Método de Estudar Palatal Fusão usando estático Órgão Cultura

Fendas orofaciais são os defeitos de nascimento craniofaciais mais predominantes. Além disso, levando em consideração todos os possíveis defeitos craniofaciais, estes são a segunda anomalia nascimento mais comum em recém-nascidos ^2. Fenda palatina ocorre em aproximadamente 1 em cada 700 nascimentos nos Estados Unidos (EUA) a cada ano, a incidência de fenda palatina é igual a 475 crianças nascidas com fissuras palatinas por mês ou 15 crianças com fissuras por dia ^3. Cerca de 1% das crianças nasceram em todo o mundo a cada ano apresentam alguma forma de dysmorphology craniofacial.

Fendas do palato e lábio precisa de um procedimento muito caro e complicado, com implicações ao longo da vida para os pacientes que têm essa anomalia. O custo estimado para cada paciente com fissura oral é de aproximadamente $ 100,000 ^4. O tratamento de um paciente com fissura labiopalatina requer uma equipe de médicos, incluindo cirurgiões craniofaciais, otorrinolaringologistas, geneticistas, anestesiologistas,fonoaudiológicas patologistas, nutricionistas, ortodontistas, prosthodontists, psicólogos, neurocirurgiões e oftalmologistas.

Em palatogenesis, o palato secundário surge como conseqüências emparelhados, que inicialmente crescem verticalmente e se submetem a elevação prateleira palatal acima do dorso da língua. Após elevação, as lâminas palatinas emparelhados crescem em direcção da linha média (em E14.5 -E15 em ratinhos e em seres humanos semana 9). O epitélio borda medial (MEE), que cobre a ponta prateleira adere formar a costura linha média epitelial.

Isto é seguido por epitelial para mesenquimal e / ou apoptose para permitir mesenquimais confluência. Adesão de se opor MEE é um evento essencial cuja alteração provoca fissura palatina. No entanto, poucos estudos investigaram a adesão inicial de ⁵ palatais prateleiras. As formas do palato duro através da diferenciação de células mesenquimais em osteoblastos. O desenvolvimento anormal do paladar pode produzir cleft paladares com ou sem envolvimento de lábio.

As técnicas de cultura de órgãos paladar tinha sido amplamente utilizado para muitos laboratórios nos últimos 30 anos ^6,7.

Neste protocolo, descrever em detalhes um método de dissecção palatal e cultura de órgão estático. A vantagem de uma cultura de órgãos imóvel é que ele permite que lâminas palatinas para fundir. Esta técnica tinha sido usada com sucesso em nosso laboratório para muitos de fusão e de sinalização experimentos ^8,9. No entanto, o âmbito da técnica é muito grande e pode ser utilizado sempre que sistema de cultura de órgão estático é necessário, incluindo a avaliação de respostas a agentes químicos exógenos, os efeitos de factores de crescimento em diferentes vias reguladoras e proteínas específicas.

Figura 1. Rato Palatogenesis. Estágios de desenvolvimento do palato camundongos. (BF) ELE Digitalizaçãomicrografias ctron (SEM) do palato secundário, por vezes, de desenvolvimento representativas. As setas vermelhas: mostrar a parte inicial da adesão palatal e fusão. Setas amarelas: Ponto para o espaço entre os paladares primárias e secundárias que irão desaparecer após a fusão (reproduzido a partir de Kaufman ¹¹ com a permissão de PLoS ONE).