Veel nematoden worden geassocieerd met insecten en hun gastheer interacties variëren van gunstig schadelijk. Hierin, richten we ons op een groep van nematoden die ziekteverwekkers van insecten, ook wel bekend als entomopathogene nematoden (of EPN). Twee nematode families behoren tot deze groep van nematoden: Steinernematidae en Heterorhabditidea ^11,13. Hun pathogene effect is in feite door hun interactie met facultatief anaërobe darmbacteriën (Xenorhabdus bacteriën associëren met steinernematids en Photorhabdus bacteriën associëren met heterorhabditids) ² toegekend. De bacteriën worden gevectoriseerd van de ene host naar de andere insecten door de enige vrij levende aaltjes moment de derde-fase infectieuze juveniele (ook bekend als dauer jeugdcriminaliteit, infectieuze jeugdige of IJ), die leeft in de bodem. Eenmaal binnen het insect, de aaltjes laat de bacteriën in hemolymph het insect, die het insect host door massale bloedvergiftiging doden. De bacteriën ookdegraderen weefsels van het insect en word voedselbron de aaltjes ', waardoor ze om te rijpen en zich te vermenigvuldigen. Meestal een of twee generaties van volwassen nematoden worden geproduceerd binnen het insect kadaver. Het nageslacht van de laatste generatie volwassen reassociates met enkele bacteriële cellen in een meer gespecialiseerd wijze dan hun vorige voeding relatie, en voeden deze cellen in de darmen zoals zij uit te gaan van de insecten karkas in de grond waar andere insecten zullen wachten tot parasiteren ^6,11,14 (figuur 1).

Sinds hun ontdekking in 1927, hebben EPN beschouwd als waardevolle alternatieven voor chemische bestrijdingsmiddelen als ze een breed scala aan insecten die landbouwongedierte ^3,4,5 zijn kunnen parasiteren. Echter, in de afgelopen twee decennia, deze nematoden en hun symbiotische bacteriën zijn erkend als een kneedbare modelsysteem voor het bestuderen van biologische, ecologische en evolutionaire aspecten van gastheer-microbe Interactio¹⁴ ns.

Het doel van deze presentatie is om de methoden en technieken het meest gebruikt voor de bemonstering en de isolatie van EPN bodem vertonen. Een verscheidenheid aan instrumenten is beschikbaar en kan worden gebruikt voor het verzamelen van bodemmonsters inclusief: bodem corers, troffels, post-gatengravers, grondboren, bemonstering buizen, met de hand schoffelen, onder anderen (figuur 2).

Afhankelijk van het doel van het onderzoek kunnen twee monsters strategieën beschouwd: a) gestratificeerd, b) steekproefsgewijze (figuur 3). De gestratificeerde steekproef wordt meestal gebruikt als onderdeel van een intensieve studie in een specifieke of demarked gebied gedurende een bepaalde periode. In het algemeen wordt een transect demarked en bodemmonsters genomen vastgelegd intervallen in het transect gedurende een tijdsperiode (figuur 3A) ^15. De aselecte steekproef wordt in het algemeen toegepast bij het scherpstellen op een uitgestrekt gebied. Deze bemonstering strategie werd gebruikt voor het bestuderen van de diversiteit van EPN from een groot geografisch gebied of regio (Figuur 3B) ^12. Een aantal factoren kunnen worden beschouwd, afhankelijk van de focus van de studie, waaronder een diverse waaier van verhogingen, bodemtexturen en habitats (bv., Akkers, bossen, weilanden, parken, zeekusten, oeverstaten gebieden, etc.).

We tonen de insecten lokken techniek, die oorspronkelijk werd beschreven door Bedding en Akhurst ¹ en staat voor een eenvoudige en selectieve alternatief voor het herstellen van EPN van bodemmonsters. Dit is een selectief procedure die is gebaseerd op de vooronderstelling dat de nematoden (IJ fase) wordt aangetrokken door een insect gastheer en het parasiteren. Deze techniek kan ook worden beschouwd voor isolatie van andere insecten pathogenen zoals schimmels, bacteriën en ^8,10.

We tonen ook gemodificeerde Witte trap techniek die wordt gebruikt voor het ophalen nematode nakomelingen van geïnfecteerde insect gastheren ^7,14. Dit is een moeiteloze voldaanhod dat het voordeel van het ophalen van een 'schone' nematode nakomelingen vrij van vuil uit de vernederende insect kadavers biedt.

Tenslotte, de beschreven en in dit artikel technieken overeen met die bedacht en / of uitgevoerd en in ons laboratorium die beschreven door verschillende collega's en medewerkers.