Infarto miocardico e funzionale Outcome Assessment in Pigs

Tutti gli esperimenti in vivo sono stati condotti in conformità con la guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio preparati dall'Istituto di Laboratorio risorse animali. Gli esperimenti sono stati approvati dal Comitato locale sperimentazione animale. 1. Farmaci, Anestesia, accesso venoso, e intubazione Farmaci e Anestesia Premedicazione Inizia amiodarone 150 mg / kg 10 giorni prima di un intervento chirurgico per prevenire le aritmie. Continua amiodarone in una dose di 100 mg / kg dal giorno della procedura fino al giorno 28. Ridurre il dosaggio a 50 mg / kg il giorno 29 e continuare fino alla fine dello studio. Inizia terapia anti-piastrinica, 1 mg / kg clopidogrel dal giorno 3 prima dell'intervento e 4,5 mg / kg di acido acetilsalicilico 1 giorno prima dell'intervento. Continua clopidogrel 1 mg / kg al giorno e acido acetilsalicilico 80 mg / giorno. Inizia farmaci antidolorifici 1 giorno prima dell'intervento da patch Fentanyl, 25mcg / h per i suini ~ 70 kg. Continuare l'uso di cerotti di fentanyl per 24 ore dopo l'intervento per assicurare un adeguato farmaci antidolorifici. Inoltre, il monitor giornalmente eventuali segni di disagio putativo (cioè il comportamento, la respirazione, l'andatura, la mobilità, ecc) per aumentare antidolorifici. Digiunare l'animale per 12 ore, mantenere l'accesso illimitato all'acqua. Anestesia Per prevenire lo stress e disagio inutile, sedare il maiale nel suo stabile mediante iniezione intramuscolare di una miscela di midazolam 0,4 mg / kg, ketamina 10 mg / kg, e atropina 0.014 mg / kg. Ottenere l'accesso venoso dal cannulating la vena orecchio con un iv cannula 18 G. Indurre anestesia mediante somministrazione endovenosa di 5 mg / kg sodiumthiopental, e dare 1.000 / 100 mg di amoxicillina / acido clavulanico per prevenire le infezioni. Il maiale riceverà 1000/100 mg amoxicillina / acido clavulanico il giorno dopo l'intervento chirurgico come trattamento antibiotico. Intubare il maiale utilizzando un endotrachtubo EAL (formato 8.5 di suini del peso di circa 70 kg). Se necessario eseguire pallone di ventilazione con una frequenza di 12/min e trasportare il maiale alla sala operatoria. All'arrivo sul teatro dell'operazione, iniziare immediatamente la ventilazione a pressione meccanica positiva con FiO 2 0,50, 10 ml / kg di volume corrente, e una frequenza di 12/min sotto continua capnography. Inizia anestesia bilanciata dalla continua infusione endovenosa di una combinazione di midazolam 0,5 mg / kg / ora, sufentanil 2,5 microg / kg / ora e pancuronio bromuro di 0,1 mg / kg / ora. Durante l'intera operazione, il monitoraggio continuo ECG, pressione sanguigna arteriosa, temperatura e capnografia per misurare la profondità dell'anestesia. Ad esempio, se una tachicardia sinusale è presente, verificare se farmaci antidolorifici e / o anestesia sono adeguate. Infondere 4,3 mg / kg di amiodarone in 500 ml venofundin 6% per via endovenosa. Controllo del ritmo cardiaco da un 5 conduce ECG. Shave e pulire il collo e posteriore limzona b. Inserire un catetere di Foley. 2. Ecocardiografia transtoracica Posto l'animale in posizione laterale di destra. Nei suini Landrace come maiali Dalland, solo vista parasternale asse (lungo e corto) possono essere ottenuti. A causa della forma del torace, acquisizione vista apicale non è fattibile. Orient ed ottenere parasternale vista lunga asse in 2D (B-mode). Determinare le dimensioni LV a fine diastole e sistole end in M-mode. Ruotare la sonda eco di 90 ° in senso orario pur mantenendo la sua posizione parasternale di acquisire il punto di vista LV asse corto a livello della valvola mitrale, muscolo papillare e apice. L'asse corto del muscolo papillare e apice può richiedere il posizionamento della sonda eco uno o due spazi intercostali inferiori rispetto alla posizione per il breve vista all'asse della valvola mitrale. 3. Preparazione e vascolare chirurgica di accesso Disinfect aree chirurgiche con iodio 2% e utilizzare teli chirurgici sterili per coprire le parti non sterili del maiale. Eseguire un'incisione mediale del collo. Passare la linea alba per minimizzare i danni muscolari e senza mezzi termini avvicinarsi alla carotide e della vena giugulare interna accanto alla trachea. Isolare con cura la carotide e la vena giugulare interna. Assicurarsi che il nervo vago è intatto. Posizionare suture Vicryl 2-0 intorno ad entrambi i vasi per ottenere il controllo dell'imbarcazione. Realizzare un accesso arterioso dal cannulating carotide interna con una guaina 8F con la tecnica Seldinger. Fissare la guaina per l'arteria, assicurarsi che l'arteria non è completamente occlusa dalla sutura. Accesso venoso può essere acquisita da cannulating la vena giugulare con una guaina 9F anche con la tecnica Seldinger. Prima di fissare la guaina assicurarsi che la vena è legatura. In alternativa, l'arteria femorale può essere utilizzato anche per l'accesso arterioso. Somministrare 100 IE / kg di eparina immediatamente dopo l'inserimento della guainahs per inibire la formazione di trombi. Per una misura stabile e costante pressione arteriosa, incannulare una delle arterie più piccoli in uno degli arti posteriori facendo una piccola incisione sopra l'arteria. L'arteria si trova appena sotto la pelle, pulsazioni può essere sentito attraverso la pelle. Isolare l'arteria dal tessuto circostante. Mettere 2 punti di sutura Vicryl 2-0 intorno alla nave, 1 prossimale e distale 1. Legare la parte distale ed inserire un iv cannula 18 G e fissare saldamente collegare la pressione. 4. Pressione invasiva Volume Loop Analysis Inserire un catetere Swann-Ganz (SG) attraverso la guaina precedentemente posizionato nella vena giugulare interna. Collegare un dispositivo gittata cardiaca alla parte del SG che culmina nel lume prossimale. Iniettare 5 ml di soluzione fisiologica 0,9% nel lume prossimali del SG e misurare la gittata cardiaca; ripetere tre volte e la media degli indici. Calibrare il sistema fotovoltaico utilizzando precedentementedeterminato gittata cardiaca. Inserire il catetere conduttanza 7F attraverso l'arteria carotide nel ventricolo sinistro sotto guida fluoroscopica. Selezionare il segmento più grande presente nel LV per misure di volume ed eseguire la scansione di una linea di base in apnea. Dopo la calibratura del volume è completato, record di 10-15 battiti in apnea. Rimuovere la SG e posizionare un catetere a palloncino nella vena cava inferiore al livello del diaframma sotto guida fluoroscopica. Eseguire la riduzione precarico gonfiando il palloncino in apnea e registrare i corrispondenti PV-Loops. 5. Pressione intracoronarica e misurazione del flusso Diluire nitroglicerina in una concentrazione di 100 pg / ml e diluire adenosina in una concentrazione di 30 ug / ml. Posizionare un catetere guida 8F in dell'ostio della coronaria sinistra. Posizionare il filo di pressione / flusso combinato nella parte prossimale della coronaria sinistra artery. Somministrare 200 mg di nitroglicerina intracoronarica e normalizzare la pressione distale (Pd), misurata dal filo, con la pressione arteriosa. Posizionare il filo nella metà parte del discendente anteriore sinistra dell'arteria (LAD). Avviare la misurazione della pressione e del flusso di base. Indurre iperemia con la somministrazione di 60 mg di adenosina intracoronarica, a filo con 2 ml di soluzione fisiologica e misurare la pressione e il flusso iperemica. Attendere che il flusso di ripristinare ai valori basali. Ripetere la misura due volte. Infondere altri 200 mg di nitroglicerina intracoronarica e ripetere i passaggi 1,6 e 1,7 per la sinistra dell'arteria coronaria circonflessa. 6. Induzione di MI Posizionare il catetere intracardiaca defibrillazione nel ventricolo destro utilizzando la guaina venoso. Gli elettrodi distali dovrebbe essere nel all'apice del ventricolo, gli elettrodi prossimali nell'atrio e / o vena cava superiore. Collegare il catetere al defibrillatore e impostarlo su 50J. Misurare il diametro del distale LAD dalla seconda diagonale (D2) in AP e LAO 30 °. Scegliere un palloncino angioplastica con un diametro secondo il diametro del distale LAD dal D2 (Figura 1). Posizionare un filo di guida attraverso il catetere guida distalmente nel LAD. Far avanzare il catetere a palloncino lungo il filo guida. Posizionare il palloncino distale dalla D2. Somministrare 30 IE / kg di eparina. Gonfiare il palloncino fino a che la pressione corrisponda al diametro destra del LAD. Controllare l'occlusione totale della LAD da angiografia (Figura 1). Coprire il campo di lavoro sterile e la ferita al collo con panni teli sterili. Liberare il torace da qualsiasi copertura per renderlo disponibile per le compressioni toraciche o transtoracica defibrillazione. Controllare la pressione nel palloncino durante il successivo 90 min e ripristinare la pressione se necessario. In caso di fibrillazione ventricolare: Avviare immediatamente le compressioni toraciche con una frequenza di 100/min. Somministrare 300 mg di amiodarone per via endovenosa in bolo veloce (~ 1 min). Inizia defibrillazione intracardiaca, dare scosse di 50 J. Dopo 5 colpi falliti, riavviare le compressioni toraciche. Cambiare defibrillazione intracardiaca di defibrillazione transtoracica e shock con 150 J. In caso di shock soccombente, cambiare a 200 J. Se necessario, somministrare un'altra dose di 150 mg Amiodaron e / o 1 mg di adrenalina. Ripetere adrenalina due volte con intervalli di 3-5 minuti, se necessario. Continua compressioni toraciche, intervallati da defibrillazione transtoracica Completamento della procedura chirurgica (per Long Term Follow Up) Dopo 90 min di arrivo mediante angiografia se la LAD è ancora completamente occluso. Amministrare un altro 30 IE / kg di eparina e sgonfiare il palloncino. Verificare la presenza di riperfusione. Rimuovere il palloncino sgonfio con la guidzione catetere dalla guaina carotidea. Rimuovere con cautela la guaina arteriosa e bloccare l'arteria carotide immediatamente con un morsetto anastomosi (Figura 1). Usa prosegue punti (6-0 prolene) per chiudere la carotide. Rimuovere la fascetta e verificare la presenza di perdite. Rimuovere il catetere defibrillazione interna e rimuovere la guaina dalla vena giugulare interna. Prossimale legare della voce guaina. Chiudere il sottocute e la pelle del collo in due strati con 2-0 Vicryl. 7. Cardiac Magnetic Resonance Imaging Posto l'animale sulla testa tabella MRI prima in posizione supina sotto anestesia continua. Posizionare un-phased array coil cardiaco dedicata sul petto dell'animale. Per la pianificazione di immagini ottenere immagini da ricognizione in asse corto e una vista a due camere assi lungo. Acquisire ECG-gated stato stazionario precessione libera (SSFP) cine asse corto (dal vertice alla base della LV) e due chamber visualizzazioni lungo assi. Gadolinio tardi (LGE) può essere acquisito con un recupero di inversione 3D-turbo-gradient-echo-tecnica di 15 minuti dopo la doppia dose iniezione endovenosa in bolo di un agente di contrasto gadolinio based. Eseguire l'analisi offline con il software validato dei parametri funzionali. Valutare ventricolare sinistra frazione di eiezione (FEVS), massa ventricolare sinistra, fine del volume diastolico, il volume sistolico fine, gittata sistolica, gittata cardiaca, e la massa cicatrice. 8. Fine dello studio e Infarto Formato Alla fine dello studio, seguire protocolli 1-5 e 7 per acquisire follow-up misurazioni. Fai una mediana 30-40 cm incisione da appena sotto soprasternale ad un punto appena sotto il processo xifoideo. Avanzare attraverso la linea alba fino allo sterno. Dividere il xifoidea e usare le forbici Klinkenberg per separare lo sterno posteriore dal pericardio con cautela. Dopo aver usato le forbici senza mezzi termini continuare ulteriore separazione. Eseguire una sternotomia by ad esempio utilizzando un martello e Lebsch coltello. Il midollo osseo sanguinamento è ridotto al minimo sfregamento cera osso sul midollo. Aprire il torace con un divaricatore sterno. Entrare nello spazio pleurico 3 ° e individuare la vena cava inferiore nel mediastino. Umanamente eutanasia l'animale tagliando la vena cava inferiore sotto anestesia profonda. Rimuovere sangue con un dispositivo di aspirazione. Inserire una batteria 9 V sull'apice per indurre fibrillazione ventricolare. Dopo l'asportazione del cuore, intercettato destro e ventricolo sinistro in cinque fette dalla base all'apice e incubate in 1% di cloruro di trifenil-tetrazolio disciolto in soluzione fisiologica 0,9% a 37 ° C per 15 min. Successivamente, lavare le fette in soluzione fisiologica 0,9% e fotografare le fette da entrambi i lati.