Het gebruik van gaschromatografie tot veranderingen in de samenstelling van vetzuren Analyseer in Rat leverweefsel tijdens de zwangerschap

Gaschromatografie (GC) is een gevestigde techniek voor de opname van vetzuren in aanvulling of fysiologische aandoeningen zoals obesitas (en verwante ziekten zoals diabetes) of zwangerschap ³ identificeren en kwantificeren in lipide zwembaden en celmembranen ^{1,2 – 5.} Het is ook geschikt voor het analyseren van de soorten en hoeveelheden van vetten in voedingsmiddelen. Dit is handig wanneer het karakteriseren van experimentele diëten, alsmede ervoor te zorgen dat de voedingsindustrie voldoet aan regelgeving. Zo kunnen GC worden gebruikt om de identiteit en hoeveelheid van vetzuren in een product, zoals een voedingssupplement bevestigen zodat etikettering juist is en regels worden nageleefd ^6,7. Analyse van vetzuren kan waardevolle inzichten in de vetstofwisseling in gezondheid en ziekte, de gevolgen van dieet te veranderen, en het effect van veranderingen in de fysiologische toestand ⁸ bieden. Gebruik van GC om monsters te bestuderen tijdens de zwangerschap is belangrijk verstrektinformatie over wijzigingen in vetzuur en complexe lipiden homeostase ^3.

Voorafgaand aan de chromatografische scheiding, worden meestal lipiden geëxtraheerd uit het monster met de oplosbaarheid van lipiden in oplosmiddelmengsels van chloroform en methanol. Natriumchloride wordt toegevoegd om de scheiding van het mengsel in waterige en organische fasen lipide bevattende ^9,10 vergemakkelijken. Complexe lipide klassen van belang kan uit het totale lipide extract gescheiden worden door vaste-fase-extractie (SPE). Deze scheidingstechniek spoelt lipide klassen op basis van hun polariteit of bindingsaffiniteit. Triacyglycerols (TAG) en cholesteryl esters (CE) eerst geëlueerd als een gecombineerde fractie verder klassen, fosfatidylcholine (PC), Fosfatidylethanolamine (PE) en niet-veresterde vetzuren (NEFA) worden geëlueerd door het verhogen van de polariteit van de loopvloeistof . De scheiding van TAG van CE maakt gebruik van de binding van TAG alleen voor een frisse SPE cartridgdge, waardoor CE worden geëlueerd. TAG kan vervolgens worden geëlueerd door het verhogen van de polariteit van het eluerende oplosmiddel ^9,10. Deze methode maakt meerdere monsters tegelijkertijd worden gescheiden met een hogere opbrengst dan wordt bereikt met dunnelaagchromatografie, waardoor relatief klein formaat monsters (bijv. <100 gl plasma of serum, <100 mg weefsel) kunnen worden geanalyseerd ^11,12.

GC is een gevestigde techniek voor het eerst beschreven in 1950, werd gesuggereerd dat de mobiele fase in het toen vloeistof-vloeistof systemen kunnen worden vervangen door stoom. Het werd aanvankelijk gebruikt voor de olie-analyse, maar snel uitgebreid naar andere gebieden, zoals aminozuur analyse en lipide biochemie, die nog steeds van groot belang. Vooruitgang in GC apparatuur en technologie, zoals de ontwikkeling van capillaire kolommen uit de eerder gebruikte gepakte kolommen heeft geleid tot de huidige technieken die vetzuren kunnen wordenefficiënter afgescheiden bij lagere temperaturen resulteert in GC wordt routinematig gebruikt om vetzuren in diverse onderzoeken ¹³ identificeren en te kwantificeren.

GC vereist vetzuren worden gederivatiseerd zodat zij voldoende vluchtig worden geëlueerd bij redelijke temperaturen zonder thermische ontleding kan worden. Meestal gaat de substitutie van een functionele groep die waterstof esters, thio-esters of amiden voor analyse vormen. Methylesters worden vaak bestudeerd derivaten die worden geproduceerd door methylering. In deze werkwijze de esterbindingen in complexe lipiden worden gehydrolyseerd tot vrije vetzuren, die transmethylated om vetzuurmethylesters (FAME) vormen loslaten. Het resulterende profiel van FAME, bepaald met GC, wordt aangeduid als de vetzuursamenstelling en kunnen gemakkelijk worden vergeleken tussen verschillende experimentele groepen ^9,10. De techniek kan zowel de verhoudingen van indiUAL vetzuren en hun concentraties te meten.

Naast het gebruik van GC te analyseren vetzuren in de voeding studies en in de voedingsmiddelenindustrie kan de techniek worden gebruikt in diverse analytische velden. Bijvoorbeeld, milieu-analyses met behulp van GC omvatten het meten van verontreiniging van het water door insecticiden en bodemanalyses meten chlorobenzeen inhoud. In toxiciteitsstudies, is GC ook gebruikt om illegale stoffen in urine en bloedmonsters van personen te identificeren, dergelijke sportprestaties versterkers ¹² en het vermogen om complexe mengsels van koolwaterstoffen te scheiden maakt deze techniek populair in de aardolie-industrie voor petrochemische analyse ^12.

Zwangerschap wordt geassocieerd met significante veranderingen in de vetzuursamenstelling van maternale weefsels, met name in het gehalte aan omega-3 (n-3) en omega-6 (n-6) poly-onverzadigde vetzuren acids (PUFA) ^3. In de huidige studie, illustreren wij het gebruik van GC in de meting van vetzuren door het beschrijven van het gebruik bij de analyse van de vetzuursamenstelling van leverweefsel genomen van ruwe en zwangere ratten laag en vetrijke diëten met verschillende oliebronnen. De experimentele diëten die hier waren een vetarm sojaolie gebaseerd dieet, een vetrijke soja-olie gebaseerde dieet (130,9 g totaal vet / kg totaal vet) of een vetrijke lijnzaad olie gebaseerde dieet (130,9 g totaal vet / kg dieet), voorzag in 20 dagen. De volledige voedingsstoffen en vetzuursamenstelling van deze diëten zijn eerder ¹⁴ beschreven. De sojaolie diëten rijk aan linolzuur (18:02 n-6) en bevatten enkele α-linoleenzuur (18:03 n-3) als de lijnolie dieet rijk aan α-linoleenzuur. Deze vetrijke diëten vertegenwoordigen verschillende rantsoenen linolzuur tot α-linoleenzuur (rantsoenen 8:01 en 1:01, respectievelijk). Werkwijze voor het isoleren van individuele lipideklassen en analyse door GC well vastgesteld en gevalideerd, en is eerder ^10, maar zonder de gedetailleerde technische beschrijving gevonden hierin gepubliceerd.