Human Lung dendritische cellen: ruimtelijke verdeling en fenotypische Identification in Endobronchiale biopten middels immunohistochemie en flowcytometrie

De longen zijn voortdurend in contact met de buitenomgeving en zijn zeer gevoelig voor zowel onschadelijke deeltjes en microben met het vermogen om ziekte te veroorzaken. Daarom is het essentieel voor het immuunsysteem potente immune responsen tegen binnendringende pathogenen te monteren, maar het is even belangrijk om tolerantie te behouden om geïnhaleerde antigenen die geen ziekte veroorzaken. Potente immune surveillance, wordt het ademhalingssysteem bekleed met een netwerk van immuuncellen, waaronder dendritische cellen (DCs). DCs zijn professionele antigeenpresenterende cellen met het unieke vermogen om naïeve T-cellen te activeren. In menselijke longen, resident DC treedt een antigeen en vervolgens verwerken en transporteren deze naar de long-drainerende lymfeknopen voor presentatie aan en activering van T-cellen ^{1, 2, 3.}

In het menselijke immuunsysteem, kan DCs worden onderverdeeld in verschillende subgroepen, met Distinct maar overlappende functies: cd1c ⁺ en CD141 ⁺ myeloïde DCs (MDCs) en CD123 ⁺ plasmacytoide DCs (PDC's) ^{4, 5.} Terwijl de meest gedetailleerde kennis over humane DCs afkomstig uit studies in bloed, is het nu duidelijk dat de menselijke longen ook haven zeldzame populaties van DC subsets met T-cel stimulerende capaciteit ^{6, 7, 8, 9.} Echter, accumuleren gegevens blijkt dat immuuncellen, zoals DCs verschillen in frequentie, fenotype en functie afhankelijk van de anatomische locatie ^10. Derhalve is het belangrijk om immuuncellen bestuderen van de desbetreffende weefsel hun bijdrage aan lokale immuniteit en tolerantie begrijpen. Bij elkaar genomen, dit onderstreept de noodzaak om long-resident DCs studeren bij de aanpak van longziekten, ondanks het bloed DC's die meer direct beschikbaar en toegankelijk bij mensen.

De eerste studies die long-DCs resident bij mensen onderzocht zich primair op morfologie en de expressie van één markers, zoals HLA-DR en CD 11 c, in weefselsecties middels immunohistochemie ^{11, 12, 13.} Daarentegen recentere studies doorgaans gebruikt flowcytometrische analyses verschillende immuuncelsubklassen bestuderen. Aangezien het moeilijk is om een ​​celoppervlak marker die uniek identificeert een bepaald DC deelverzameling vinden potentiële beperking van studies die alleen vier kleuren flowcytometrie is het risico van het opnemen celpopulaties met gelijke fenotypische markers als DCs. Zo wordt CD11c uitgedrukt op alle myeloïde DC en de meeste monocyten. Anderzijds, in studies toepassing geavanceerdere flowcytometrie panelen werden goedaardige longweefsel van chirurgische resectie patiënten typisch gebruiktxref "> ^{10, 14, 15, 16,} hoewel het onduidelijk is of deze zeldzame populaties werkelijk representatief DCs bij gezonde proefpersonen. Kortom, zijn studies grotendeels beperkt door het feit dat operatief verwijderd of volledig menselijk longweefsel schaars.

Om een ​​aantal van deze beperkingen te overwinnen, dit werk wordt beschreven hoe u een gedetailleerde analyse van de ruimtelijke verdeling en een fenotypische identificatie van DCs in mucosale endobronchiale biopsieën verkregen bij gezonde vrijwilligers die een bronchoscopie ondergaan, uit te voeren. Verschillende kleine biopten kunnen worden verzameld van elk individu en vervolgens kan worden ingebed voor het snijden en analyse met behulp van immunohistochemie of enzymatisch verteerd voor geavanceerde flowcytometrische analyse. Via long weefsel in de vorm van endobronchiale biopsieën verkregen bronchoscopies verleent het voordeel dat het mogelijk de st voerenUdy op gezonde vrijwilligers, anders dan open chirurgie van de longen die voor de hand liggende redenen, is beperkt tot patiënten die thoracale chirurgie. Bovendien het weefsel dat wordt bemonsterd tijdens een bronchoscopie van gezonde vrijwilligers fysiologisch normaal, in tegenstelling tot een niet-getroffen gebied van longweefsel bij patiënten met een longziekte. Anderzijds, de biopsieën zijn klein en het aantal cellen teruggehaald, zelfs als pooling meerdere biopten, beperkt het soort analyses kunnen worden uitgevoerd.

Hoewel de huidige werk richt zich op DCs, de beschreven kan direct worden uitgebreid methoden om andere (immuun) cellen van belang dat in het menselijk mucosale longweefsel wonen bevatten. Bovendien zijn de protocollen zijn ook direct van toepassing op monsters verkregen van patiënten die lijden aan pulmonaire ziekten waarbij bronchoscopie hoort bij stellen van de diagnose, zoals chronische obstructieve longziekte (COPD), sarcoïdose, of longkanker.