对小鼠脑血管净化

中枢神经系统（CNS）的正常功能需要一个高度调节细胞外的环境中，以及相对于其他器官¹其代谢需求是巨大的。中枢神经系统也是范围广泛的化学品，通常无害的外周器官，但它，神经毒性非常敏感。为确保正常运行，大部分的中枢神经系统“血管形成的血管内皮屏障;血-脑屏障（BBB），其控制分子和离子的流动，以及血液和大脑之间的免疫细胞的通路，从而保持适当的稳态^2，也限制了治疗性药物的条目，从而妨碍治疗神经系统疾患^3。在细胞水平，血脑屏障主要持续由内皮细胞，流出转运偏振光表达和非常低的胞转率^4之间广泛紧密连接。性能及血脑屏障的功能大多是诱发NEighboring细胞^4。具体地，周细胞发挥 ​​诱导和维持所述BBB ^5,6中起重要作用。作为收缩细胞，周也调节血流量⁷做周围大血管的平滑肌细胞。最后，星形胶质细胞，脑的主要神经胶质细胞，发送名为endfeet围绕大型进程最大脑脉管⁸和调制血脑屏障完整性和免疫静止^9，代谢物转移到神经元^10，和诱导神经元活性之间的紧耦合和血流^11,12。

研究脑血管系统的细胞和分子性质的能力是非常重要的特点更好其脑生理学和病理生理学的贡献。为了解决这个问题，已经发展战略，以隔离大脑的脑血管系统，该系统允许完整的脑血管片段的准备。脑血管purification被使用牛脑中¹³最初描述和改进，并适用于其它物种，特别是啮齿动物^14。在这最后的研究中，使用不同大小的过滤器被引入到分离脑血管中，以级分富含不同直径的容器。有趣的是，在这些制剂，内皮细胞保持它们的代谢特性^15，转运功能¹⁶和¹⁷的极化。在这里，我们详细描述了这个协议，并进一步证明了隔离容器保留大部分的原位结构。内皮细胞保持通过紧密连接相连，通过一个连续的基底层包围。周细胞和平滑肌细胞保持附着在内皮细胞层，以及血管周围星形胶质细胞膜。然而，星形胶质细胞，小神经胶质细胞，神经元和少突胶质细胞被消除。最后，我们描述了一个过程来执行免疫染色对离体脑血管。 </P>

直至现在大多数关于脑血管系统的分子和细胞研究已经由解离纯化脑血管细胞进行细胞分选使用细胞特异性报道的小鼠品系或免疫染色基于程序^18,19。尽管这些技术允许几乎纯脑血管的细胞群的分离，分离的细胞完全丧失其原位形态学和相互作用，这反过来又极大地影响它们的分子和细胞的特性。在这里描述的协议，从而允许整个脑血管片段无需特异性抗体或转基因小鼠的污渍的隔离，提供了一个很好的选择，作为分离的脑血管的总体结构是保守的，因此，减少它们的分子性能影响。隔离容器然后可以用于研究基因的活性，蛋白质合成和调节在所述BBB作为最近描述^20,21 </suP>。最后，相对于激光捕获显微切割^22,23，本协议是廉价的，易于实施，并在任何实验室迅速适应。