의 검출을위한 자석 교반기 방법<em> 선모충</em근육 샘플에서> 애벌레
Summary
많은 나라에서 인간 trichinellosis 방지 전세계 교반기 방법 금 표준 간주되는 소화의 방법에 의해 감염 동물의 근육 샘플의 실험실 시험에 기초한다.
Abstract
Trichinellosis 인간의 쇠약 질환과 속 선모충의 선충 유충에 감염된 동물의 원시 또는 덜 익힌 고기의 소비로 인해 발생합니다. 인간 감염의 가장 중요한 소스는 전 세계 게임 고기와 돼지 고기 나 돼지 고기 제품입니다. 많은 나라에서, 인간 trichinellosis 예방은 감염 동물 사체로부터 근육 시료의 인공 소화에 의해 감염된 동물의 식별에 기초한다.
고기의 소화하지만, 자석 교반기 방법이 황금 표준으로 간주됩니다에 따라 여러 가지 방법이 있습니다. 이 방법은 근육 샘플 및 후속 여과 및 침전 단계의 효소 분해 후 현미경으로 선모충의 유충의 검출을 할 수 있습니다. 이 방법은 특별한 고가의 장비를 필요로하지 않지만, 내부의 제어 장치는 사용할 수 없다. 따라서, 엄격한 품질 관리는있는 수정되어야한다테스트를 통해 거라고. 본 연구의 목적은 세부 처리 지침 및 기생충에 대한 유럽 연합 (EU) 참조 약국 및 선모충 독일의 국립 참조 연구소의 경험을 바탕으로 애널리스트의 방법의 중요 관리 점을 제공하는 것입니다.
Introduction
속 선모충의 선충은 전 세계적으로 육식 동물과 잡식 동물 포유류, 조류, 파충류의 가로 무늬 근육에서 검출 될 수있다. 이러한 동물 매개 선충 돼지, 말에서 인간 원료 또는 반 원시 고기와 고기 파생 된 제품을 도달 할 수 있습니다, 게임 동물은 섭취한다. 이 인수 공통 전염병은 pathognomonic 징후와 증상, 예를 들어, 설사, 발열, 눈 주위 부종과 근육통 및 심근염, 혈전 색 전성 질환과 뇌염 1 가능한 합병증을 특징으로 인체에 심각한 질병이 될 수 있습니다.
선모충은 야생 및 국내 동물 선모충 감염의 가장 광범위 병인 에이전트이며, 전 세계적으로 인간 감염의 대부분을 발생합니다. 유럽, 북미 및 서부 아프리카, 서아시아에서 선모충의 britovi 인간 감염의 또 다른 근원이다. 또한 10 개의 다른 분류군 덜 일반적 원인으로보고있다 인간 질병의 에이전트는 일반적으로 야생 동물 2, 세계의 다른 지역에서 발견된다. 이러한 멧돼지, 곰, 바다 코끼리와 오소리 등 야생 동물뿐만 아니라, 돼지 고기는 전 세계적으로 인간 감염의 가장 중요한 소스를 나타냅니다.
trichinellosis을 방지하는 가장 좋은 방법은 원시 육류 제품을 먹는 자제하고 고기, 안전 온도 (특히 게임 고기를 요리하다> 65 ° C 1 분 동안, 즉의 핵심에 갈색에 핑크에서 고기 색상을 변경하려면 고기 제품) 3. 유럽 연합 (EU)과 USDA은 고기 4, 5 T.의 spiralis 유충을 죽이는 데 사용 할 수 있습니다 돼지 고기 제품에 대한 동결 및 조리 시간과 온도를 지정했습니다. 또한, 육류 및 육류 제품에 선모충의 비활성화에 대한 권장 사항은 Trichinellosis에 관한 국제위원회가 발표되었다"외부 참조"> 6. 유럽에서는, 선모충 감염의 위험성을 무시할 상업용 돼지 무리의 제어 하우징 조건의 도입에 더하여, 인간 trichinellosis 예방은 감염 동물 사에서 근육 샘플의 실험실 시험에 기초한다.
식품 안전을 위해 소화 분석 고기 3, 7 선모충 유충의 직접 검출을위한 신뢰할 수있는 유일한 방법이다. 소화 분석의 여러 가지 변형이 있더라도 교반기 방법은 국제적으로 인정 된 기준 방법 3, 4, 7이다. 이 분석은 가로 무늬 근육 조직에서 선모충의 유충의 검출을 기반으로합니다. 근육 샘플의 효소 분해 및 후속 여과 및 침전 단계 후 트라이chinella 유충은 현미경으로 식별됩니다. 무역 의무와 국내법에 따라, 자석 교반기 메소드의 범용 프로토콜에서 작은 변화의 다수가 있습니다. 여기에, 기술적 인 세부 사항은 유럽 연합 (EU)의 요구 사항 4, ISO 규격 8, ICT 가이드 라인 (6) 및 기생충 (EURLP)에 대한 유럽 연합 (EU) 참조 연구소의 경험과 선모충에 대한 독일의 참조 연구소를 기반으로합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
교반기 방법을 용이하게 수행 할 수 있지만, 엄격 기술적 세부 사항을 준수하지 않는 것은, 따라서 소비자의 건강을 위태롭게 충분한 감도로 이끈다. 임계 제어 지점은 위의 텍스트에서 강조되고있다. 또한, 해당 장치의 사용은 시험의 성공적인 결과에 매우 중요하다. 모든 선박들은 표면 애벌레의 부착을 감소시키는 실리콘 코팅 유리 피펫 팁 만들어 져야한다.
소화 방법의 민감도는 근육의 유충 밀도 시험 근육 시료의 양에 따라 달라진다. (3)의 유충 밀도 – 근육 조직 5 LPG, 100 %의 민감도가보고 되었으나 한 LPG보다 감도가 40 % (13)에 떨어 뜨렸다. 테스트 된 숙주 동물의 종에 따라 시험의 민감도가 사용 시료의 양을 증가시킴으로써 향상시킬 수있다. 제 i야생 동물 nfection 부담 때문에 더 큰 샘플 크기는 14을 사용, 일반적으로 낮다. 취향 사이트는 또한 호스트 동물마다 다릅니다. 여기서, 또한 큰 샘플을 초래할 수 혀 고려할 필요 같은 일부 근육 조직의 하부 소화율은 15 크기.
또한, 자석 교반기 방법은 내부 제어를 포함하지 않는다는 것을 이해하는 것이 중요하다. 따라서, 문서에 대한 샘플링에서 품질 보증 관리는 정확하고 정밀한 결과를 얻기 위해 필수적이다. 근육 샘플 선모충 유충을 검출하는 기관 성능의 품질 능력 시험에서 각 분석 정기적 참여에 의해 모니터링한다.
방법의 또 다른 한계는 현미경으로 근육 애벌레의 최종 식별 단계는 매우 주관적 및 난방입니다입니다심사 분석에 의해 애벌레 형태의 지식에 vily 의존.
이 문제를 회피하는 흥미로운 또 다른 방법은 라텍스 응집 시험으로 애벌레 검출 다음 필터 분리에 자석 교반기 방법 /입니다. 그러나 EU 법규에 따라이 방법은 같은 멧돼지 4로 국내 돼지하지만 감염의 위험이 높은 동물 고기의 테스트에 해당하는 것으로 간주됩니다. 모노클로 날 항체와 항원 유생의 식별은 시험보다 대물 수 있지만, 기관 고기를 16 그램 당 유충의 수를 결정하는 가능성을 부정한다.
자석 교반기 방법의 또 다른 변화는 기계적으로 지원 풀링 된 샘플 소화 방법 / 침전 기술, 기계적으로 지원 풀링 된 샘플 발굴 포함필터 분리 기술에 estion 방법 / 최대 35g 기술의 풀링 된 샘플에 대한 자동 소화 방법. 이들 기술은 모두 고기 선모충 유충의 시각화 및 계산의 인공 소화에 기초하지만, 여과 및 침전 단계에 사용되는 기기 상이된다.
분리 된 유충은 또한 분자 시험 (예를 들어, 다중 PCR) (17)에 의해 종 레벨에서 식별 될 수있다. EU 법률에 따르면, 모든 긍정적 인 샘플은 선모충 종 판별을 위해 국가 참조 실험실 또는 EURLP에 전달해야합니다.
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 친절 우수한 기술 지원 및 지원 사빈 Reckinger 감사합니다.
Materials
| Knife,Scissors, Tweezers | Cutting samples and removing non-digestible tissue | ||
| Blender | With a sharp chopping blade | ||
| Magnetic stirrer | With thermostatically controlled heating plate | ||
| Stirring Rod | Teflon-coated, approximately 5 cm long | ||
| Conical glass separation funnel | Capacity of at least 2 litres, preferably fitted with Teflon safety plugs. The width should not be larger than 55% of the length to allow a good larva sedimentation | ||
| Stands, rings and clamps | |||
| Sieve | Mesh size 180 microns, external diameter 11 cm, with stainless steel mesh | ||
| Funnel | Internal diameter not less than 12 cm, to support the sieves | ||
| Glass beaker | Capacity 3 litres | ||
| Glass measuring cylinder | Capacity 50 to 100 ml, or centrifuge tube | ||
| Stereo-microscope | With a substage transmitted light source of adjustable intensity or trichinoscope with a horizontal table | ||
| Petri dishes | 9 cm diameter, marked on their undersides into 10 × 10 mm square examination areas using a pointed instrument or a larval counting basin for the tricinoscope | ||
| Aluminium foil | Alternatively a lid to cover the beakers | ||
| 25 % hydrochloric acid | |||
| Pepsin | Strength: 1:10 000 NF (US National Formulary) corresponding to 1:12 500 BP (British Pharmacopoeia) and to 2 000 FIP (Fédération internationale de pharmacie), or stabilised liquid pepsin with minimum 660 European Pharmacopoeia units/ml | ||
| Ethanol | 70-90% ethyl alcohol | ||
| Tap water | Heated to 46-48 °C before use | ||
| Balance | Accurate to at least 0.1 g | ||
| Metal tray | Capacity 10 to 15 litres, to collect the remaining digestive juice | ||
| Pipettes and pipette holder | Different sizes (1, 10 and 25 ml) | ||
| Thermometer | Accurate to 0.5 °C, temperature range at least from 20 ° C to 70 ° C | ||
| Siphon | For tap water |
Referencias
- Gottstein, B., Pozio, E., Nöckler, K. Epidemiology, Diagnosis, Treatment, and Control of Trichinellosis. Clin. Microbiol. Rev. 22, 127-145 (2009).
- Pozio, E., Murrell, D. K. Systematics and epidemiology of Trichinella. Adv. Parasitol. 63, 367-439 (2006).
- 9 CFR Part 318.10 – Prescribed treatment of pork and products containing pork to destroy trichinae. U.S. Government Publishing Office Available from: https://www.gpo.gov/fdsys/pkg/CFR-2016-title9-vol2/pdf/CFR-2016-title9-vol2-sec318-10.pdf (2012)
- Gamble, H. R., et al. International Commission on Trichinellosis: recommendations on methods for the control of Trichinella in domestic and wild animals intended for human consumption. Vet. Parasitol. 93 (3-4), 393-408 (2000).
- Gajadhar, A. A., Forbes, L. B. An internationally recognized quality assurance system for diagnostic parasitology in animal health and food safety, with example data on trichinellosis. Vet. Parasitol. 103, 133-140 (2002).
- Nöckler, K., Kapel, C. M. O. Chapter 3, Detection and surveillance for Trichinella: meat inspection and hygiene, and legislation. FAO/WHO/OIE Guidelines for the surveillance, management, prevention and control of trichinellosis. , 69-98 (2007).
- Boch, J., Schnieder, T., Supperer, R. . Veterinärmedizinische Parasitologie. , (2006).
- Despommier, D. D., Müller, M. The stichosome and its secretion granules in the mature muscle larva of Trichinella spiralis. J. Parasitol. 62 (5), 775-785 (1976).
- Marucci, G., Interisano, M., La Rosa, G., Pozio, E. Molecular identification of nematode larvae different from those of the Trichinella genus detected by muscle digestion. Vet Parasitol. 194, 117-120 (2013).
- Forbes, L. B., Gajadhar, A. A. A validated Trichinella digestion assay and an associated sampling and quality assurance system for use in testing pork and horse meat. J. Food Prot. 62, 1308-1313 (1999).
- Malakauskas, A., et al. Molecular epidemiology of Trichinella spp. in three Baltic countries: Lithuania, Latvia, and Estonia. Parasitol. Res. 100 (4), 687-693 (2007).
- Kapel, C. M., Webster, P., Gamble, H. R. Muscle distribution of sylvatic and domestic Trichinella larvae in production animals and wildlife. Vet. Parasitol. 132 (1-2), 101-105 (2005).
- Interisano, M., et al. Validation of a latex agglutination test for the detection of Trichinella infections in pigs. Vet. Parasitol. 194, 121-124 (2013).
- Pozio, E., La Rosa, ., G, PCR-derived methods for the identification of Trichinella parasites from animal and human samples. Methods Mol. Biol. 216, 299-309 (2003).
