在Mesenterial静脉的活体显微镜白细胞，内皮细胞和血小板白细胞相互作用小鼠
Summary
This simplified application of intravital microscopy of mesentery veins in mice can be used in different models of inflammation to observe leukocyte-endothelial and platelet-leukocyte interactions.
Abstract
活体显微镜是一种可用于研究在不同的区域在活的动物不同的工艺和容器的方法。在这个协议中，我们描述肠系膜静脉的活体显微镜。这可以在时间与重复的结果示出在体内白细胞-内皮相互作用短时间内进行。我们描述了内皮的LPS攻击后的炎性设置。但在此模型中可以应用许多不同类型的炎性病症，如细菌，化学或生物和调查药物的给药以及它们对活的动物直接影响及其对白细胞募集的影响。此协议已被成功地应用到了许多小鼠和它们对血管炎症反应的影响的不同处理。在此，我们描述了通过荧光罗丹明6G标记这些白细胞和血小板的可视化。另外，任何特定的成像可以是PErformed使用有针对性的荧光标记分子。
Introduction
此协议的目的是描述在活的小鼠的炎症性条件下直接观察的白细胞 – 内皮和白细胞 – 血小板相互作用肠系膜静脉的活体显微镜的简化技术。
活体显微镜的开发是为了研究炎性病症1,2，这是不平凡的，但重要的是理解的炎性白细胞募集和作用下在体内白细胞-内皮相互作用。在这个协议中，我们描述了一种基于此前公布的出版物开发。类似于可视化血小板结合在越来越血栓3和平行于什么已经公布早4，形象化肠系膜静脉通过透射光显微镜检查。也有内部的重要显微镜等各种模式，如大鼠5或小鼠肝和大鼠6的提睾肌。
肠系膜静脉的活体显微镜已经开发和由几组在以前的研究中的应用。我们已经用这种方法来观察在野生型小鼠和色氨酸hydroxylase1（TPH1）之间白细胞募集的差异 – / – 小鼠，这是不足型非神经元血清素和比较结果，以小鼠的血小板血清素药理学由长期贫应用的选择性血清素再摄取抑制剂氟西汀7。我们也研究白细胞-内皮相互作用后急性氟西汀治疗8。
在这个协议中，我们集中在肠系膜静脉的活体显微镜，因为该模型可迅速地进行，并允许白细胞 – 内皮和血小板白细胞相互作用测量值有效。这是更大的挑战和耗时在其他器官，如骨，肝，皮肤，或提睾肌的活体显微镜。该模式升这里描述是具有炎性刺激物，如腹腔内注射脂多糖challengeing后的理想的炎性细胞 – 细胞相互作用的重现性的评价。
Protocol
Representative Results
Discussion
在这里，我们描述了准备和小鼠体内的肠系膜静脉活体显微镜的性能。这种方法使我们有机会直接在活的有机体观察白细胞，内皮细胞和血小板内皮细胞相互作用11。
作为早期对炎症的反应内皮被激活，并与白细胞和血小板产生的滚动，粘附和轮回12相互作用。但白细胞也与血小板形成所谓的相互作用，血小板白细胞复合物，主要是血小板中性粒复合物…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported by the Deutsche Forschungsgemeinschaft (DU 1190/3-1).
Materials
| Rhodamine 6G | Sigma-Aldrich | 989-38-8 | |
| Lipopolysaccharides from Escherichia coli 055:B5 | Sigma-Aldrich | L2637 |
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