Infarto de miocardio y la evaluación de resultados funcionales en los cerdos

Todos los experimentos in vivo se realizaron de conformidad con la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio elaborados por el Instituto de Recursos Animales de Laboratorio. Los experimentos fueron aprobados por el Comité de Experimentación Animal local. 1. Los medicamentos, anestesia, acceso venoso, y la intubación La medicación y anestesia La premedicación Iniciar la amiodarona 150 mg / kg 10 días antes de la cirugía para prevenir arritmias. Continuar amiodarona en una dosis de 100 mg / kg desde el día del procedimiento hasta el día 28. Reducir la dosis a 50 mg / kg el día 29 y continúe hasta el final del estudio. Iniciar la terapia antiplaquetaria, 1 mg / kg de clopidogrel día 3 antes de la cirugía y 4,5 mg / kg de ácido acetilsalicílico 1 día antes de la cirugía. Continuar clopidogrel 1 mg / kg por día y ácido acetilsalicílico 80 mg / día. Comience medicamentos para el dolor 1 día antes de la cirugía por el parche de fentanilo, 25g / h para los cerdos ~ 70 kg. Continuar el uso de parches de fentanilo durante 24 horas después de la operación para garantizar la medicación del dolor adecuado. Asimismo, monitorear diariamente para detectar signos de malestar putativo (es decir, el comportamiento, la respiración, la marcha, movilidad, etc) para aumentar la medicación para el dolor. Fast del animal durante 12 horas, mantener el acceso ilimitado al agua. Anestesia Para prevenir el estrés y molestias innecesarias, sedar al cerdo en su estable por inyección intramuscular de una mezcla de midazolam 0,4 mg / kg, la ketamina 10 mg / kg, y atropina 0,014 mg / kg. Obtener acceso venoso por canulación de la vena del oído con una cánula iv 18 G. Inducir la anestesia mediante la administración intravenosa de 5 mg / kg sodiumthiopental, y dar 1,000 / 100 mg de amoxicilina / ácido clavulánico para prevenir las infecciones. El cerdo recibirá 1000/100 mg de amoxicilina / ácido clavulánico el día después de la cirugía como el tratamiento antibiótico. Intube el cerdo usando un endotrachtubo eal (tamaño 8.5 para cerdos de ~ 70 kg). Si es necesario realizar globo de ventilación con una frecuencia de 12/min y transportar el cerdo a la sala de operaciones. A la llegada a la sala de operaciones, comience inmediatamente la ventilación mecánica con presión positiva con FiO 2 0,50, 10 ml / kg de volumen corriente, y una frecuencia de 12/min bajo continúa capnografía. Iniciar la anestesia equilibrada por continúa la infusión intravenosa de una combinación de midazolam 0,5 mg / kg / h, sufentanilo 2,5 microgramos / kg / h y bromuro de pancuronio 0.1 mg / kg / h. Durante toda la operación, controlar continuamente el ECG, la presión arterial sanguínea, la temperatura y la capnografía para medir la profundidad de la anestesia. Por ejemplo, si una taquicardia sinusal está presente, comprobar si medicamentos para el dolor y / o anestesia son adecuados. Infundir 4,3 mg / kg de amiodarona en 500 ml venofundin 6% por vía intravenosa. Monitorear el ritmo cardiaco por un 5 conduce ECG. Afeitado y limpiar el cuello y trasera limzona b. Insertar un catéter de Foley. 2. Ecocardiografía transtorácica Colocar el animal en decúbito lateral derecho. En cerdos Landrace como cerdos Dalland, sólo paraesternal (eje largo y corto) pueden obtenerse. Debido a la forma del tórax, la adquisición vista apical no es factible. Oriente y obtener paraesternal eje largo en 2D (modo B). Determine las dimensiones del VI en diástole y sístole final en modo-M. Girar la sonda de eco 90 ° en sentido horario, mientras que el mantenimiento de su posición paraesternal para adquirir los puntos de vista de eje corto LV en los niveles de la válvula mitral, el músculo papilar y el ápice. El eje corto del músculo papilar y el ápice puede requerir la colocación de la sonda del eco de uno o dos espacios intercostales inferiores respecto a la posición a corto en eje de la válvula mitral. 3. Quirúrgica Acceso Preparación y Vascular Disinfect las áreas quirúrgicas con yodo 2% y usar paños quirúrgicos estériles para cubrir las partes no estériles de la de cerdo. Haga una incisión medial en el cuello. Pasar la línea alba para minimizar el daño muscular y sin rodeos acercarse a la arteria carótida y la vena yugular interna junto a la tráquea. Aislar cuidadosamente la arteria carótida y la vena yugular interna. Asegúrese de que el nervio vago está en buen estado. Coloque suturas Vicryl 2-0 alrededor de ambos buques para ganar el control de buques. Lograr el acceso arterial mediante canulación de la arteria carótida interna con una vaina 8F utilizando la técnica de Seldinger. Fijar la funda a la arteria, asegúrese de que la arteria no está totalmente ocluida por la sutura. El acceso venoso puede ser adquirido por canulación de la vena yugular con una vaina 9F también usando la técnica de Seldinger. Antes de fijar la vaina asegúrese de que la vena se liga. Alternativamente, la arteria femoral también puede utilizarse para el acceso arterial. Administrar 100 IE / kg de heparina inmediatamente después de la inserción de la vainaHs para inhibir la formación de trombos. Para una medición de la presión arterial estable y constante, canular una de las arterias más pequeñas en una de las extremidades posteriores haciendo una pequeña incisión encima de la arteria. La arteria se encuentra justo debajo de la piel, las pulsaciones se puede sentir a través de la piel. Aislar la arteria de su tejido circundante. Coloque 2 suturas Vicryl 2-0 alrededor del barco, 1 proximal y distal 1. Ligar el lado distal e insertar una cánula iv 18 G y asegure firmemente conectar la presión. 4. Presión Invasiva Análisis del bucle de volumen Insertar un catéter Swann-Ganz (SG) a través de la vaina previamente colocado en la vena yugular interna. Conecte un dispositivo de gasto cardíaco a la parte de la SG, que culmina en el lumen proximal. Inyectar 5 ml de solución salina 0,9% en el lumen proximal de la SG y medir el gasto cardíaco; repetir esto tres veces y promediar los índices. Calibre el sistema PV utilizando la anteriormentedeterminado el gasto cardíaco. Inserte el catéter 7F conductancia a través de la arteria carótida en el ventrículo izquierdo bajo guía fluoroscópica. Seleccione el segmento más grande presente en la LV para mediciones de volumen y realizar una línea de base escanear bajo apnea. Una vez completada la calibración del volumen, ficha 10 a 15 latidos bajo apnea. Retire la SG y colocar un catéter de balón en la vena cava inferior a nivel de la membrana bajo guía fluoroscópica. Realice una reducción de la precarga mediante el inflado del globo bajo la apnea y registrar las correspondientes PV-Loops. 5. Intracoronaria de presión y medida del caudal Diluir la nitroglicerina en una concentración de 100 g / ml y diluir la adenosina en una concentración de 30 mg / ml. Colocar un catéter guía 8F en el ostium de la arteria coronaria izquierda. Coloque el cable de presión / flujo combinado en la parte proximal de la coronaria izquierda ArterY. Administrar 200 mg de nitroglicerina intracoronaria y normalizar la presión distal (Pd), medido por el alambre, con la presión arterial. Coloque el cable en la parte media de la arteria descendente anterior izquierda (LAD). Inicie la medición de presión de la línea de base y el flujo. Inducir hiperemia administrando 60 mg de adenosina intracoronaria, enjuague con 2 ml de solución salina y medir la presión y el flujo hiperémico. Espere a que el flujo de restaurar a los valores basales. Repita la medición dos veces. Infundir otra nitroglicerina intracoronaria 200 mg y repita los pasos 1,6 y 1,7 para la arteria coronaria circunfleja izquierda. 6. Inducción de MI Coloque el catéter desfibrilación intracardiaca en el ventrículo derecho utilizando la vaina venosa. Los electrodos distales deben estar en el ápex del ventrículo, los electrodos proximales en la aurícula y / o en la vena cava superior. Conecte el catéter al desfibrilador y ponerlo a 50J. Medir el diámetro de la LAD distal de la segunda diagonal (D2) en AP y LAO 30 ° vista. Elija un balón de angioplastia con un diámetro de acuerdo con el diámetro de la parte distal de la LAD D2 (Figura 1). Coloque un alambre guía a través del catéter guía distal de la ADA. Haga avanzar el catéter de globo sobre el alambre guía. Coloque el globo distal del D2. Administrar 30 IE / kg de heparina. Inflar el globo hasta que la presión coincida con el diámetro adecuado de la LAD. Verifique la oclusión total de la LAD por angiografía (Figura 1). Cubra el campo de trabajo estéril y la herida en el cuello con telas oscuras estériles. Libere el pecho de cualquier cobertura para que esté disponible para las compresiones en el pecho o la desfibrilación transtorácica. Comprobar la presión en el globo durante los próximos 90 min y restaurar la presión si es necesario. En caso de fibrilación ventricular: Comenzar inmediatamente las compresiones torácicas con una frecuencia de 100/min. Administrar 300 mg de amiodarona por vía intravenosa como un bolo rápido (~ 1 min). Comience desfibrilación intracardiaca, dar choques de 50 J. Después de 5 choques sin éxito, reinicie las compresiones torácicas. Cambie la desfibrilación intracardiaca a la desfibrilación transtorácica y choque con 150 J. En caso de shock sin éxito, cambiar a 200 J. Si es necesario, administrar otra dosis de 150 mg amiodaron y / o 1 mg de adrenalina. Repita adrenalina dos veces con intervalos de 3-5 minutos, cuando sea necesario. Continúe las compresiones torácicas, intercalados con desfibrilación transtorácica Terminando el procedimiento quirúrgico (para seguimiento a largo plazo) Después de 90 min cheque por angiografía si el LAD es todavía totalmente ocluida. Administrar otro 30 IE / kg de heparina y desinflar el globo. Compruebe si la reperfusión. Quite el globo desinflado con la orientacióning catéter de la vaina de la carótida. Retire con cuidado la vaina arterial y sujeta la arteria carótida inmediatamente con una pinza de anastomosis (Figura 1). Uso continúa puntos (6-0 prolene) para cerrar la arteria carótida. Retire la abrazadera y compruebe si hay fugas. Retire el catéter desfibrilación interna y quitar la funda de la vena yugular interna. Ligar proximal de la entrada de la vaina. Cierre el tejido subcutáneo y la piel del cuello en dos capas usando Vicryl 2-0. 7. Imagen de Resonancia Magnética Cardiaca Colocar el animal en la cabeza camilla por primera vez en la posición supina con anestesia continua. Coloque un phased-array bobina cardíaca dedicado sobre el pecho del animal. Para la planificación de imagen obtener imágenes de scouts en el eje corto y de dos cámaras eje largo. Adquirir ECG-gated-estado de equilibrio precesión libre (SSFP) cine de eje corto (desde el ápice hasta la base de LV) y dos chamber vistas largo de los ejes. Realce tardío de gadolinio (RTG) se puede adquirir mediante una recuperación de la inversión 3D-turbo-gradiente-eco-técnica de 15 minutos después de la dosis doble inyección de un bolo iv de un agente de contraste gadolinio basada. Realizar análisis fuera de línea con el software validado de los parámetros funcionales. Evaluar la fracción de eyección ventricular izquierda (FEVI), masa del VI, el volumen diastólico final, el volumen sistólico final, el volumen sistólico, el gasto cardíaco y la masa de la cicatriz. 8. Final del Estudio y tamaño del infarto Al final del estudio, seguir los protocolos 1-5 y 7 para adquirir el seguimiento de las mediciones. Hacer una mediana de 30-40 cm incisión justo debajo de la horquilla esternal a un punto justo debajo del apéndice xifoides. Avanza a través de la línea alba hasta el esternón. Dividir el xifoides y usar tijeras Klinkenberg para separar el esternón posterior del pericardio con precaución. Después de usar las tijeras sin rodeos continuar aún más la separación. Realice una esternotomía by por ejemplo, utilizando un martillo y un cuchillo Lebsch. Sangrado de la médula ósea se reduce al mínimo por el roce de cera de hueso en la médula ósea. Abra el tórax con un retractor de esternón. Introduzca el espacio pleural tercera y localizar la vena cava inferior en el mediastino. Humanamente eutanasia al animal cortando la vena cava inferior bajo anestesia profunda. Eliminar la sangre con un dispositivo de succión. Coloque una batería de 9 V en el ápice para inducir la fibrilación ventricular. Después de la escisión del corazón, cortar el derecho y el ventrículo izquierdo en cinco rebanadas de base hasta el ápice y se incubaron en 1% de cloruro de trifenil-tetrazolio disuelto en 0,9% de solución salina a 37 ° C durante 15 min. A continuación, lavar las rebanadas en 0,9% de solución salina y fotografiar las rebanadas de ambos lados.