Utilisation de l'Essai de superposition pour mesurer qualitativement la production bactérienne et la sensibilité à pneumocoque bactériocines

Streptococcus pneumoniae, un colonisateur commun de la communauté polymicrobien du nasopharynx, est en mesure de rivaliser avec d'autres pneumocoques et des espèces étroitement apparentées par la production de peptides antimicrobiens produits par des bactéries (des bactériocines). Chaque souche pneumococcique entièrement séquencé examiné à ce jour contient une version de la b acteriocin- l ike p eptide lieu, blp. Production de bactériocine par le pneumocoque a été démontré un rôle important dans les résultats de la fois in vitro et in vivo à concurrence ^{de 1 à 4.} Dynamique de compétition sont influencés par l'expression de diverses protéines ainsi que les bactériocines de l'immunité apparentées en réponse à une phéromone peptide spécifique. L'induction de la BLP locus est commandé par un système de détection de quorum dans lequel une phéromone peptidique, BLPC, se lie à la kinase de capteur, BlpH, et initie une cascade de signalisation aboutissant à latranscription du locus ^5,6 blp. Il ya quatre variations alléliques de BLPC qui lient chacun à sa BlpH apparenté ^6. Pour la cellule de survivre aux effets de son propre bactériocine, les gènes qui codent pour des protéines apparentées à l'immunité sont transcrits sur le même opéron que chacun des gènes des bactériocines. Tuer se produit si une souche de compétiteur n'est pas en mesure de réguler à la hausse le locus blp en réponse à la phéromone ou exogènes, si la souche est dépourvue du gène de l'immunité spécifique requis pour la protection. Le complexe de transporteur, BlpAB est requis pour la sécrétion et le traitement de la phéromone de peptides et les peptides de bactériocines ^2,4. Récemment, il a été montré qu'une proportion importante des souches de pneumocoques sont les "tricheurs" qui signifie qu'ils ont une mutation dans le gène conservé APLE qui les rend incapables de sécréter des phéromones et des bactériocines ^1,2. Ces souches sont capables de répondre à BLPC exogène ² sécrétée par hennissementsouches de perçage permettant la production de protéines d'immunité.

Bien que, préparations brutes de bactériocines de surnageants peuvent être préparés à partir de souches de producteurs utilisant des méthodes biochimiques étapes pour atteindre la pureté, cette approche n'est pas utile pour le criblage de grandes collections d'isolats et si le niveau d'expression des bactériocines est faible dans le bouillon cultivé cultures ^{2,7- 9.} Le test de recouvrement est utilisé comme un moyen rapide pour étudier la dynamique de concurrence entre les souches qui peuvent exister in vitro. Pour ce faire, une souche pneumococcique est pré-inoculées sur une plaque de gélose et on a laissé croître pour atteindre des concentrations bactériennes locales suffisantes pour l'induction de la BLP locus. Une seconde souche est ensuite inoculée dans une solution d'agar mou fondu qui est ensuite appliqué sur la souche pré-inoculé à tester pour la sensibilité. Pour évaluer l'activité du locus blp (indépendante de l'activité inhibitrice), les souches peuvent être superposées avec une série de three souches rapporteurs BLPC décrites précédemment. Ces souches ont été construites pour contenir l'un des trois allèles blpH différents qui répondent aux trois phéromones les plus courantes BLPC sécrétées par le pneumocoque. Les souches rapporteurs ont un gène lacZ intégré qui est sous le contrôle d'un promoteur dépendant de BlpH et portent une délétion dans le gène qui prévient BLPC auto-stimulation ^10,11.