الفئران غيري مكاني القلب زرع تقنية
Summary
يصف المخطوطة الخطوات المطلوبة لإجراء عملية زرع قلب منتبذ في الماوس.
Abstract
هو الآن أكثر من أربعين عاما منذ أن تم الإبلاغ عن هذه التقنية لأول مرة كوري، وين وراسل. على الرغم من أنه استغرق عدة سنوات للمختبرات أخرى لإتقان واستخدام هذه التقنية، والآن تستخدم على نطاق واسع من قبل العديد من المختبرات في جميع أنحاء العالم. ووضعت صقل كبيرة لأسلوب الأصلي والتي أعلن عنها في عام 2001 من قبل Niimi. الموصوفة هنا هي التقنيات التي تطورت على مدى أكثر من عقد من الزمان في أيدي ثلاثة جراحين (Plenter، غراتسيا، بيترا) في مركزنا. ويجري الآن مرت هذه التقنيات إلى جيل أصغر من الجراحين والباحثين.
يستند إلى حد كبير على الخبرة Niimi، تطورت الإجراءات المستخدمة في التفاصيل الدقيقة – التفاصيل التي سوف نسعى لربط هنا في مثل هذه الطريقة أن الآخرين قد تكون قادرة على استخدام هذا النموذج مفيد جدا. مثل Niimi، وجدنا أن المساعدات الفيديو إلى التعلم هو مورد لا يقدر بثمن للمبتدئين.
Introduction
في عصر عندما يكون من الممكن لأداء الكلى والرئة والكبد والبنكرياس زرع في الفئران، وحجر الزاوية في زرع الأعضاء البحوث الأساسية وعلم المناعة منذ عام 1973 لا تزال 1-4 في منتبذ القلب نموذج زرع في الماوس. في السنوات الفاصلة وقد نشرت العديد من الصحف بالتفصيل تحسينات / التحسينات 5،6 لهذا الإجراء.
كنموذج للزرع الأعضاء الصلبة أوعية دموية في المقام الأول هذا الإجراء لا يعلى عليه. مرة واحدة يتقن هذا الإجراء يفسح المجال للبحث في الاستجابات رفض خيفي 7، وتطوير vasculopathies المزمنة 8 وآليات إصابة نقص التروية ضخه 9.
مفاتيح التعلم بنجاح هذا الإجراء هي تماما مثل أي عملية جراحية أخرى، والصبر من جانب المدرب والمتدرب والاهتمام بالتفاصيل. في بداية عملية للجراح جديدة سوف تجد أن رمهلا سوف يقضون ساعات طويلة على كل زرع. مع اكتساب الخبرة، وسوف مرات الجراحية، وبالتالي نقص التروية، والحد بشكل كبير. سوف الالتفات إلى تفاصيل كل خطوة تؤدي عاجلا أو آجلا إلى النجاح.
في حين أن مدرب يمكن أن تفعل أفضل ما لديهم لتمرير، وتوقع، كل حفرة من السقوط المحتملة التي قد يكون واجه خلال هذه العمليات الجراحية، فإن المتدرب "خلاقة" من المحتمل العثور على بعض من تلقاء نفسها!
أساسيات الإجراء هي كما يلي. الجهة المانحة قوس الأبهر الصاعد هو نهاية إلى الجانب anastomosed إلى الشريان الأورطي البطني المتلقية والمانحة الشريان الرئوي هو نهاية إلى الجانب anastomosed إلى المستلم البطن الوريد الأجوف السفلي (IVC). يتدفق الدم من الشريان الأورطي المتلقي في الأزياء إلى الوراء من خلال الشريان الأورطي المانحة إلى الشرايين التاجية. مرة واحدة وقد تدفقت الدماء من خلال نظام التاجي أنها تستنزف في الأذين الأيمن عبر الجيب التاجي، وضخها في البطين الأيمن وثم عبر الشريان الرئوي إلى المتلقي IVC. بهذه الطريقة يتم توفير نظام التاجية الدم الشرياني والجيوب الأنفية إيقاع يعود إلى الكسب غير المشروع في غضون 1-2 دقيقة من ضخه. منذ غرف الأيسر من القلب هي أساسا تحت ضغط تحميل جدار البطين الأيسر الحرة سوف ضمور مع مرور الوقت.
Protocol
Representative Results
Discussion
هذه التقنية الجراحية ليست سهلة لإتقان، ولكن بمجرد يتقن هو أداة بحث قوية. يكافأ الباحث / الجراح التي كتبها اتساق الأسلوب والاهتمام بالتفاصيل. الصبر أثناء مرحلة التعلم هو مفتاح الحل. والتي نشرتها Niimi 3، مع المعونة من أداة تعليمية الفيديو يقوم يأخذ في المتوسط من 11 محاولات لتحقيق أول الإجراء الناجح و78 محاولات لتحقيق نسبة نجاح 90٪. أصبحت أشرطة الفيديو أداة تعليمية هامة في جراحة 11،12.
استكشاف الأخطاء وإصلاحها
نزيف من anastomoses قد تحدث وهذا هو الأرجح بسبب إما عدم وجود التوتر الصحيح في الغرز، أو عدد قليل جدا من الغرز. في حين أن وكيل تخثر حمل مثل جلفوم يمكن أن تكون مفيدة للحد من التسريبات، ونحن نوصي بأن الجراح يجب أن تعتمد على أسلوب جيد. ازدحام غير الضرب القلب هو الأكثر شيوعا نظرا لanastomoses التي هي ضيقة جدا، لا سيما في الجانب الوريدي. A غير beati-نانوغرام، هو سبب الكسب غير المشروع غير perfused-عادة من قبل فقاعة الهواء التي قد سافر إلى واحد من الشرايين التاجية. فمن المهم للحفاظ على حقل الرطوبة إلى الرطب لتجنب دخول فقاعات في الأوعية.
قيود تقنية
هذه التقنية ليست مناسبة إذا كان الباحث يريد التحقيق في الآثار المترتبة على قلب يعمل بشكل كامل. وهذا يتطلب تقنية زرع مثلي، الذي أثبت حتى الآن من المستحيل القيام بها.
أهمية فيما يتعلق بأساليب موجود
إذا كان أحد يرغب في دراسة الآثار على أوعية دموية بالكامل، زرع الأعضاء الصلبة في الماوس، ثم نموذج القلب وربما كان أبسط لإتقان. نماذج الماوس من الرئة والكلى وزراعة الكبد لا وجود لها، ولكن هي أصعب بكثير للتعلم والكمال.
الخطوات الحاسمة ضمن البروتوكول
فمن الأهمية بمكان أن سمك كامل عوتتحقق الحمير بما في ذلك الأوعية الدموية البرانية والبطانية من الإبرة خياطة. Evertion من حواف يضمن أيضا أن هناك البطانية إلى البطانية الاتصال، والذي يساعد في الشفاء والختم من anastomoses. وثمة عامل آخر في غاية الاهمية هو ضمان أن التوتر من خطوط الدرز توصيلي هو أيضا الأمثل. فضفاضة جدا، وسوف يكون هناك تسريب رجعة فيه، ضيقة جدا وتضيق لتدفق سينتج. إذا على الجانب الشرياني وهذا سوف يؤدي ذلك إلى ضعف التروية من الكسب غير المشروع، إذا على الجانب الوريدي فإن القلب يؤدي ازدحام.
قبل كل شيء، سوف التكرار، والاتساق الداخلي والاهتمام المستمر بالتفاصيل تسفر عن نتائج كبيرة وقابلة للتمويل والبيانات للنشر.
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
الكتاب أود أن أشكر الدكتور بياجيو بيترا لعمله السابق في مختبرنا.
Materials
| Instrument | Roboz # | Fine Science Tools # | Arosurgical # |
| Straight micro-dissecting forcep #5 | RS-5015 | 11295-51 | |
| Curved micro-dissecting forcep #7 | RS-5047 | 11297-00 | |
| Curved serrated forcep | RS-5137 | 11052-10 | |
| Vannas micro-dissecting scissors, short | RS-5610 | 09.140.08 | |
| Micro-dissecting scissors, straight, sharp, long | 11.602.11 | ||
| Micro spring handle needle holder | 11.549.15 | ||
| Straight mosquito forcep | 91308-12 | ||
| Micro-dissecting scissors, straight, blunt | RS-5962 | 14078-10 | |
| Micro-dissecting scissors, curved, blunt | RS-5981 | 14079-10 | |
| Micro retractor | RS-6540 | ||
| Instrument tray, 10” x 6 ½” x ¾” | RT-1350S | ||
| Silk suture, 5/0, 22.5m spool | 18020-50 | ||
| Suture | |||
| 10/0 nylon | T4A10Q07 | ||
| 5/0 silk | E19A05N | ||
| Gloves | Drapes | ||
| Biogel from Medex Supply | Precept, #64-9012-9 | ||
| Syringes | Cotton applicators | ||
| B-D 1cc insulin, #329424 | Fisher-brand, #23-400-100 | ||
| Povidone-Iodine swabs | |||
| PDI, #B40600 | |||
| 4/0 Cotton ties | |||
| Domestic cotton autoclaved with instruments | |||
Referencias
- Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. Heart transplantation in congenic strains of mice. Transplant Proc. 5 (1), 733 (1973).
- Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection. Transplantation. 16 (4), 343 (1973).
- Niimi, M. The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3,000 operations by one surgeon. J Heart Lung Transplant. 20 (10), 1123 (2001).
- Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse. J Invest Surg. 26 (4), 223 (2013).
- Su, S., et al. Modified suture technique in a mouse heart transplant model. Asian J Surg. 34 (2), 86 (2011).
- Mao, M., et al. A novel and knotless technique for heterotopic cardiac transplantation in mice. J Heart Lung Transplant. 28 (10), 1102 (2009).
- Csencsits, K. L., Bishop, D. K. Contrasting alloreactive CD4+ and CD8+ T cells: there’s more to it than MHC restriction. Am J Transplant. 3 (2), 107 (2003).
- Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy. Nat Protoc. 2 (3), 471 (2007).
- Linfert, D., Chowdhry, T., Rabb, H. Lymphocytes and ischemia-reperfusion injury. Transplant Rev. 23 (1), (2009).
- Grazia, T. J., et al. Acute cardiac allograft rejection by directly cytotoxic CD4 T cells: parallel requirements for Fas and perforin. Transplantation. 89 (1), 33 (2010).
- Liu, F., Kang, S. M. Heterotopic heart transplantation in mice. J Vis Exp. (6), (2007).
- Plenter, R. J. Heterotopic heart transplantation in mice. European Society for Surgical Research. 45th Annual Congress. , (2010).
