Многие нематоды связаны с насекомыми, и принимающими их взаимодействия в диапазоне от выгодно ущерб. При этом мы ориентируемся на группу нематод, которые возбудители насекомых, также известный как энтомопатогенных нематод (или EPN). Две семьи нематод принадлежат к этой группе нематод: Steinernematidae и Heterorhabditidae ^11,13. Их патогенный эффект, на самом деле, предоставляемой их взаимодействия с факультативно-анаэробных кишечных бактерий (Xenorhabdus бактерии связать с steinernematids и Photorhabdus бактерий связывают с heterorhabditids) ^2. Бактерии векторением от одного хозяина насекомых к другому единственной стадии свободной жизни нематод, третьей ступени инфекционного несовершеннолетних (также известный как DauER несовершеннолетнего, инфекционного несовершеннолетнего или IJ), который живет в почве. Оказавшись внутри насекомого, нематоды освободить бактерии в гемолимфе насекомого, которые убивают хозяина насекомых массивными септицемии. Бактерии такжеухудшить ткани насекомого и стать источником пищи нематоды », что позволяет им развиваться и размножаться. Как правило, один или два поколения взрослых нематод производятся внутри трупа насекомых. Потомство последние повторно ассоциирует поколения взрослых с нескольких бактериальных клеток в более специализируются манеру, чем их предыдущий питательной отношений, и развивать эти клетки в кишечнике, как они двигаются из насекомых туши в почву, где они будет ждать еще один насекомое паразитировать ^6,11,14 (рис. 1).

Со времени их открытия в 1927, EPN были рассмотрены ценные альтернативы химических пестицидов, поскольку они могут паразитировать широкий спектр насекомых, которые вредителей сельского хозяйства ^3,4,5. Тем не менее, в течение последних двух десятилетий, эти нематоды и их симбиотические бактерии были признаны как податливый модельной системы для изучения биологических, экологических и эволюционных аспектов хост-микроба ВЗАИМОДЕЙСТВИЕнс ^14.

Целью данной презентации является показать методы и приемы наиболее часто используемые для отбора проб почвы и изоляции EPN. Разнообразные инструменты доступен и может быть использован для сбора образцов грунта в том числе: почвы пробоотборников, мастерки, пост-луночное старателей, шнеки, отбор проб труб, ручные лопаты, среди прочих (рис. 2).

В зависимости от цели исследования, две стратегии выборки можно считать: а) расслаиваются, б) случайная выборка (рис. 3). Стратифицированная выборка обычно используется как часть интенсивного изучения в конкретном или демаркированы области за данный период времени. В общем, разрез в демаркированы и образцы почвы берутся в предусмотренных интервалами в разрезе в течение периода времени (фиг.3А) ^15. Случайная выборка обычно используется при фокусировке на обширной территории. Эта стратегия выборки был использован для изучения разнообразия EPN ером большие географические области или региона (рис. 3В) ^12. Ряд факторов может рассматриваться в зависимости от направленности исследования в том числе разнообразных фасады, почвы текстур и мест обитания (например., Возделанные поля, леса, пастбища, парки, морские побережья, прибрежные районы, и т.д.).

Мы показываем технику насекомых травля, которая была первоначально описанный Постельные принадлежности и Akhurst ¹ и представляет собой простое и избирательное альтернативу для восстановления EPN из образцов почвы. Это отборочной процедурой, которая основана на предпосылке, что нематоды (И.Я. этап) будут привлечены к хосту насекомых и паразитировать его. Этот метод также может рассматриваться для выделения других насекомых патогенов, таких как грибов и бактерий ^8,10.

Мы также демонстрируют технику модифицированный белый ловушки, которая используется для извлечения нематод потомство от зараженных насекомых хостов ^7,14. Это усилий встретилсяХод, который предлагает преимущество получения "чистой" нематод потомство должно быть мусора от унизительных трупов насекомых.

Наконец, способы, описанные и показанные в этой статье соответствуют тем, которые задумал и / или выполняются в нашей лаборатории, а также те, которые описаны различные коллегами и сотрудниками.