Detección Molecular rápida y diferenciación de virus gripales A y B
Summary
Se describe un ensayo rápido, a base de molecular Influenza A y B. El ensayo detecta la influenza cada objetivo en los 15 minutos mediante el empleo de amplificación isotérmica con cebadores específicos de la influenza, seguido de la detección de objetivos con sondas de baliza molecular. El ensayo de la gripe A y B es fácil de usar y requiere práctica en un mínimo de tiempo para llevar a cabo.
Abstract
La gripe es una enfermedad respiratoria contagiosa causada por el virus de la influenza A y B en los seres humanos y causa una cantidad significativa de la morbilidad y la mortalidad cada año. La influenza A y B del ensayo fue la primera prueba rápida de la gripe molecular CLIA renunciado disponible. La prueba de la gripe A y B funciona mediante el empleo de amplificación isotérmica con cebadores específicos de la influenza, seguido de la detección de objetivos con sondas de baliza molecular. Aquí, el rendimiento de la Influenza A y el ensayo B en congelado, archivadas hisopo nasofaríngeo (NPS) muestras almacenadas en medio de transporte viral (VTM) se compararon con un ensayo de panel de respiratoria.
El rendimiento del ensayo A y B de la gripe se evaluó mediante la comparación de los resultados con el método de referencia del panel respiratorio. La sensibilidad para el virus de la gripe A fue total de 67,5% (IC del 95% (IC), 56,6-78,5) y la especificidad fue del 86,9% (IC, 71,0 a 100). Para las pruebas de virus de la gripe B, la sensibilidad y la especificidad fueron del 90,2% (IC, 68,5-100) Y 98,8% (IC, 68,5 a 100), respectivamente.
Este sistema tiene la ventaja de un tiempo de prueba significativamente más corto que cualquier otro ensayo molecular actualmente disponibles y el procedimiento simple, libre de pipeta se ejecuta en un sistema totalmente integrado, cerrado, que ocupa poco espacio. En general, la influenza A y B de ensayo evaluados en este estudio tiene el potencial de servir como una prueba de diagnóstico rápido de la influenza en el punto de atención.
Introduction
Infecciones por virus de la influenza como resultado una cantidad significativa de la morbilidad y la mortalidad cada año 1, 2, 3. La gripe sin complicaciones se caracteriza por síntomas constitucionales y respiratorias, tales como fiebre, mialgia, dolor de cabeza y tos no productiva 4, 5. Las personas mayores, niños pequeños, pacientes inmunocomprometidos y pacientes con comorbilidades subyacentes están en un mayor riesgo de sufrir complicaciones graves como neumonía, miocarditis, enfermedad del sistema nervioso central, o la muerte 6, 7.
Infección de la gripe es único de otros virus respiratorios en ese pronta administración de la terapia antiviral dentro de las 48 h del inicio de los síntomas puede reducir la gravedad de la enfermedad y la longitud 8. La identificación rápida de la gripe también ha sidodemostrado reducir el uso de antibióticos innecesarios 9, 10. Además, los pacientes hospitalizados con infecciones por influenza deben ser colocados en habitaciones aisladas con las precauciones de control de infecciones. Sin embargo, las enfermedades respiratorias causadas por virus de la gripe no pueden ser difíciles de distinguir clínicamente de la gripe. Por esta razón, las pruebas de diagnóstico rápido y preciso para la influenza es muy importante para el manejo clínico del paciente.
Varios ensayos están disponibles para la detección e identificación de virus de influenza. Pruebas de detección de antígenos de la gripe rápido (RIDT) son ampliamente utilizados en la práctica clínica como pruebas de punto de atención, ya que son fáciles de usar y proporcionan resultados dentro de 15 a 30 minutos 11, 12; Sin embargo, sus sensibilidades varían ampliamente (10-80%), dependiendo del fabricante y de la población que se está probando, y el tipo influenza y subtyPE 13, 14, 15. Ensayos de fluorescencia directa (DFA) proporcionan sensibilidades superiores sobre RIDTs, pero el tiempo de procesamiento es mayor (~ 3 h) y deben ser completado por técnicos cualificados 16, 17. El cultivo del virus ha sido el estándar de oro para el diagnóstico de la gripe y ha mejorado la sensibilidad sobre ambos RIDTs y DFA 18. Sin embargo, el cultivo del virus de la gripe puede tomar de 2-14 d para completar, lo que disminuye su utilidad en la ayuda a la gestión de pacientes 19. Por último, las pruebas de amplificación de ácidos nucleicos (NAAT) han reemplazado a las técnicas de cultivo como el nuevo estándar de oro en el diagnóstico de la gripe. NAAT se considera que tienen la mayor sensibilidad para la detección de la gripe en un par de horas. Sin embargo, AEAC son los ensayos más caras y requieren equipos especializados y técnicos para llevar a cabo 5 <sarriba>, 20, 21, 22, 23, 24, 25.
El ensayo de la influenza A y B se describe aquí es la primera prueba rápida de la gripe molecular CLIA renunciado a que está fácilmente disponible. Este ensayo funciona mediante el empleo de una reacción nicking endonucleasa de amplificación (NEAR) que utiliza la amplificación isotérmica con cebadores específicos de la influenza, seguido de la detección de objetivos con sondas de baliza molecular. Este ensayo se diferencia de la gripe A de B, requiere 2 minutos para configurar y procesar una muestra, y requiere un total de 15 minutos para completar.
A continuación, presentamos el protocolo para el ensayo de influenza A y B. Además, proporcionamos un conjunto de datos de muestra comparando el rendimiento de la influenza A y B en el ensayo de frotis nasofaríngeo archivado (NPS) los especímenes almacenados en un medio de transporte viral (VTM) a otro panel de ensayo de patógenos respiratorios.
Protocol
Representative Results
Discussion
Los virus de influenza son importantes causas mundiales de morbilidad y mortalidad. El diagnóstico rápido y preciso de la gripe es una de las principales claves para manejar los brotes de gripe durante la temporada respiratoria. Otras pruebas basados en antígenos son rápidos y fáciles de realizar; sin embargo, tienen bajas sensibilidades 13. Por otra parte, las pruebas moleculares tradicionales han mejorado la sensibilidad, pero requieren técnicos de laboratorio más experimentados de…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We thank the Clinical Microbiology Service staff of the Memorial Sloan-Kettering Cancer Center for help in collecting clinical specimens. This study was supported in part by a research agreement between MSKCC and Alere Scarborough (SK2013-0262).
Materials
| Alere i Instrument | Alere | NAT-000 (Global), NAT-024 (US) | |
| Alere i Influenza A & B 24 Test Kit | Alere | 425-000 (Global), 425-024 (US) | |
| Alere i Barcode Scanner | Alere | EQ001001 | |
| Alere Universal Printer | Alere | 55115 (Global), alereiprinter (US) | |
| 200 µL precision pipette | |||
| 200 µL disposable pipette tips | |||
| Viral transport medium | Remel | M4-RT |
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