la señalización sensorial y la percepción del dolor es un proceso complejo que resulta de una compleja interacción entre los nervios aferentes, neuronas espinales, ascendientes y descendientes vías facilitadoras e inhibidoras y varias regiones cerebrales diferentes. Como tal, los cambios en uno o más de estos niveles pueden resultar en la señalización sensorial alterada y dolor visceral en estados de enfermedad. Para el estudio de todos estos diferentes aspectos de la señalización sensorial múltiples se han desarrollado técnicas que van desde los experimentos de células individuales (por ejemplo, imágenes de calcio en las neuronas) para modelos animales enteros (por ejemplo, las respuestas de comportamiento, tales como la respuesta visceromotor). La técnica descrita en este documento permite a los investigadores para evaluar específicamente la actividad del nervio aferente in vitro a partir de un segmento aislado de intestino delgado o el colon en roedores. En resumen, un segmento gastrointestinal aislado (por lo general yeyuno o colon) está montado en una cámara de registro perfundida propósito construido con una K fisiológicosolución rebotes. El nervio esplácnico se diseca y se conecta a un electrodo permitir el registro de la actividad neuronal aferente en los nervios aferentes viscerales o pélvicos. La actividad del nervio puede ser grabada, basales o en respuesta a las crecientes presiones intraluminales y / o compuestos farmacológicos que se pueden aplicar ya sea directamente en la cámara de grabación (serosally), oa través de la perfusión intraluminal (la mucosa) para evaluar su efecto sobre la descarga aferente ^1-6 . Es de destacar que los nervios esplácnicos también contienen fibras aferentes y eferentes viscerofugal, además de los aferentes sensoriales. Una de las principales ventajas de la grabación nervio esplácnico ex vivo es el hecho de que los investigadores pueden cuantificar la actividad del nervio sin modulación o de entrada desde el sistema nervioso central, que permite una para estudiar el efecto directo de los compuestos aplicados de forma local en la actividad nerviosa. Además, el seguimiento de los parámetros vitales, como es necesario utilizar el enfoque in vivo (ver más abajo), es no Ya no es importante. In vitro grabación esplácnica es finalmente mucho menos tiempo que su contraparte in vivo.

actividad neuronal aferente en respuesta a otros estímulos, como frotación de la mucosa, de sondeo usando filamentos de von Frey o estiramiento del segmento, se puede estudiar en una configuración experimental modificado en el que se fija el tejido intestinal y abrió longitudinalmente (que está en contraste con nuestra configuración utilizando un segmento intacto), como se ha descrito en un número anterior ^7,8. Además, sólo recientemente, una técnica fue descrita para estudiar la activación del nervio aferente del colon en la pared del colon en sí a través de imágenes de calcio, de nuevo utilizando un inmovilizada, longitudinalmente abierto segmento ^9.

Una versión alternativa de esta técnica in vivo consiste de medir la activación neuronal cerca de la entrada del aferente en la médula espinal. En resumen, el animal sedado se coloca en la posición prona, exposing la médula espinal lumbosacra a la que el nervio aferente de los proyectos de interés por medio de la laminectomía, la construcción de una parafina lleno bien con la piel de la incisión y drapeado la rootlet dorsal sobre un electrodo de platino bipolar ^10,11. Esta técnica permite además a los investigadores caracterizar las fibras en base a su velocidad de conducción, y distinguen las fibras C no mielinizadas de Aδ fibras finas mielinizadas. Además, raicillas dorsal contienen exclusivamente fibras aferentes sensoriales, en contraste con los aferentes y eferentes nervios esplácnicos mixtos mencionados anteriormente.

Grabación de descarga del nervio aferente in vitro a partir de segmentos intestinales aislados también se puede hacer uso de muestras humanas, como dos grupos de investigación publicados de forma independiente manuscritos primeros-en-hombre registro de la actividad del nervio aferente del colon en la resección especímenes humanos ^12,13. La aplicación de esta técnica podría resultar en una mayor facilidad translatien los datos murinos al estado humano, y podría permitir a los investigadores a identificar fácilmente las drogas dirigidas a los nervios sensoriales sensibilizado. La importancia clínica de la caracterización de la actividad aferente del nervio, así como el descubrimiento de nuevos reactivos terapéuticos que se dirigen a la actividad del nervio aferente exorbitante, se ha discutido detalladamente por muchos expertos en el campo de ^{14 a 19.}

La mencionada técnica in vitro complementa el más comúnmente conocidos es la medición in vivo de la actividad aferente del nervio. Durante la medición de la actividad neuronal in vivo, la actividad del nervio se puede medir directamente en el animal sedado durante el cual se identifica el segmento de interés y posteriormente intubado, y una parafina llenas de líquido también se construye utilizando la pared abdominal y la piel del roedor ^20. a continuación, se identificó el nervio aferente de interés, se seccionaron y se coloca sobre un electrodo de platino bipolar, lo que permite MEDICIÓN actividad neuronalt. Esta técnica permite al investigador para modular la actividad del nervio aferente en vivir aunque los animales sedados; como tal, se puede estudiar la actividad neuronal en respuesta a las interferencias, tales como distensión luminal o la administración intravenosa de un compuesto.

La investigación traslacional se centra hoy en día principalmente en la aplicación de los sobrenadantes de origen humano (por ejemplo., A partir de biopsias de colon, células mononucleares de sangre periférica cultivadas, etc.) en yeyuno y / o del colon aferentes de ratón ^21,22. Los investigadores pueden aplicar directamente sobrenadantes ya sea en el baño de órganos o en la solución intraluminal que perfunde el segmento de intestino, de modo que los efectos diferenciales de la serosa frente a la aplicación de la mucosa se pueden estudiar en la descarga del nervio aferente. Como tal, se demostró que supernatans biopsia de la mucosa del colon de pacientes con síndrome del intestino irritable pueden causar hipersensibilidad en los aferentes de colon de ratón, conejillo de indias neuronas submucosas y de la raíz dorsal de ratónneuronas ganglionares ^21,23,24.

Por último, el registro de actividad neuronal no se limita a la mesentérica y / o las neuronas de la pelvis que inervan el tracto gastrointestinal. Otros han demostrado que las grabaciones de los nervios se pueden realizar en los aferentes suministro de la articulación de rodilla ^25, mientras que otros han caracterizado la actividad aferente del nervio vejiga, así ^26-28, y ha demostrado que los aferentes de la pelvis de la vejiga, así el tracto gastrointestinal convergen, resultando posiblemente en neuronal ²⁹ diafonía.