Mange nematoder er forbundet med insekter, og deres vært interaktioner spænder fra gavnlig for skadelig. Heri har vi fokus på en gruppe af nematoder, der er patogener af insekter, også kendt som insektspecifikke nematoder (eller EPN). To nematode familier hører til denne gruppe af nematoder: Steinernematidae og Heterorhabditidae ^11,13. Deres patogene virkning er i virkeligheden tillagt ved deres interaktion med fakultative anaerobe tarmbakterier (Xenorhabdus bakterier forbinder med steinernematids og Photorhabdus bakterier forbinder med heterorhabditids) ^2. Bakterierne vectored fra et insekt vært til en anden ved den eneste fritlevende nematode fase, den tredje fase infektiøse juvenile (også kendt som dauer juvenile, smitsom yngel eller IJ), som bor i jorden. Inde i insektet, nematoder frigive bakterier i insektets hæmolymfe, som dræber insekt vært ved massiv blodforgiftning. Bakterierne ogsåforringe insekt væv og blive nematoder 'fødekilde, så de kan modnes og formere sig. Normalt er en eller to generationer af voksne nematoder produceret inden for insekt kadaver. Afkommet af de sidste voksen generation reassociates med enkelte bakterieceller i en mere specialisere måde end deres tidligere ernæringsmæssige forhold, og give næring til disse celler i deres tarme, når de bevæger sig ud fra insekt slagtekroppen i jorden, hvor de vil afvente en anden insekt at parasitize ^6,11,14 (figur 1).

Siden deres opdagelse i 1927, har EPN været betragtet værdifulde alternativer til kemiske pesticider, som de kan snylter en bred vifte af insekter, der er landbrugsskadedyr ^3,4,5. Men i de seneste to årtier, disse nematoder og deres symbiotiske bakterier er blevet anerkendt som et plastisk model system til at studere biologiske, økologiske og evolutionære aspekter af host-mikrobe interactions ^14.

Målet med denne præsentation er at vise de metoder og teknikker mest brugt til jordprøvetagning og isolering af EPN. En række værktøjer er tilgængelige og kan bruges til indsamling af jordprøver herunder: jord corers, trowels, post-hullers gravemaskiner, snegle, prøveudtagning rør, hånd skovle, blandt andre (Figur 2).

Afhængigt af formålet med undersøgelsen, kan to prøveudtagningsstrategierne overvejes: a) stratificeret, b) stikprøvekontrol (figur 3). Den stratificeret udvælgelse er normalt bruges som en del af en intensiv undersøgelse i en specifik eller demarked området over en given periode. I almindelighed er en transekt demarked og jordprøver taget på fastlagte intervaller i transekten over en periode (figur 3A) ^15. Den tilfældige stikprøver er generelt ansat, når der fokuseres på et stort område. Denne strategi er blevet anvendt stikprøver for at studere mangfoldigheden af ​​EPN fra et stort geografisk område eller region (figur 3B) ^12.. En række faktorer kan betragtes som afhængig af fokus for undersøgelsen, herunder en bred vifte af stigninger, jord teksturer og levesteder (f.eks., Dyrkede marker, skove, enge, parker, strande, vandløbsnære arealer, mv.)

Vi viser insekt-lokkemad teknik, som oprindeligt blev beskrevet af Sengetøj og Akhurst ¹ og repræsenterer en enkel og selektiv alternativ til at inddrive EPN fra jordprøver. Det er en selektiv fremgangsmåde, der er baseret på den forudsætning, at de nematoder (IJ fase) vil blive tiltrukket til et insekt vært og parasitize det. Denne teknik kan også overvejes til isolering af andre insektpatogener, såsom svampe og bakterier ^8,10.

Vi viser også den modificerede White fælde teknik, der anvendes til hentning afkom nematode fra inficerede insekt værter ^7,14. Det er en ubesværet opfyldthod der har den fordel at hente en "ren" nematode afkom fri for snavs fra de nedbrydende insekt kadavere.

Endelig beskrevne teknikker og vist i denne artikel svarer til dem, udtænkt og / eller udført i vores laboratorium, såvel som dem, der er beskrevet af forskellige kolleger og samarbejdspartnere.