Summary

从在土X射线计算机断层扫描数据量和表面分析:提取指标三维根系

Published: April 26, 2016
doi:

Summary

一种用于获得从土壤获得的X射线计算机断层扫描数据的视觉和定量根部结构信息的方法,提出。

Abstract

植物根系在植物 – 土壤 – 微生物相互作用发生在根际的重要作用,以及与处理气候变化和作物管理具有重要意义。在他们自然环境对根的定量大小的信息是非常宝贵的学习根系生长,在涉及植物环境过程。 X射线计算机断层扫描(XCT)已被证明是用于原位根扫描和分析的有效工具。我们的目的是开发一种没有成本和高效率的工具,从三维(3D)断层扫描数据,而不管其形状接近根部的表面和体积。一个草原dropseed的根结构( 鼠尾heterolepis)标本用XCT成像。根被重建,并且使用许可和开源软件的组合从数据萃取主根结构。等值面多边形网格然后为便于分析创建。我们已经开发Ť他独立的应用程序imeshJ,MATLAB 1中产生,以计算从网格根体积和表面积。 imeshJ的输出是表面积(以mm 2)和体积(毫米3)。的过程中,利用从成像定量根分析的工具的独特的组合,进行说明。证明了XCT的结合,开源软件是一个强大的组合,以非侵入性的图像植物根系样品,段根数据,并从中提取三维数据的定量信息。处理三维数据的这种方法应适用于在有相似的X射线衰减的部件和困难之间具有分割产生连接的其他材料/样品的系统。

Introduction

根,作为根际2-5的一部分,代表植物生物学的“看不见”的一部分,因为土壤使得难以图像根非侵入6,7,但是,研究土壤环境中的根生长和相互作用是理解临界根/植物的生长和养分循环,进而影响造林,粮食安全和气候。 X射线计算机断层扫描(XCT)已被证明是在其本地环境8植物根样本的非侵入性成像的有价值的工具。为了测量在不同条件下的根发育和尺寸的变化,并且可以比较从不同的数据集/标本数据,需要提取该断层摄影数据的定量信息。从周围的土壤的根数据的分割,即,基础图像的从一切它周围其他的隔离(包括,例如,一个相邻植物)是ACCU前一个关键步骤率大小分析可以做到的。然而,一个简单的阈值的方法是经常不可行的根数据。在土壤成像植物根部有关的挑战包括在根材料的X射线衰减特性的变化,和引起的水和有机物质的根和土壤之间的衰减值的重叠。这些问题已被寄望Mairhofer 近期解决。在他们的视觉跟踪工具RooTrak 7,9。成功的分割后的下一步是根体积和表面积的准确测定。体积可以通过计数的体素的数量并作为7之前所示的体素“尺寸的立方相乘来估计。为了更准确地测定根表面积和体积的,所述分段根系的等值面可以由三角形网格使用被称为移动立方体10的算法表示。开源的ImageJ 11可以采用近似第基于对移动立方体算法E根卷。据我们所知,致力于在厘米范围计算为根基于标本断层体积/表面数据只有开放源代码软件数量有限,以上是目前可用12。我们看了13张开源软件侧重于根系生长,旨在细胞特征在单细胞分辨率,可以定量分析的体积。一些专门为整根系统14开源软件是极好的基础上近似,他们的造型实际上是管小口径管的根部系统。然而,随着二维图像一些工作,无法处理3D堆栈14。此外,当表面粗糙和不均匀的形状,如那些树根系统,进行了研究,管状形状近似可能是无效的。另一种方法15使用创新绕过第二维(2D)旋转图像序列Ë需要昂贵的CT扫描仪。它可以测量,记录和显示根系长度。我们从那些仅可以买到16-18测试的软件;一个不出现,以便能够处理三维图像栈16,第二是一个叶面积和根长度测量工具17,而第三个是基于颜色分析18。在此基础上的调查,我们建议,从3D断层扫描数据,而不管其形状接近根部的表面和体积的无成本的选择是理想的。

上可免费获得的RooTrak和ImageJ的基础上,我们已经开发出一种方案,名为imeshJ(参见补充编码文件),其处理来自分段根数据产生的等值面目(表面立体文件),并通过计算该根的体积和表面积做网格上的三角形索引数据简单的几何计算。在这里,我们报告说,综合运用XCT成像的方法,数据重建和可视化(软件CT临3D和VG工作室),从3D数据(开源软件ImageJ的和RooTrak)土壤样品的根分割,并且表面和体积信息提取从三角形网格(ImageJ的和计算机代码imeshJ)。

Protocol

注意:X射线断层摄影扫描仪的操作需要两个一般辐射训练,和特定仪器的辐射安全训练。相关实验者的实验室所有相应的程序应遵循。 1.根成像注意:此步骤描述了在管状塑料盆原文土壤保持的草标本的摄像(塑料管,其直径为40毫米,210毫米的高度,以及约2mm壁厚)。 放在仪器的样品操纵器盆栽植物在期望目标倍率的距离。在一个2英寸直径的支架的植物中,样品到源的距离?…

Representative Results

由两个试样茎天然草大草原dropseed( 鼠尾heterolepis)和原土围绕它是从一个住宅区取和放置在如图1所示的小管形夹持器的该重构的数据的体素尺寸为约31微米×31微米×31微米。重构的卷文件被用于使用开源图像处理程序的ImageJ 1.6 11从一个选定的方向(顶视图)创建图像的堆叠。该卷的数据也亮堂这个计划,以增加根系与土壤值之间的​​对比。?…

Discussion

X射线计算机断层扫描和证明一些开放源代码程序的组合是一个强大的组合,以非侵入性的图像植物根系样品,段根数据,并从中提取三维数据的定量信息(表面积和体积)。我们的可视化和测量功能的能力总是由扫描分辨率,以及由RooTrak软件的限制的限制。然而,扫描分辨率足以捕捉大多数的本研究中的样品的特性,并RooTrak能够成功段根的显​​著一部分。在这项工作中所用的RooTrak的版本没?…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

This work was performed in the Environmental Molecular Sciences Laboratory, a national scientific user facility sponsored by the Department of Energy’s Office of Biological and Environmental Research and located at Pacific Northwest National Laboratory.

Materials

X-Tek/Metris XTH 320/225 kV  Nikon Metrology n/a X-ray tomography scanner
Inspect X Nikon Metrology n/a Instrument control software
CT Pro 3D Nikon Metrology n/a Reconstruction software, version XT 2.2
VG Studio MAX Visual Graphics GmbH n/a Visualization software for 3D volumes, version 2.1.5
ImageJ Open-source n/a Image processing and analysis software, version 1.6
RooTrak Open-source n/a Root segmentation software, version 0.3.1-b1 beta
imeshJ EMSL n/a MATLAB script developed by the authors
Prairie dropseed grass sample n/a n/a Sample obtained from ground in residential area

Referencias

  1. McKenzie, B. M. The Rhizosphere: An Ecological Perspective. Eur. J. Soil Sci. 59 (2), 416-417 (2008).
  2. Farrar, J., Hawes, M., Jones, D., Lindow, S. How roots control the flux of carbon to the rhizosphere. Ecology. 84 (4), 827-837 (2003).
  3. Gregory, P. J. Roots rhizosphere and soil: the route to a better understanding of soil science?. Eur. J. Soil Sci. 57 (1), 2-12 (2006).
  4. Philippot, L., Raaijmakers, J. M., Lemanceau, P., van der Putten, W. H. Going back to the roots: the microbial ecology of the rhizosphere. Nat. Rev. Microbiol. 11 (11), 789-799 (2013).
  5. Gregory, P. J., Hutchison, D. J., Read, D. B., Jenneson, P. M., Gilboy, W. B., Morton, E. J. Non-invasive imaging of roots with high resolution X-ray micro-tomography. Plant and Soil. 255 (1), 351-359 (2003).
  6. Mairhofer, S., et al. RooTrak: Automated Recovery of Three-Dimensional Plant Root Architecture in Soil from X-Ray Microcomputed Tomography Images Using Visual Tracking. Plant Physiol. 158 (2), 561-569 (2012).
  7. Anderson, S. H., Hopmans, J. W. . Soil-Water-Root Processes: Advances in Tomography and Imaging. , (2013).
  8. Mairhofer, S., et al. Recovering complete plant root system architectures from soil via X-ray mu-Computed Tomography. Plant Methods. 9, 8 (2013).
  9. Lorensen, W. E., Cline, H. E. Marching cubes: a high resolution 3D surface construction algorithm. Comput. Graph. 21 (4), 163-169 (1987).
  10. Lobet, G., Draye, X., Perilleux, C. An online database for plant image analysis software tools. Plant Methods. 9 (38), (2013).
  11. Schmidt, T., et al. The iRoCS Toolbox – 3D analysis of the plant root apical meristem at cellular resolution. Plant J. 77 (5), 806-814 (2014).
  12. Galkovskyi, T., et al. GiA Roots: software for the high throughput analysis of plant root system architecture. BMC Plant Biol. 12, 116 (2012).
  13. Clark, R., et al. 3-Dimensional Root Phenotyping with a Novel Imaging and Software Platform. Plant Physiol. 156, 455-465 (2011).
  14. . RootSnap! Available from: https://www.cid-inc.com (2013)
  15. Arsenault, J. L., Pouleur, S., Messier, C., Guay, R. WinRHIZO™ a root-measuring system with a unique overlap correction method. HortSci. 30, 906-906 (1995).

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Citar este artículo
Suresh, N., Stephens, S. A., Adams, L., Beck, A. N., McKinney, A. L., Varga, T. Extracting Metrics for Three-dimensional Root Systems: Volume and Surface Analysis from In-soil X-ray Computed Tomography Data. J. Vis. Exp. (110), e53788, doi:10.3791/53788 (2016).

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