).
  12. Cuaycong, M., et al. A novel approach to the study of hypoxia-ischemia-induced clinical and subclinical seizures in the neonatal rat. Dev Neurosci. 33 (3-4), 241-250 (2011).
check_url/es/55489?article_type=t

Play Video

Citar este artículo
Huo, Q., Tabassum, S., Misrani, A. A., Long, C. Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method. J. Vis. Exp. (123), e55489, doi:10.3791/55489 (2017).

View Video