La inducción de la regeneración muscular esquelético aguda por inyección Cardiotoxin

músculos esqueléticos adultos de mamíferos están formados por grupos de fascículos de las células musculares multinucleadas (miofibras) que se especializan para la contracción. Cada miofibrilar es un sincitio alargada, rodeada por el sarcolema (membrana plasmática) y miofibrillas que contienen, que se compone de proteínas contráctiles organizadas regular y repetidamente (actina y miosina filamentos). En la vida adulta y en condiciones de reposo, los músculos esqueléticos tienen una muy baja rotación de su mionúcleos ^1; de hecho, los mionúcleos, que se encuentran en la periferia de la miofibras, bajo el sarcolema, son detenidas en la fase G0 del ciclo celular y son incapaces de proliferar ^1,2.

Los músculos esqueléticos tienen la capacidad peculiar de regenerarse después del daño, llegando a homeostasis después de varios acontecimientos de remodelación de tejidos que están estrechamente relacionados entre sí. Después de una lesión aguda o trauma, se induce la degeneración, seguida por los procesos de regeneraciónque implican diferentes poblaciones de células, incluyendo una población residente de las células musculares, las células satélite (SCS). En efecto, en ausencia de cualquier estímulo ambientales, las células satélite están en un estado de reposo y se encuentran en un nicho especializado entre el sarcolema y el ^3,4 lámina basal. Después de una lesión o enfermedad, SCs se activan, proliferan, migran a las zonas dañadas, y, finalmente, diferenciar, dando lugar a las miofibras de nueva formación ^5. SC activados establecen diafonía con diferentes poblaciones de células, células inflamatorias, principalmente, que son reclutadas en el sitio del trauma ^6-8. Esta diafonía permite que las células siguen un paradigma regulado por el cual las señales moleculares que conducen modificaciones estructurales, que finalmente llevan a la homeostasis ^9. Además de las SC, células inflamatorias e intersticiales, procesos angiogénicos, y eventos de re-inervación también están involucrados, actuando de manera coordinada para reparar este altamente organizado y specialized estructura.

Hay un gran interés en el estudio de los diferentes aspectos de la regeneración del músculo esquelético, no sólo para entender la fisiología del músculo, pero también para mejorar las estrategias terapéuticas que requieren conocimiento más profundo de todo el proceso. Varios enfoques experimentales están disponibles actualmente para estudiar la identidad y la función de las diferentes poblaciones de células, las vías de señalización, y los mecanismos moleculares implicados. Los modelos de ratón de lesión aguda representan una herramienta poderosa para investigar muchos aspectos de este proceso. Diferentes usados comúnmente técnicas para inducir daño muscular aguda permiten a los investigadores siguen el proceso de regeneración in vivo, desde las primeras etapas hasta el final del proceso. Este protocolo describe los pasos de la inyección intramuscular de cardiotoxina derivada de veneno de serpiente (CTX), que induce miólisis y desencadena el proceso de regeneración, hasta el análisis de muestras de tejido. Después de la inyección CTX, mice puede ser sacrificada en diferentes puntos de tiempo dependiendo de las necesidades experimentales, y los músculos del esqueleto puede ser disecado y procesada para su posterior análisis. Finalmente, se describe el protocolo de tinción de secciones de tejido para realizar observaciones morfológicas y análisis cuantitativos básicos. Este protocolo permite el estudio de la regeneración del músculo esquelético aguda in vivo de una manera altamente reproducible ^10.