利用荧光蛋白监视非洲锥虫Glycosome动态

布氏锥虫引起非洲昏睡病在人类和一种消耗性疾病，那加那病，牛。在这些疾病的治疗中使用的药物是陈旧的和非常有毒的，疫苗无法提供，并且对于耐药性的发展潜力就必须寻找新的药物靶标^1。

在它的生命周期，T布氏，昆虫载体和哺乳动物宿主之间交替;两台主机，在目前非常不同的环境中的寄生虫必须生存。发生的许多代谢和形态的变化，因为寄生虫暴露于不同的环境条件。其中最显着的变化是单膜界的寄生虫特异性微体观察，称为glycosomes ^13。

血糖水平相对较高（约5毫米）的血液和血液寄生虫（BSF）通过糖酵解WH产生ATP的专ILE线粒体代谢被抑制^14。不像其它真核生物中，糖酵解发生在细胞质中，T.布氏最间隔化的glycosomes ^14,15糖酵解酶。 à吸血过程中的寄生虫就由采采蝇和体验葡萄糖下降，其中下降到检测不到的水平之内被摄入的飞行15分钟。昆虫的新陈代谢，procyclic形式（PCF），寄生虫是更灵活和葡萄糖，以及氨基酸，如脯氨酸，可以在ATP ^16-18的合成中使用。比较蛋白质组学研究揭示生命周期中glycosomal和依赖性变化线粒体蛋白与糖蛋白在血液中的寄生虫增加，参与TCA循环和呼吸链^13,19线粒体蛋白。虽然许多研究都集中在BSF和PCF glycosomes之间的差异，知之甚少发生响应于被膜中的PCF glycosomes的变化ironmental变化。

在苍蝇的肠，血糖水平低，瞬间增加在喂食^20。在大多数在体外研究中，PCF寄生虫生长在含葡萄糖的介质。然而，最近的研究已经表明，在反应显著PCF代谢变化成葡萄糖的可用性^17。在没有葡萄糖，脯氨酸摄取和脯氨酸脱氢酶活性增加了^18。这种变化在线粒体代谢很可能伴随着glycosome组成和形态的变化，但是，这并没有被直接评估。

电子和荧光显微镜是用来共同技术研究glycosome动力学T。布氏 ^2,21-24。这些协议是时间和劳动力密集型的，昂贵的，并且难以适应实时研究和高通量的协议。为了克服这个限制，荧光细胞器报告系统Used来研究哺乳动物和酵母细胞器系统已被修改用于T。布氏 ^12。

荧光的细胞器报告系统已被广泛用于在高等真核生物如酵母，植物和哺乳动物细胞^25-27。在这样的系统中，荧光蛋白融合到靶向蛋白质到特定细胞器的氨基酸序列。靶蛋白的降解或合成是通过荧光测定和改变的细胞器组合物是通过改变细胞的荧光反射。

当增强型黄色荧光蛋白（EYFP）的开放读框融合至II型过氧化物酶体靶向序列（PTS2） ^{如图12所示} ，PTS2eYFP蛋白质导入到成熟，导入感受态glycosomes和荧光可以通过流式细胞仪进行监测。在glycosome组成变化是通过改变细胞的荧光反射。这个系统可以在甲阶辅助咏调控环境引起的变化glycosome组成的机制。

此手稿描述了一种glycosome报告系统在PCF中的寄生虫的产生结合流式细胞术监测活寄生虫实时glycosome动力学，并提供如何被用于跟踪响应于不同的环境变化glycosome组合物的例子。总之，glycosome组合物是由胞外葡萄糖浓度和对数相培养的通路影响到新鲜培养基触发变化glycosome组合物。此系统可以被修改以研究在锥虫及其它寄生虫其它细胞器的动态行为。