中的应用<em>在体内</em>评定组织的鼠胫骨前的功能测试工程化骨骼肌修复

所有动物人道待遇，所有的协议是由弗吉尼亚IACUC的大学认可。 1.设备的准备确保所有机器都连接正确。 打开电脑，其次是高功率双相刺激和双模杠杆系统。 此时，将动物与2％异氟醚供给的麻醉室中，并把该加热元件上，以使平台被加热到37℃。 放置电极在70％乙醇，使涂布在聚四氟乙烯（PTFE）的提示被淹没并同时设置设备和软件将被消毒。 找到并在桌面上打开杠杆系统控制软件。 注意：这将是执行功能测试所需的软件。 2.软件安装一旦程序被打开（ 图1A），更改参数在设置菜单中为所需的值下S代表即时兴奋剂。 注意：在这个协议中，所有参数都保持在与“运行时间（s）”，它被改变为180秒（ 图1B）异常的预设水平。 创建设置菜单下自动保存的文件夹。 找到标有“自动保存基地”一个类型能够窗口。输入样品的名称，例如“RAT1 – 日期 – 时间点”。直接将“自动保存基地”类型能够窗口的左侧，单击框“启用自动保存”。 在控制屏幕的顶部，选择“序”。一个新的窗口将打开。在新窗口的底部，选择“打开序列”。一个新的窗口将打开。选择预制序列，然后单击确定。与序列参数，包括频率，刺激的持续时间和休息时间的协议列表将在指定的窗口发展：序列编辑器（ 图1C）。点击“加载序列” – >＆＃34，关闭窗口“。 要查看实时电流和刺激，选择“文件” – >“实时数据监控”。一个新的窗口将打开。 在新的实时数据窗口，格式屏幕用于通过使用自动缩放功能，或手动输入屏幕上显示的最大和最小y值的测试。 3.动物建立注：所有测力是那些一个11周大的Lewis大鼠的。有肌肉质量和力量产量（牛顿）之间的线性关系。因此，作为鼠的增加年龄，由腿产生的力的值应增加。 确保动物在麻醉的正常飞机从麻醉室后，再取出。彻底去除脚踝上，并使用电推剪实验腿骨盆之间的外侧所有的头发。 注：麻醉平面正确实现当动物我S非响应于一个脚趾捏。有必要按照各机构的动物护理和使用委员会提出的准则。 放置在仰卧位的动物，以确保动物的鼻子安全地处于麻醉鼻锥体，以便它保持在麻醉的足够的深度。 调节踏板装置由三个独立的旋钮（ 图2）的位置。使用旋钮（A和B）来调整脚踏板，放置在其最左和最低的位置分别在踏板装置。同时留下余地购买操作这将使动物的脚的正确定位。在这个位置上，可以使用在轨道的左侧的旋钮移动装置朝向或从实验者更远，使得动物腿位于一个直平面。 清洁用碘酒和酒精的三个转变的腿。碘应保持腿部30秒。 调整动物或平台（ 图2A中的D），以便扩展腿确保脚的鞋底和脚踏板之间的完全接触。 用医用胶布，对固定支板（ 图2D）动物的脚。至关重要的是，脚后跟是对踏板和整个脚的底部齐平是平坦的，在测试过程中不会从板去除。 定位夹紧机构以稳定的腿。通过转动扳手推到足够程度，减少腿部运动并锁住它的稳定销。 在该位置，使用旋钮C到移动装置或朝向或远离实验者使得踝关节，胫骨和股骨谎言在一条直线上（ 图2C）。确保该腿与脚踏板平行。使在球场上和在装置的背面的细旋钮调整，缓慢移动的踝使脚和胫骨是在90°的位置。 Continue移至腿部所以股骨和胫骨是在90度垂直的角度（ 图2B）。在这一点上，该动物是准备的电极。 4.电极的放置通过点击标有“即时兴奋剂”橙色按钮，激活“即时兴奋剂”。 放置两个电极表面上的胫骨前的近端和直到尖峰看出实况显示器上移动电极尖端。理想地，尖峰应该在0.4 N. 注意：电极应放在相邻并正交腓神经的平面，这反过来，横向从膝盖并垂直于胫骨上运行。 插入一针远远不够，皮尔斯真皮，勉强进入肌层。四处移动另一个电极，直到尖峰看到约0.6 N.插入针现场监视器上，并用夹子爱好或医用胶布它们夹紧到位。 一个djust粗，微调找到最大力量输出。 对高功率双相刺激，就会有在中心两个旋钮。一个标为“RANGE”和其他“调整”。打开“RANGE”旋钮，所需的最大电流。 注：峰将在幅度缓慢增加，最大电流被确定为在其中三个连续刺激导致相同收缩反应的水平。抵制转高于所需的电流;最大电流会刺激整个肌肉收缩，但任何更高的电流会导致肌肉邻国的招聘和潜在的拮抗剂为好。 旋转“调整”钮，将用于刺激肌肉的“RANGE”的百分比。在这一点上，力应改为1.0左右N.这可能需要在电流的增加或减少。 重新检查电极，以确保他们的安全。停止即时兴奋剂。 在“实时数据”窗口中，单击“启动序列。” 继续回到控制屏幕，并单击“分析”按钮位于橙色的“即时兴奋剂”按钮上方监测曲线。强直曲线应开始采取各地的60赫兹刺激的形状。 5.整理刺激和清理序列完成后，取出电极并擦拭干净，用70％的酒精。放置电极的封面。 解开膝盖夹紧并关闭麻醉。除去从麻醉气体的动物，并放置在俯卧位的动物，仍然在加热垫。维持100％O 2的老鼠为后异氟醚气体已被关闭，以保持含氧大鼠几分钟。动物最初可能会移动，但直到动物恢复了意识不返回动物回到笼子里。如果肌肉酸痛被发现在恢复，由动物保健委员会规定的应给予NSAID的剂量。 关闭所有在步骤1.2中列出的设备，关闭软件，并继续数据分析。 擦拭平台和脚踏板。 6.数据分析进行数据分析，以适应本实验室设计，并根据实验室协议的顺序：注意。分析值，重要性的数据点，并且该过程的其他方面将变化取决于用户的意图。 打开数据分析软件。 单击高通量菜单上在一个时间，以使多个数据文件（样品）的分析。选择“强制频率”分析。 点击“选择文件”按钮，然后根据需要打开多个保存的数据文件。 选择光标放置方法中的“说明书”。 注意：这将允许用户分析所有的DAT的一个所希望的时间戳记内，而不是在程序自动选择分析位置。 结束光标时间戳值更改为2.单击“分析”按钮（ 图1D）。 保存表和分析使用电子表格中的数据，点击“保存表到ACSII按钮，将保存文件，并可以在以后的电子表格打开。 打开电子表格保存的数据文件。 创建标记的“绝对最大”一个附加列，并确定基线和每个样品的最大值之间的差。这将提供在每个频率所产生的总的最大的力。 为了确定扭矩，由杠杆臂的长度乘以每个力值。 注意：在这种情况下，这将被动物的脚长度来表示。该协议使用30毫米的平均实验确定值。用户现在已经确定了马云的价值观在每个频率产生ximum转矩。 绘制这些值作为转矩频率曲线，或者，通过在所有刺激频率的动物产生的最大转矩。 注意：此可以识别并用作样品之间的比较的单点。