Smagssansen giver et insekt for at opdage en bred vifte af opløselige kemikalier og spiller en vigtig rolle for accepten af ​​en nærende substans, eller afvisning af et farligt eller giftigt én. Taste menes også at spille en rolle i mate udvælgelse, gennem påvisning af feromoner ^1-5. Disse vigtige og forskelligartede funktioner har gjort det insekt smag systemet en overbevisende mål for undersøgelse af, hvordan sansesystemer oversætte miljømæssige signaler i relevante adfærdsmæssige udgange.

Den primære enhed i Drosophila melanogaster smag system er smagen hår, eller sensillum. Molekyler indtaste sensillum via en pore på spidsen ^2,6. Sensilla findes på labellum, benene, vingen margen og svælget ^6.. På labellum, er antallet og placeringen af ​​sensilla stereotype. Der er tre morfologiske klasser af sensilla baseret på længde: Den lange (L), mellemprodukt (I) og korte (S ) Sensilla ^7,8. Hver sensillum indeholder enten to (I-type) eller fire (L-og S-type) gustatory receptor neuroner (GRNs) ^9. Forskellige GRNs reagere på forskellige kategorier af smags stimuli: bitter, sukker, salt og osmolaritet ^7,10 og udtrykke forskellige delgrupper i gustatoriske receptorer ^8,11-13. Kun jeg og S-typen sensilla indeholde bitter-reagerende GRNs ^8,10. Den GRNs projektet til subesophageal ganglion (SOG) og deres aktivering af smag molekyler videresendes til den højere centralnervesystemet til dekodning, hvilket resulterer i en adfærdsmæssig reaktion ^6. Det relativt lille antal neuroner og modtagelighed for molekylære og adfærdsmæssige analyse gør Drosophila smag systemet en fremragende model til undersøgelse af gustatory i almindelighed. Den relative lethed, hvormed systemet kan manipuleres via genetisk mutation eller GAL4-UAS ekspressionssystem fungerer også som et værdifuldt redskab ^14,15.

NDHOLDET "> Fordi disse sensilla stikker ud fra overfladen af ​​labellum, de gør glimrende mål for elektrofysiologi. kan overvåges affyring af GRNs hjælp ekstracellulære optagelse. Historisk set sidevæg optagelse metode, som bruger et glas elektrode indsat i sensillum at optage neuronal aktivitet, ²⁶ er blevet anvendt. denne metode er imidlertid teknisk udfordrende at udføre, og det er vanskeligt at optage langt fra hvert præparat. Spidsen-optagelse metode, der måler responsen af neuroner med en elektrode, samtidig leverer en tastant, da er blevet den foretrukne metode ^9,16. Det er blevet anvendt til at undersøge smagen system Drosophila melanogaster ^8,10,17,18 samt en række andre insektarter ^19-23. Det har blevet lettet betydeligt af udviklingen af ​​tastePROBE forstærker, der overvandt en af ​​de store ulemper ved tip-optagelse metode ved at kompensere forden store potentielle forskel mellem reference elektrode og insekt sensillum, tillade GRN virkningspotentialer skal registreres uden overdreven forstærkning eller filtrering ^24. En anden vigtig udvikling var brugen af tricholine citrat som optagelsen elektrolyt ^25. TCC undertrykker svar fra osmolariteten-følsomme GRN og stimulerer ikke salt-følsomme GRN, hvilket gør svarene genereret af bitter og sukker tastants meget lettere at analysere ^25.

Her beskriver vi, hvordan spids indspilning af Drosophila labellar sensilla øjeblikket udføres i Carlson laboratoriet. Denne protokol vil forklare, hvordan man etablerer en passende elektrofysiologi rig, hvordan man forbereder fluen, og hvordan man udfører smag optagelser. Vi præsenterer også nogle repræsentative data opnået ved at optage fra delmængder af Drosophila sensilla, samt nogle almindelige problemer og mulige løsninger, der kan opstå ved brug af denneteknik.