El virus del herpes simple (VHS) puede causar una serie de enfermedades en los seres humanos a partir de lesiones mucocutáneas sin complicaciones leves a las infecciones que amenazan la vida. HSV tipo 1 (HSV-1) está predominantemente asociado con las infecciones orofaciales y la encefalitis, mientras que HSV tipo 2 (HSV-2) más probable causa infecciones genitales ^1. Si bien hay un avance significativo en la comprensión de cómo el VHS entra en las células en cultivo, se inicia la infección y produce progenie viral, sabemos poco sobre la vía viral invasión (s) en el tejido a nivel celular ^2. Para los estudios de la piel HSV o infecciones de las mucosas, ratones, conejos y cobayas se han utilizado como modelos animales. Infección de la piel fue establecida por la inyección intradérmica o por el rascado de la piel en la presencia de virus, y desarrollo de la enfermedad se correlacionó con la producción de virus. Estos métodos ayudaron a entender varios aspectos de la patogénesis de la enfermedad, y se utilizan para evaluar fármacos antivirales. Para estudiar la infección por HSV en el tissuNivel E, se han aplicado modelos de piel humana organotípicos. A medida que la tasa de infección está restringida de estas culturas balsa, sólo un número limitado de estudios de investigación de la infección, propagación viral y los efectos de los componentes antivirales han sido publicados ^3-6.

Para caracterizar determinantes celulares que juegan un papel en la infección por HSV-1 en el epitelio intacto, hemos establecido un protocolo para estudios ex vivo de infección de la epidermis murinos ^7. Se preparó a partir de la piel recién nacidos o de las colas de ratones adultos. Desde HSV-1 no podía infectar muestras de piel completas, que fueron sumergidos en un medio que contiene el virus, separamos la epidermis de la dermis mediante el tratamiento dispasa II. Después de flotación de las hojas epidérmicas en un medio que contiene el virus, las células infectadas se pueden visualizar en la capa basal de la epidermis en las varias horas después de la infección (pi) ^7. Para visualizar el inicio de la infección en las células individuales antes de la replicación viral de unand producción de virus, se tiñeron con un anticuerpo contra la proteína de las células infectadas 0 (ICP0), que es una de las primeras proteínas expresadas durante HSV-1 infección. La localización celular de ICP0 pasa a través de fases distintas durante la infección temprana. Mientras ICP0 está presente en focos nucleares durante una etapa temprana de la expresión génica viral, relocalización de ICP0 al citoplasma indica una fase posterior de la infección ^8.

Se utilizó el ensayo ex vivo infección de láminas epidérmicas de diferentes modelos de ratón para probar el papel potencial de diversos factores celulares durante la infección. Para hacer frente al impacto de Rac1 como un regulador clave de la dinámica de la actina, estamos infectados la epidermis de ratones con una deleción-queratinocitos específica del gen Rac1 ^9. Este modelo nos permitió estudiar las consecuencias de la deficiencia de Rac1 en la eficiencia de HSV-1 infección en capas de queratinocitos epidérmicos. La comparación con la epidermis infectados de camada de control rerevelado ninguna diferencia significativa, lo que indica que la ausencia de Rac1 no tuvo efecto sobre la iniciación de la infección en la capa basal de la epidermis ^7. El uso de otros modelos de ratón nos ha permitido abordar la cual los receptores celulares median entrada en la epidermis. La infección de láminas epidérmicas de cualquiera nectin-1- o ratones deficientes en Hvem con HSV-1 reveló que la entrada viral inicial en el tejido depende fuertemente de la presencia de nectin-1 ^10. Además, nuestros resultados demuestran que Hvem también puede servir como receptor en la epidermis murinos, aunque menos eficiente que nectin-1 ^10.

Para hacer frente a la distribución espacial de las células infectadas en las capas epidérmicas, visualizamos expresión ICP0 en secciones de tejido y los montajes enteros epidérmico (Figura 1). En cryosections de piel completa, no hay células que expresan ICP0 se detectan (Figura 1). En contraste, cryosections de láminas epidérmicas demuestran citoplásmicaICP0 expresión en la capa basal ya a las 3 horas pi (Figura 1). En épocas posteriores, virus se propague a suprabasal capas se puede visualizar. La distribución espacial de las células infectadas en la capa basal se puede seguir fácilmente en preparaciones completas epidérmico (Figura 1). Tras la infección con HSV-1 en 100 PFU / célula, aproximadamente el 50% de los queratinocitos basales de la epidermis interfolicular muestran expresión ICP0 en 1,5 hr pi En este punto de tiempo de las células infectadas expresan más ICP0 nuclear. La relocalización de ICP0 al citoplasma que indica una etapa posterior de la expresión génica temprana está presente en casi todas las células en 3 pi hr (Figura 1). Estos modos de visualización de las células infectadas ex vivo sobre HSV-1 infección proporcionan un poderoso ensayo para estudiar el efecto de los inhibidores o de componentes celulares mutados eliminados / en la entrada viral y la propagación en el tejido.