小鼠小肠淋巴细胞的分离和流式细胞表征

小肠的主要任务通常被认为是营养物¹的消化和吸收。虽然这种代谢功能显然必不可少的，小肠具有在保护宿主免受内腔²内发现的环境抗原的持续拦河坝同样显著作用。肠道隔开外界（ 例如 ，管腔抗原）从主机的使用本身是只有一个单一的电池层厚的上皮细胞层的内部环境。这样，小肠道免疫系统具有平衡其为反应性的阈值，允许从饮食和共生微生物外来抗原以最小的进入黏膜，如果有的话，免疫反应而安装对抗入侵的病原体和强大的响应的艰巨任务其他“有害的”抗原。到这些抗原过度或不适当的免疫应答可导致病理疾病（ 如 ，inflamma托里肠炎，I型糖尿病，多发性硬化），必须避免^3-6。

总体而言，在胃肠道被认为代表在体内最大的免疫器官，含有在所有抗体分泌细胞⁷的70％。小肠道免疫系统由3个主要的隔层-固有层（LP）时，上皮内层和Peyer氏斑（PPS） -每个包含淋巴细胞²的独特基团。在LP淋巴细胞（LPLs）主要^TCRαβ+ T细胞以〜20％的B细胞;上皮内淋巴细胞（IELs）包含极少的B细胞与更多的^TCRγδ+ T细胞比^TCRαβ+ T细胞;和PPS，它们是嵌入在小肠壁次级淋巴器官，包含〜80％的B细胞。虽然这些解剖区域的稍有不同的功能和本体论基础，他们在发挥作用啊armonized时尚，以防止致病性侮辱的主机。

此外，有越来越多的赞赏菌群对肠道免疫系统的发展的关键因素，随着识别特定的微生物和特定的细胞谱系^8,9的个体发育之间的同源关系。此外，鉴于肠道免疫系统的教育影响解剖学远处的免疫应答（ 例如 ，关节炎，多发性硬化症，肺炎），它已经很清楚，在肠道免疫系统的发展是有关多疾病过程比先前识别^{10 -12。}这样，在定量评估肠道免疫系统的兴趣已扩展超出宿主 – 病原体相互作用现在包括主机共生相互作用和许多全身性疾病的发病机制，以及。

定在当前的方法的可变性肠淋巴细胞隔离，即对产量，活力，和一致性优化同时平衡所需要的时间是越来越重要的方法。涉及的Percoll梯度协议是时间和劳动力密集型的，而且可能更容易出现人为错误，导致可变的产量和存活率^13。在此，我们提供了淋巴细胞的所有3小肠道免疫车厢分离和鉴定优化的协议。此外，在粘膜免疫系统微生物引起的改变给出越来越大的兴趣，我们包括可用于允许微生物小鼠之间的水平传播，以评估这些变化如何定量影响肠道免疫系统的步骤。