Många nematoder är förknippade med insekter, och deras värd interaktioner allt från nytta för skadlig. Häri fokuserar vi på en grupp av nematoder som är patogener av insekter, även känd som entomopatogena nematoder (eller EPN). Två nematod familjer hör till denna grupp av nematoder: Steinernematidae och Heterorhabditidae ^11,13. Deras patogen effekt är i själva verket följer av deras interaktion med fakultativa anaeroba tarmbakterier (Xenorhabdus bakterier förknippar med steinernematids och Photorhabdus bakterier förknippar med heterorhabditids) ^2. Bakterierna vektor från en insekt värd till en annan av den enda fria levande nematod skede, den tredje etappen smitt juvenil (även känd som dauer juvenil, smittsam juvenil eller IJ), som lever i jorden. Väl inne insekten, nematoderna frigör bakterierna i insektens hemolymfa, vilket dödar insekten värd genom massiv blodförgiftning. Bakterien ävenförsämra insekts vävnader och bli nematoderna "näringskälla, låta dem mogna och föröka sig. Vanligtvis är en eller två generationer av vuxna nematoder produceras inom insekts kadaver. Avkomman av de sista vuxna generationen reassociates med några bakterieceller i ett mer specialiserat sätt än deras tidigare närings relation och vårda dessa celler i sina tarmar när de flyttar ut från insekten kadavret i marken där de kommer att invänta en annan insekt att parasitera ^6,11,14 (Figur 1).

Eftersom deras upptäckt 1927, har EPN ansetts värdefulla alternativ till kemiska bekämpningsmedel, eftersom de kan parasitera en lång rad insekter som skadedjur inom jordbruket ^3,4,5. Men under de senaste två decennierna, dessa nematoder och deras symbiotiska bakterier har erkänts som en formbar modellsystem för att studera biologiska, ekologiska och evolutionära aspekter av värd-mikrob interactions ^14.

Målet med denna presentation är att visa de metoder och tekniker som används mest för jordprover och isolering av EPN. En rad olika verktyg finns tillgängliga och kan användas för att samla in jordprover inklusive: jord corers, mursleven, efter hål grävmaskiner, skruvar, provtagningsrören, hand skyfflar, bland andra (Figur 2).

Beroende på syftet med studien, kan två provtagningsstrategier beaktas: a) stratifierat, b) slumpmässigt urval (Figur 3). Den stratifierad sampling används vanligen som en del av en intensiv studie i en specifik eller demarked område under en given tidsperiod. I allmänhet är en transekt demarked och jordprover tas vid föreskrivna intervall i transekt över en period av tid (Figur 3A) ^15. De stickprov användes i allmänhet när man fokuserar på ett stort område. Denna provtagningsstrategi har använts för att studera den mångfald av EPN from ett stort geografiskt område eller region (Figur 3B) ^12. Ett antal faktorer kan anses vara beroende på inriktning av studien, inklusive en mängd olika höjder, marktexturer och livsmiljöer (t ex., Odlade fält, skogar, betesmarker, parker, stränder, strandområden, etc.).

Vi visar insekten-agna teknik, som ursprungligen beskrevs av Bedding och Akhurst ¹ och representerar en enkel och selektiv alternativ för utvinning EPN från jordprover. Detta är ett selektivt förfarande som grundar sig på antagandet att de nematoder (IJ skede) kommer att lockas till en insekt värd och parasitera det. Denna teknik kan också övervägas för isolering av andra insekts patogener som svampar och bakterier ^8,10.

Vi visar också den modifierade Vit fälla teknik som används för att hämta nematod avkomma från infekterade insektsvärdar ^7,14. Detta är en enkel träffathod som erbjuder fördelen av att ha skaffat en "ren" nematod avkomma fria från skräp från degradering insekts kadaver.

Slutligen har de tekniker som beskrivits och som visas i denna artikel motsvarar dem som utformats och / eller utföras i vårt laboratorium såväl som de som beskrivs av olika kollegor och medarbetare.