Mange nematoder er forbundet med insekter og deres verts interaksjoner varierer fra gunstig for skadelig. Heri, fokuserer vi på en gruppe av nematoder som er patogener av insekter, også kjent som entomopathogenic nematoder (eller UPN). To nematode familier tilhører denne gruppen av nematoder: Steinernematidae og Heterorhabditidae ^11,13. Deres patogene effekten er faktisk gitt av deres interaksjon med fakultative anaerobe tarmbakterier (Xenorhabdus bakterier forbinder med steinernematids og Photorhabdus bakterier forbinder med heterorhabditids) ^2. Bakteriene vectored fra ett insekt vert til en annen ved den eneste frittlevende nematode scenen, den tredje fasen infeksiøs juvenil (også kjent som dauer juvenile, infeksiøs juvenile eller IJ), som lever i jorda. Når du er inne insekt, de nematoder slipper bakterier inn i insekt hemolymph, som dreper insekt vert ved massiv septikemi. Bakteriene ogsådegradere insekt vev og bli nematoder 'matkilde, slik at de kan modnes og formere seg. Vanligvis er en eller to generasjoner av voksne nematoder produsert innenfor insekt kadaver. Avkommet av voksne siste generasjon reassociates med noen bakterieceller på en mer spesialisere måte enn de tidligere ernæringsmessig forhold, og gi næring til disse cellene i tarmen etter hvert som de beveger seg ut fra insekt skrotten i jorden hvor de avventer et annet insekt å parasitize ^6,11,14 (Figur 1).

Siden oppdagelsen i 1927, har UPN blitt ansett som verdifulle alternativer til kjemiske plantevernmidler som de kan parasitize et bredt spekter av insekter som er skadedyr i jordbruket ^3,4,5. Men i løpet av de siste to tiårene, disse nematoder og deres symbiotiske bakterier har blitt anerkjent som en formbar modellsystem for å studere biologiske, økologiske og evolusjonære aspekter av host-mikrobe interactions ^14.

Målet med denne presentasjonen er å vise de metoder og teknikker som oftest brukes for jordprøver og isolering av EPN. En rekke verktøy er tilgjengelig og kan brukes til å samle inn jordprøver inkludert: jord corers, trowels, post-hulls graveredskap, naver, Prøverør, hånd spader, blant andre (figur 2).

Avhengig av formålet med studien, kan to strategier prøvetaking vurderes: a) stratifisert, b) stikkprøvekontroll (figur 3). Den stratifisert prøvetaking er vanligvis brukt som en del av en intensiv studie i en bestemt eller demarked området over en gitt tidsperiode. Generelt, blir en transekt demarked og jordprøver er tatt ved fastsatte intervaller i den transekt over en tidsperiode (figur 3A) ^15. Stikkprøvekontrollen er vanligvis ansatt når du fokuserer på et stort område. Denne prøvetakingsstrategi har vært brukt for å studere mangfoldet av UPN fROM et stort geografisk område eller region (Figur 3B) ^12. En rekke faktorer kan vurderes avhengig av fokus for studien, inkludert en rekke ulike høyder, jord teksturer og habitater (f.eks., Dyrket mark, skog, beite, parker, strender, elvebreddebufferen områder, osv.).

Vi viser insekt-baiting teknikken, som opprinnelig ble beskrevet av sengetøy og Akhurst ¹ og representerer en enkel og selektiv alternativ for å gjenopprette EPN fra jordprøver. Dette er en selektiv prosedyre som er basert på premisset om at de nematoder (IJ scenen) vil bli tiltrukket av et insekt vert og parasitize det. Denne teknikken kan også bli vurdert for isolering av andre insekt patogener slik som sopp og bakterier ^8,10.

Vi viser også den modifiserte hvite felle teknikk som brukes for å hente nematode avkom fra infiserte insekt verter ^7,14. Dette er en uanstrengt møtthod som har fordelen av å hente en "ren" nematode avkom fri for rusk fra den nedverdigende insekt kadavre.

Til slutt, de teknikker som er beskrevet og vist i denne artikkel tilsvarer de unnfanget og / eller utført i vårt laboratorium, så vel som de som er beskrevet av forskjellige kolleger og medarbeidere.