Summary

Detecção automática de altamente organizada Oscilações Theta no Murino EEG

Published: March 10, 2017
doi:

Summary

Theta activity in the hippocampus is related to specific cognitive and behavioral stages. Here, we describe an analytical method to detect highly-organized theta oscillations within the hippocampus using a time-frequency (i.e., wavelet analysis)-based approach.

Abstract

Teta actividade é gerado no sistema septohippocampal e podem ser gravados utilizando eléctrodos intrahipocampal profundas e implantável electroencefalografia (EEG) de radiotelemetria ou sistema de precintas abordagens. Farmacologicamente, hipocampo teta é heterogênea (ver teoria dualista) e podem ser diferenciadas em tipo I e tipo II theta. Estes subtipos de EEG individuais estão relacionadas com estados cognitivos e comportamentais específicas, tais como excitação, exploração, aprendizagem e memória, funções de integração maiores, etc Em doenças neurodegenerativas tais como a doença de Alzheimer, estrutural e alterações funcionais do sistema septohippocampal pode resultar em actividade teta prejudicada / oscilações. Uma análise quantitativa padrão do EEG do hipocampo inclui uma análise de frequência baseado Fast-Fourier-Transformation (FFT). No entanto, este procedimento não fornece detalhes sobre teta atividade em geral e altamente organizados oscilações teta em particular. A fim de obter DETAinformações iLED nas oscilações teta altamente organizados no hipocampo, desenvolvemos uma nova abordagem analítica. Esta abordagem permite a quantificação tempo e custo-efetivo da duração das oscilações teta altamente organizados e suas características de frequência.

Introduction

Theta atividade no cérebro está relacionada com diferentes estados cognitivos e funcionais, incluindo excitação, atenção, o movimento voluntário, o comportamento exploratório, o comportamento de atenção, aprendizagem e memória, a integração somatossensorial e movimento rápido dos olhos (REM) 1, 2. Principalmente, teta actividade rítmica como uma entidade pode ser gerada em diferentes regiões cerebrais e é altamente organizado e sincronizado como teta oscilações. Abaixo, vamos concentrar-se na análise e quantificação de teta atividade / oscilações que são gerados dentro do sistema septohippocampal 3, 4. Dentro do septo, gabaérgica, projecto glutamatérgicos e neurónios colinérgicos no hipocampo e contribuir para a iniciação e manutenção de teta comportamento oscilatório. Há uma discussão se a oscilações do hipocampo teta são iniciadas no septo, ou seja, </em> O modelo do septo pacemaker-hipocampal seguidor, (teoria extrahippocampal) ou intrinsecamente dentro do hipocampo (teoria intra-hipocampal) 5, 6, 7.

Independentemente da sua origem, oscilações teta do hipocampo têm sido no foco de interesse durante anos, particularmente em modelos de camundongos transgênicos. Estes modelos permitem a implantação de eletrodos de EEG profundas e para a gravação de oscilações teta do hipocampo sob tarefas cognitivas e comportamentais específicas 8. oscilações do hipocampo teta são heterogéneos na natureza. Com base na assim chamada teoria dual de teta de oscilações, pode-se diferenciar entre sensível à atropina tipo II e atropina teta-teta insensível tipo I 9, 10, 11. Este último pode, tipicamente, ser induzida por M muscarínico 1 / M <sagonistas> 3 receptores ub, por exemplo, arecolina, pilocarpina, e uretano. No entanto, uretano é uma droga multi-alvo que, além de ativação muscarínica, também exerce efeitos complexos em outras entidades de canais iônicos. Para o tipo II theta, a via muscarínico inclui a ativação de M 1 / M 3 e um subsequente G q / 11 (Gu) activação mediada da fosfolipase C β 1/4 (PLCβ 1/4), inositol trifosfato (INSP 3) , diacylglycerole (DAG), Ca2 +, e a proteína quinase C (PKC). O papel da PLCβ 1 e PLCβ 4 em thetagenesis foi validado em estudos de knock-out usando PLCβ1 – / – e PLCβ4 – / – ratos que apresentam uma perda completa ou atenuação significativa da teta oscilação 12, 13, 14. M adicional de 1, M 3 e M 5 alvos a jusante (channels / correntes) da cascata de sinalização incluem vários muscarínico condutâncias, tais como a M-tipo de canal de K + (K H) através do canal de K + dependentes de voltagem (K v 7); lento depois hiperpolarização K + canal (Ks AHP); vazar K + canal (vazamento K), provavelmente através Twik relacionadas com K sensível ao ácido + canal (TASK1 / 3); atual catiônica (I CAT), provavelmente através de Na + canal de vazamento (NALCN); e I h através hiperpolarização e canais de nucleótidos cíclicos fechado (HCN). Além disso, foram relatados os receptores H 2 / H 4 acetilcolina (AChRs) para interferir com rectificador de entrada canal de K + 3.1 (IR K 3.1) e para dentro canal de K + rectificador 3.2 (IR K 3.2) 15.

Atualmente, software analítico disponível no mercado permite a análise rápida baseada em FFT frequência, por exemplo, a análise do poder (P, mV 2)ou a densidade do espectro de potência (PSD, mV 2 / Hz). Poder ou análise de densidade de espectro de potência (PSD) da faixa de freqüência teta só dá uma visão global da sua actividade. No entanto, a fim de obter uma visão detalhada sobre a atividade theta cognitivo e relacionados com o comportamento de, a análise das oscilações teta altamente organizados é obrigatória. A avaliação das oscilações teta altamente organizados é de importância central no domínio das doenças neurodegenerativas e neuropsiquiátricas. A maioria dos estudos de doenças experimentais são realizados em modelos de ratos transgénicos utilizando abordagens neurocirúrgicas altamente sofisticados para gravar superfície epidural e EEGs intracerebrais profundas. Essas técnicas incluem ambos os sistemas tirante 16 e configurações radiotelemetric 17, 18. oscilações teta pode ser gravado como oscilações teta espontâneas e afins-comportamentais em condições de gravação de longo prazo. Além disso, teta oscilações pode ser recorded após a indução farmacológica, mas também após a exposição dos animais a tarefas comportamentais ou cognitivas ou a estímulos sensoriais, como a cauda de beliscar.

Cedo se aproxima para caracterizar teta oscilações foram descritos por Csicsvari et ai. 19. Os autores concebido uma ferramenta semi-automatizada para análise teta de curto prazo (15 – 50 min), que não é adequado para gravações de EEG de longa data. O nosso método, descrito aqui, permite a análise do registo de EEG de longa duração> 48 h 20. Csicsvari et ai. 10 também se refere ao rácio de teta-delta, mas nenhum limite para a determinação de oscilações teta altamente organizado é fornecida. As definições de gama delta e teta coincidir com as nossas definições de faixas de freqüência. Como não é explicitamente mencionada, presumimos que um método baseado em FFT é usado por Csicsvari et al. para calcular o poder das faixas de frequências teta-delta. estenovamente difere claramente do nosso método, uma vez que calcular as amplitudes baseado no wavelet em um grande número de escalas de frequência (frequência Δ passos (f) = 0,05 Hz), resultando em muito mais elevado de precisão. A duração do epoch EEG individualmente analisada é semelhante à nossa definição.

Klausberger et ai. 21 também fazer uso de proporções de teta-delta para a análise de EEG de longo prazo. No entanto, existem três diferenças importantes, em comparação com a nossa abordagem: i) a duração epoch EEG é muito mais longo, ou seja, pelo menos, 6 s; ii) a razão de teta-delta é ajustado para 4, o qual é muito maior do que a nossa limiar, e está relacionada com a diferentes definições de faixa de frequências; e iii) a definição de potência é susceptível de ser baseada numa abordagem FFT, que carece de alta precisão, particularmente para janelas de tempo muito curto (2 s, ou seja, a 5 ciclos de oscilações com uma frequência de 2,5 Hz). Em tais casos, um procedimento baseado no wavelet é mais recomendável.Um estudo realizado por Caplan et al. 22 calculado apenas poder teta ignorando a razão de poder teta-delta. Assim, a aproximar Caplan 22 não é possível diferenciar entre processos cognitivos rico-teta acompanhados por um delta alto ou baixo.

No protocolo seguinte, apresentaremos a nossa abordagem baseada em wavelet analítica para analisar de forma confiável oscilações teta altamente organizados em gravações de EEG do hipocampo de ratos. Uma vez que este procedimento funciona automaticamente, que pode ser aplicado a grandes conjuntos de dados e medições EEG longo prazo.

Protocol

Todos experimentação animal foi realizada de acordo com as orientações do Conselho local e institucional on Animal Care (Universidade de Bonn, BfArM, LANUV, Alemanha). Além disso, toda a experimentação animal foi realizada em conformidade com a legislação superior, por exemplo, a Directiva Comunidades Europeias de 24 de Novembro de 1986 (86/609 / CEE), ou a legislação regional ou nacional individual. esforço específico foi feito para minimizar o número de animais utilizados, bem como o seu sofrime…

Representative Results

Teta actividade podem ser gravados em uma ampla gama de regiões do sistema nervoso central (SNC). Aqui, apresentamos uma análise da teta oscilações do hipocampo murino. Tais oscilações podem ocorrer em diferentes estados comportamentais e cognitivas. É altamente recomendável para analisar teta oscilações em ambas as de longo prazo, relacionado com a tarefa de curto prazo e as condições induzidas farmacologicamente espontâneas. A Figura 1 ilustra uma g…

Discussion

Theta atividade é de relevância central em neurofisiologia sistêmica. Pode ser observado em várias regiões do cérebro, particularmente no hipocampo, onde ela está relacionada com os estados comportamentais e cognitivas específicas. Além disso, teta do hipocampo pode ser farmacologicamente diferenciadas em sensível à atropina tipo II e tipo I teta atropina-insensível. Tipo I é pensado para ser relacionado a locomoção, tais como caminhar ou correr 27, <su…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

The authors would like to thank Dr. Christina Ginkel (German Center for Neurodegenerative Diseases, DZNE) and Dr. Robert Stark (DZNE) for their assistance with animal breeding and animal healthcare. This work was financially supported by the Federal Institute for Drugs and Medical Devices (Bundesinstitut für Arzneimittel und Medizinprodukte, BfArM), Bonn, Germany.

Materials

Carprofen (Rimadyl VET – Injektionslösung) Pfizer PZN 0110208208 20ml
binocular surgical magnification microscope Zeiss Stemi 2000 0000001003877, 4355400000000, 0000001063306, 4170530000000, 4170959255000, 4551820000000, 4170959040000, 4170959050000
Dexpanthenole (Bepanthen Wund- und Heilsalbe) Bayer PZN: 1578818
drapes (sterile) Hartmann PZN 0366787
70% ethanol Carl Roth 9065.5
0.3% / 3% hydrogene peroxide solution Sigma 95321 30% stock solution
gloves (sterile) Unigloves 1570
dental glas ionomer cement KentDental /NORDENTA 957 321
heat-based surgical instrument sterilizer F.S.T. 18000-50
high-speed dental drill Adeor SI-1708
Inhalation narcotic system (isoflurane) Harvard Apparatus GmbH 34-1352, 10-1340, 34-0422, 34-1041, 34-0401, 34-1067, 72-3044, 34-0426, 34-0387, 34-0415, 69-0230
Isoflurane Baxter 250 ml PZN 6497131
Ketamine Pfizer PZN 07506004
Lactated Ringer's solution (sterile) Braun L7502
Nissl staining solution Armin Baack BAA31712159
pads (sterile) ReWa Krankenhausbedarf 2003/01
Steel and tungsten electrodes parylene coated FHC Inc., USA UEWLGESEANND
stereotaxic frame Neurostar 51730M ordered at Stoelting
(Stereo Drive-New Motorized Stereotaxic)
tapes (sterile) BSN medical GmbH & Co. KG 626225
TA10ETA-F20 DSI 270-0042-001X Radiofrequency transmitter 3.9 g, 1.9 cc, input voltage range ± 2.5 mV, channel bandwidth (B) 1-200 Hz, nominal sampling rate (f) 1000 Hz (f = 5B) temperature operating range 34-41 °C warranted battery life 4 months
TL11M2-F20EET DSI 270-0124-001X Radiofrequency transmitter 3.9 g, 1.9 cc, input voltage range ± 1.25 mV, channel bandwidth (B) 1-50 Hz, nominal sampling rate (f) 250 Hz (f = 5B) temperature operating range 34-41 °C warranted battery life 1.5 months
Vibroslicer 5000 MZ Electron Microscopy Sciences 5000-005
Xylazine (Rompun) Bayer PZN: 1320422
Matlab Mathworks Inc. programming, computing and visualization software
SPSS IBM statistical analysis software

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Citar este artículo
Müller, R., Papazoglou, A., Soos, J., Lundt, A., Wormuth, C., Henseler, C., Ehninger, D., Broich, K., Weiergräber, M. Automatic Detection of Highly Organized Theta Oscillations in the Murine EEG. J. Vis. Exp. (121), e55089, doi:10.3791/55089 (2017).

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