一个孤立的工作心脏系统的大型动物模型

1，构建Langendorff装置上（ 见图1） 使用3/8“管，心脏水库连接到储血槽。 确保该管道经过滚压泵。注意：这可能需要使用两个3/8“至1/4”管连接器来建立一块1/4“的管子要经过滚子泵。 储血槽连接到加热器/氧合器带有3/8“管。 使用3/8“油管加热器/氧合器连接到一个Y型连接器。 Y形连接器的一个臂连接到离心泵，然后离心泵连接到第二Y形连接器（全用3/8“管）。 附上一张3/8“油管固定止血阀的朝上的手臂，这将作为两个泡沫陷阱和插入压力传感器的手段。 附上一张3/8“油管向下手臂。这部分将附加到AOR抽动套管（ 即后负荷线）。 连接Y形连接件的另一臂的方法采用3/8“管预装载室的流入。确保该管道穿过第二轮泵。 连接多余的3/8“油管这个室的流出。该部分将要连接到左心房（ 即预置线）。 氧气罐和加热装置连接到加热器/氧合器。 夹紧线从Y连接器将要预装载室，因为这条线将不会被使用，直到心脏被置于工作模式。 2，压力 – 体积导管准备在37℃水浴，温一瓶生理盐水。 浸泡光伏电导导管及压力传感器的温生理盐水至少30分钟。 打开的数据采集系统，允许两个热身为至少30分钟。 TLE“> 3。准备Langendorff装置上打开氧气罐，加热装置，辊子泵连接的两个容器，以及离心泵。加热装置应设置为动物的体温（〜36℃）。 根据制造商的说明冲洗血液。慢冲洗速度被推荐用于从血液中（ 如 ，过剩的电解质，溶解细胞物质）更彻底清除废物。 一旦血液清洗，检查血细胞比容水平前，血液稀释。 每瓶洗涤红细胞用生理盐水所需的血球浓度（推荐：20％-25％），并添加到Langendorff装置上。 调整两个泵的速度通过​​该系统（不包括预压腔）开始血流量。 检查血液的混合物的pH和电解质，并调整至生理所使用的物种。注意：为了防止有害的再灌注后的钙通量，在Langendorff装置上的钙离子水平最初应保持在较低水平（0.3-0.5毫摩尔/升）。 如果有一个减少的血细胞比容与钾同时增加，检查乳酸脱氢酶和血浆中游离血红蛋白，以排除溶血。 在溶血情况确实发生，确保所有连接牢固，并没有明显的区域的切向的。 附上米勒导管插入的PowerLab系统的二次压力槽。 根据制造商的说明进行校准的压力传感器。 4，准备为心，以附件的Langendorff装置上注意：正确逮捕心脏应该用于涉及心脏孤立系统中的任何大型动物实验。缺乏心脏停搏的可能损害心脏，这样就不会产生可测量的工作。 Celsior液，或低钾UNIVER威斯康星SITY（UW）溶液被推荐的，因为不仅是这些解决方案类似于临床上所使用的，但该溶液的低钾有助于防止高钾血症，而电路上。的心脏停搏液量将取决于心脏的大小，用1升水足够的猪心。 从储存容器中迅速取出心脏，倒出来的任何存储解决方案在心室，吸干并称重。 为了帮助维持心肌冷温度，直到心脏是准备好了的Langendorff，心脏恢复到储存容器和方向，使主动脉朝上。 插入一个3/8“的套管进入主动脉，并与一个拉链结固定。 5，装上心脏的Langendorff离降低离心泵的缓慢滴入。 滴入血液进入主动脉，直到它被充满血液并完全去除空气。 仔细附上主动脉çannula到上的Langendorff主动脉导管。使附着时注意。 将校准的压力传感器通过止血阀[DS1]到本机主动脉。 开始压力测量和调节离心泵的速度，直到所需的灌注压的实现。注：压力可能转变为冠脉阻力的变化。因此，监测动脉压密切，特别是在最初的再灌注。 提高温度对加热单元心肌内温度的测量是在37°C。注意：有将是加热单元和变化，心肌内的温度进行了调整之间的延迟。因此，温度变化应逐步进行。 得到基线（T = 0）的样品从静脉储血槽，以测量pH，电解质，和其它生化测定。 将温度探头插入隔和监视心肌温度。减小加热单元的温度如果心肌温度超过39°C。 采取血液样本，每15分钟，调整为所需的实验生理学参数。 约1毫摩尔的钙添加到血液溶液，每隔5分钟，以确保离子钙是> 0.8 mmol / L的工作模式开始前的。 6，把心入工作模式插入一个适当大小的套管插入左心房/肺静脉。这可以与任何一个荷包缝合或拉链领带（如适用）来完成。 根据需要关闭在左心房的任何漏洞，可能会泄漏，如其他肺静脉起源与缝合或钉书钉。 调整预压室的高度，使得所述柱的高度得到所需的预加载压力。注意：假设血液/晶体混合物的密度等于水的密度，1毫米汞柱=1.36厘米从主动脉瓣到顶部的距离的血液水平在预置储存器（ 例如 ，15毫米汞柱20.4厘米）。 松开油管将预载室，慢慢地开始预压辊泵，使预紧室和预紧油管用血完全填满。 一旦预压管被完全去除空气，慢慢地填补了左心房和套管用血。 而不让任何空气进入系统，连接预紧油管左心房插管。 7，获取心室压力 – 体积（PV）录音按照制造商的压力和Rho比色皿校正的数据采集系统的使用说明。 用3-0聚丙烯缝线在左心室（LV）的顶点放置一个荷包缝合。 使用16号针头，使荷包内的刺切口。 插入光伏电导导管进入心尖切口。注：理想导管放置将视端上具有LV内的所有感测电极和对LV以外两个激励电极。确保一个适当大小的动物和导管已选定（见讨论）。 按下右上角开始记录数据，并确定有多少容积段是活跃的“开始”按钮。 如果所有段不活跃，调整导管位置，直到所有段都是活动的。注：在导管的轻微扭曲可能是必要的，以优化循环形态如果无法获得信号在各阶层，调整激励电极，并按照制造商的指示感应电极的位置。 一旦获得所需的配置，请按照制造商的数量和alpha校准说明。 使用正确校准导管，获得至少30秒基线压力容积数据。注：这些压力容积环将提供体积依赖新生削弱心脏功能（ 如 ，心输出量，每搏输出量）的测量。 一旦有足够的循环获得，继续到下一个步骤而无需停止数据的记录，以便获得咬合压力 – 容积数据。 闭塞预紧管慢慢地用管钳。注：压力 – 容积环应该开始变得更小和向下移动，并在左侧。这就是所谓的“走”。 获得10-15秒的走了下来，然后松开管夹，以便预紧重新进入左心房。 注：这些压力容积环将提供心脏功能的音量独立测量（ 例如 ，预装搏出功，收缩末期压力-容积关系）。 通过点击“停止”按钮，在屏幕的右上角停止记录数据。 至少等待5分钟重复前闭塞。 重复步骤7.7和7.8，以获得重复测量。