Un operante intra / extra-dimensionale Set-shift attività per Mice

Tutte le procedure sono state approvate dal Ministero della Salute e del Comitato uso di animali locali italiane e sono state condotte in conformità con la guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio delle direttive del Consiglio della Comunità Europea. Nota: La figura 6 mostra una linea temporale di tutta la procedura del protocollo per testare ID compito / ED. 1. Apparato Figura 1. L'apparecchio a due camere "operone". (A) Vista dall'alto dell'intero apparato e (B) vista dalla parte anteriore di una singola camera mimando il mouse punto di vista durante la prova. 1: stimoli visivi (LED); 2: rivista cibo; 3: Foro naso-Poke; 4: stimolo tattile (texture); 5: stimolo olfattivo; 6: porta scorrevole automatica; 7: casa -leggero; 8: photobeam a infrarossi per il controllo della porta. Chambers (16 x 16 x 16 cm 3) sono separati da una porta di plastica trasparente (6). Photobeams infrarossi (8) tracciati i movimenti degli animali e controlla l'apertura / chiusura della porta automatica per consentire il mouse per cambiare camere. Ogni camera presenta due fori naso-Poke (3) con photobeams infrarossi, e, tra loro, un magazzino alimentare (2) con photobeams dove un dispenser di pellet consegnato il rinforzo cibo. Una casa luminosa (7) si trova sopra ciascuna delle due riviste alimentari. Ogni foro naso-Poke è dotata di una serie di stimoli variabili che potrebbero variare in tre diverse dimensioni percettive (odore, vista, tatto). Originariamente pubblicato in 'Il massimo intra ed Extradimensional attenzionale Set-Shifting attività per topi' 19. Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura. content "> Nota: L'apparecchio operone (Figura 1) è costituito da due camere uguali con pareti in plexiglas e un pavimento in alluminio (16 x 16 x 16 cm 3 per ciascuna camera) Chambers sono separati da plexiglass trasparente porta che può essere automaticamente divisorie. controllato per permettere al mouse per accedere a una camera. Ogni camera ha due fori naso-Poke con photobeams infrarossi, e, tra di loro, una rivista di cibo con photobeams dove un dispenser di pellet consegnato il rinforzo cibo. Un ventilatore e una casa di luce si trovano sopra ciascuna delle due riviste alimentari. Dotare ciascun foro naso-Poke con un numero di stimoli variabili (Tabella 1) che variano in tre diverse dimensioni percettive (cioè, odore, vista, tattili). Nota: Gli stimoli suggeriti nella tabella 1 sono stati selezionati in modo da evitare qualsiasi fattore di confusione e / o pregiudizi a causa di evasione o di preferenza. Cinque coppie di esemplari per ogni dimensione consentono una contest in tema di tutti i turni, con stimoli nuovi ad ogni turno. Per offrire stimoli olfattivi nei fori naso-poke, utilizzare un olfattometro diluizione, che condizionano l'aria in entrata ai fori naso-Poke da disseccanti automaticamente, filtrando, reidratante e controllare la presentazione di coppie di profumi. Utilizzare uno olfattometro per controllare due fori naso-Poke. Regolare il flusso d'aria da una pompa d'aria e un vuoto per la rimozione del profumo nei fori Poke naso. Collegare la pompa dell'aria all'ingresso della olfattometro e il vuoto alle uscite montati sul dispositivo Poke naso. Quindi collegare l'uscita per la consegna odore ogni ingresso naso-Poke. Regolare la portata a 1,5 l per minuto. Diluire profumi odore 1:20 in olio minerale e riempire le bottiglie della olfattometro. Per stimoli visivi, luogo diodi emettitori di luce (LED) sulla parte superiore di ogni foro naso-Poke e fissarli nel metallo panel della camera (vedi dettagli nella figura 1 e Tabella 1). Collegarle al interfaccia di uscita. Per stimoli tattili, installare le texture del pavimento mutevoli davanti ad ogni foro naso Poke. Montare le diverse texture su supporto scorrevole e spostarli utilizzando fotogrammi sotto il pavimento, in modo che essi sono presentati in corrispondenza di una piccola apertura (3 x 3 cm 2) sul pavimento di fronte a ciascun foro naso-chiusa. Controllare la presentazione degli stimoli utilizzando il software in base alle istruzioni del produttore, al fine di modificare automaticamente gli stimoli di diverse dimensioni durante l'esperimento. Mettere una macchina fotografica sulla parte superiore del dispositivo, al fine di registrare l'attività alternanza e locomotoria basale utilizzando il software di monitoraggio del comportamento (ad es., Ethovision, Anymaze), che potrebbe contribuire ad eliminare gli animali che hanno problemi estranei a funzioni cognitive. <table fo:keep-together.within-page = "1"> ODORI STRUTTURE LUCI pesca v. salvia velcro v. pellicola luci v. luci spente vaniglia v. lavanda grossolani carta vetrata v. carta vetrata fine rosso v. verde fragola v. cannella liscio cartone v. cartone increspato v blu. Giallo pompelmo v. origano spugna v. plastica liscia arancione v. bianco limone v. albicocca honeycomb carta v. foglio di alluminio fissare luci v. luci lampeggianti Tabella 1. Esemplari utilizzati nel compito / ED Operon ID. Discriminazioni composti sono basati su combinazioni fisse di coppie di esemplari (vedi Figura 2 per un esempio della sequenza di discriminazioni). Le coppie esemplari di diverse dimensioni sono espresse in combinazioni casuali. Stimoli neutri per le diverse dimensioni sono: flusso d'aria senza profumo; carta bianca; senza stimoli luminosi. Tabella originariamente pubblicato in 'The Ultimate intra ed Extradimensional attenzionale Set-Shifting attività per topi' 19. 2. Preparazione degli animali Nota: I risultati rappresentativi qui riportati sono stati ottenuti da maschi C57BL / 6J, da 3 a 7 mesi di età, durante la fase di luce. Pesare i topi, singolarmente-casa e poi gestire per 1 minuto su tregiorni alterni. Dopo una settimana di acclimatazione a singolo alloggiamento, registrare il peso corporeo e l'assunzione di cibo 24 ore per tre giorni consecutivi per determinare il peso di base e l'assunzione di cibo. Applicare un leggero regime privazione di cibo per 1 settimana prima formazione per il test. Controllare peso degli animali ogni giorno mentre alimentare limitato tutto l'esperimento per mantenere circa il 90% del loro peso senza alimentazione basale corpo. Per tre giorni consecutivi prima della fase di formazione di assuefazione, dare topi nella loro gabbia a casa anche ≈20 pellet rinforzo cibo. Questi sono i pellet cibo che verranno utilizzati in test successivi. Nota: restrizione alimentare è utilizzato per aumentare la motivazione degli animali per lavorare nel compito, tuttavia, non superare il 10% della perdita di peso durante ogni fase del l'intera procedura in quanto può portare a comportamenti anomali e stress eccessivo per i topi, che possono influenzare i risultati. In alternativa, per evitare unico involucro, leave il gruppo ospitato topi (2-4 ogni gabbia) e dare l'accesso al cibo ad libitum per un determinato periodo di tempo dopo il test. Controllare peso degli animali ogni giorno mentre alimentare limitato tutto l'esperimento per mantenere circa il 90% del loro peso senza alimentazione basale corpo. 3. assuefazione Addestrare i topi in una sessione di 1 giorno di 40 minuti per muoversi all'interno dell'apparecchio senza il divisore porta, dove un naso-gomitata a qualsiasi risultato foro naso-chiusa in una consegna pellet nel ricettacolo cibo. Durante questa fase, utilizzare solo stimoli neutri (Tabella 1) per tutte le diverse dimensioni (assuefazione 1). Il giorno seguente, addestrare gli animali per 40 min per spostarsi da una camera all'altra, alla fine di ogni prova (assuefazione 2). Utilizzare stimoli neutri per tutte le dimensioni diverse. Anche in questa fase, un naso-colpire in qualsiasi fori naso Poke risultati in una consegna pellet nella rivista cibo.Quando il mouse recupera la ricompensa nella rivista cibo, abbassare la porta divisoria per dare l'accesso mouse per l'altra camera per la prova successiva. Il terzo giorno (assuefazione 3), addestrare gli animali per eseguire due discriminazioni semplici (SD1 e SD2,. Ad esempio, velcro vs cinematografici;. Spunto luce su vs spunto luce spenta; pesca vs salvia.) Ad un criterio di 8 risposte corrette su 10 prove consecutive. Non utilizzare nuovamente questi esemplari durante le fasi successive del test. Per iniziare, posizionare il mouse in una camera con stimoli neutri, mentre nell'altra camera spunti stimoli sono accesi; quindi abbassare la porta per dare l'accesso del mouse alla camera con i segnali stimoli attivati. Il mouse deve imparare a scegliere il foro naso-Poke, dove lo stimolo corretto è presentato. Le sessioni durano 40 minuti. Premiare un naso-gomitata nel foro corretto con una consegna pellet e quando il mouse entra rivista cibo, abbassare la porta divisoriadi dare l'accesso mouse per l'altra camera per la prova successiva. Non premiare un naso-gomitata nel foro non corretta e accendere la luce casa per 5 sec. Quindi abbassare la porta per dare l'accesso mouse per l'altra camera per la prova successiva. Condurre i primi dieci prove di ogni tappa come plasmare prove: se il mouse seleziona il foro sbagliato, registra un errore, ma non termina il processo fino a quando il mouse colpisce anche nel foro corretto. Negli studi successivi, se il mouse sporge nel foro corretto, registrare un errore e spegnere tutti gli stimoli dimensionali per terminare il processo. Terminare ogni sessione dopo 40 minuti o se un topo non riesce a fare alcuna risposta per cinque minuti consecutivi, a seconda di quale è venuto prima. Se il mouse non raggiunge il criterio in una sessione, continuare il test il giorno successivo. Se il mouse non può raggiungere il criterio della SD1 SD2 o del Habituation 3 dopo 5 sedute, arrestare la prova il mouse e eliminarla dallo studio, perchénon è in grado di funzionare in modo affidabile discriminazioni di base che potrebbero poi influenzare i risultati della task ID / ED. Figura 2. Esempio del compito ID / ED. Un esempio del ID / ED 'stuck-in-set' e paradigmi "bidimensionali" è mostrato. Tratto da 'Il massimo intra ed Extradimensional attenzionale Set-Shifting attività per topi' 19. Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura. 4. ID / ED Paradigma Procedura 'stuck-in-set' Nota: Per questa procedura, precedentemente utilizzato in entrambi i primati e roditori 7,15,16, è necessario manipolare tre diverse dimensioni percettive perogni singolo mouse testato. Per quanto riguarda le fasi di assuefazione, tutte le sessioni giornaliere prova, avviate posizionando il mouse in una delle due camere in cui tutti gli stimoli neutri. Prima dell'inizio di un processo, i segnali di stimolo vengono inseriti nella camera opposta. Poi la porta che divide si abbassa per dare l'accesso mouse per l'altra camera dove gli spunti di stimolo sono. Per formare l'animale di sviluppare una serie, o pregiudizi, verso una particolare dimensione percettiva (es., Odori, luce o floor texture), espongono topi ai seguenti discriminazioni presentati in questo ordine (vedi anche un esempio in figura 2): Per la discriminazione semplice (SD), di introdurre i topi a una dimensione (odore, luce o struttura, vedi figura 2) che è rilevante in tutti i compiti fino alla EDS. Cioè, la dimensione rilevante è quello che indica dove la risposta corretta è. Seguendo l'esempio di figura 2, presentano due odori, come vaNilla (O1) e lavanda (O2), e selezionare O1 come la risposta corretta. Per la discriminazione Compound (CD), introdurre una seconda dimensione, ad esempio la luce, che è irrilevante (cioè, non erano indica la risposta corretta). Present due luci (L1 e L2) insieme con gli odori (O1 e O2) in modo da avere due possibili discriminazioni (vedi esempio in figura 2). Gli esemplari corretti sono le stesse in SD. Per l'inversione della discriminazione Compound (CDRE), lasciare le esemplari e la dimensione relativa invariato, ma hanno gli animali imparano che lo stimolo in precedenza corretto è ora corretto. Ad esempio, selezionare lavanda come la risposta corretta, con la vaniglia essendo ormai la scelta errata. Queste stesse condizioni si trovano per le altre fasi di inversione (cioè IDSRe, IDS2Re e EDSRe). Dopo di che, selezionare uno shift Intra-dimensionale (IDS) in cui nuovi esemplari sono utilizzati sia per la rilevantee le dimensioni irrilevanti (un disegno totale cambiamento). Ad esempio, utilizzare fragola e cannella (O3 e O4) come gli odori e le luci blu e gialli (L3 e L4) come le luci. Tuttavia, assicurarsi che i soggetti di prova Continuate a seguire la stessa dimensione rilevante al fine di trovare la risposta corretta. Queste stesse condizioni si trovano per l'altra spostamento intradimensional (cioè, IDS2). Come per il precedente discriminazione, i topi hanno eseguire l'inversione dello spostamento Intra-dimensionale (IDSRe). Utilizzare le stesse condizioni in CDRE. Per intra-dimensionale turno 2 (IDS2), utilizzare le stesse condizioni IDS. Allo stesso modo, utilizzare le stesse condizioni CDRE per l'inversione del cambio intra-dimensionale 2 (IDSRe2). Nel turno extra-dimensionale (EDS), sono i topi scegliere il corretto buco dopo una dimensione di stimolo appena presentato. Presentare una coppia di stimoli da una nuova dimensione, che è la trama. Ad esempio utilizzare carta vetrata a grana grossa (T1) come la res correttiponse e carta vetrata fine (T2) come scorretta, e presentarli con due nuovi odori, per esempio limone e albicocca (O7 e O8). La dimensione in precedenza in questione è ormai diventato irrilevante. Non presentare più la dimensione in precedenza irrilevante. Per l'inversione extra-dimensionale (EDSRe), ​​utilizzare le stesse condizioni in CDRE. Misurare le prestazioni dei topi fino a raggiungere un criterio di 8 scelte corrette di 10 prove consecutive per completare ogni fase. Impostare il programma (vedi Tabella dei Materiali) per passare automaticamente alla fase successiva dopo il raggiungimento del criterio. Interrompere una sessione al giorno dopo 40 minuti, o se un topo non riesce a fare alcuna risposta per 5 minuti consecutivi, terminare la sessione e continuare il giorno dopo con il mouse sullo stesso palco dove era stato interrotto. Per ogni fase, misurare il tempo per raggiungere il criterio. Se un topo non raggiunge il criterio in una sessione, riassumere il tempo totale impiegato in sessioni consecutive. Perogni prova, misurare il tempo dalla presentazione degli stimoli (odori, luci, texture) a una risposta naso-Poke (latenza di rispondere). Al termine di ogni sessione, pulire l'apparecchio con il 70% di alcol. Utilizzare sempre lo stesso ordine delle discriminazioni. Tuttavia, cambiare in modo casuale le dimensioni di stimolo e le coppie di esemplari utilizzati e altrettanto rappresentarli all'interno di gruppi sperimentali e di controbilanciare tra i gruppi. Assicurati di controbilanciare ugualmente le dimensioni percettive utilizzate all'interno e tra ogni gruppo sperimentale in modo che ogni possibile trasferimento ED è rappresentato (cioè, la luce per l'odore, la luce per consistenza, odore di luce, odore di tessitura, tessitura di luce, texture odore) . Le combinazioni di esemplari sono troppo numerosi per permettere pieno controbilanciamento; Pertanto, per ridurre i gradi di libertà, utilizzare sempre esemplari a coppie; per esempio, di stimolo alla vaniglia con lavanda, ecc (vedi tabella 1). <p class = "jove_title"> 5. Procedura / ED Paradigma ID 'a due dimensione' Nota: Un'altra condizione per misurare la capacità di set-shifting attentivo, utilizzato sia nei primati e roditori 12,17 13, è il paradigma 'bidimensionale'. In questo caso, solo due dimensioni percettive vengono utilizzati durante tutta la prova. Per questo protocollo, utilizzare l'ordine delle discriminazioni e la procedura da seguire, come descritto per il protocollo 'stuck-in-set' fino allo stadio EDS (vedere un esempio nella figura 2): Per la SD e le seguenti fasi, utilizzare le stesse coppie di 'stuck-in-set', fino a quando il IDS2Re. Come mostrato nell'esempio di figura 2, utilizzare due odori (O1 e O2, utilizzare O1 come corretti stimolo). Per il CD, come nel protocollo 'stuck-in-set', introduce una nuova dimensione (ad esempio luce, L1 e L2), che è irrilevante e potrebbe servire come un fattore confondente. Il CDRE è simile, come hon il protocollo 'stuck-in-set', quindi lasciare le esemplari e la dimensione relativa invariato, ma hanno gli animali imparano che lo stimolo precedentemente corretta è ora corretto (ad esempio, O1). Nelle IDS, utilizzare sempre nuove coppie di stimoli per entrambe le dimensioni (O3 e O4, L3 e L4, dove O3 è lo stimolo corretto). Per il IDSRe, hanno i topi eseguire l'inversione del IDS. Selezionare l'esemplare corretto che è quello che è stato corretto durante l'IDS (ad esempio, O4). Per il IDS2, introdurre nuove coppie di stimoli per entrambe le dimensioni (O5 e O6, L5 e L6). Come nelle tappe precedenti di inversione, in IDS2Re, hanno gli animali imparano che lo stimolo precedentemente corretta è ora corretto (ad esempio, O5). Per il protocollo 'bidimensionale', la EDS, i topi devono scegliere la risposta corretta dopo la dimensione precedentemente irrilevante diventa ora la dimensione rilevante. Così, la luce è la nuova dimensione rilevante, WHIch indica la risposta corretta. In particolare, la luce rossa (L7) è la risposta corretta. Viceversa, la dimensione precedenza rilevante (nell'esempio, odore) è ora quello irrilevante. Dopo la EDS, per l'inversione (EDSRe), ​​utilizzare stesse condizioni in CDRE. La dimensione rilevante è la stessa come nel EDS ma esemplari corretti sono invertiti. Così, per esempio, la luce verde (L8) è ora la risposta corretta. Analisi 6. Dati Misurare la performance per: numero di prove per raggiungere il criterio; tempo per raggiungere il criterio (in minuti); tempo dalla presentazione degli stimoli ad una risposta naso-Poke (latenza di rispondere). Per l'analisi statistica, utilizzare ANOVA con le diverse fasi (SD, CD, CDRE, IDS, IDSRe, IDS2, IDSRe2, EDS, e EDSRe) come un fattore entro soggetti per esaminare il numero di prove necessarie per raggiungere i criteri, i tempi necessari per completare ogni fase e la latenza di rispondere. Controdotto post-hoc analisi utilizzando il test di Newman-Keuls. Nota: Il valore accettato per significatività è p <0.05.