Summary

كله من جبل Immunolabeling الشم مستقبلات الخلايا العصبية في<em> ذبابة الفاكهة</em> الهوائي

Published: May 04, 2014
doi:

Summary

Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.

Abstract

جزيئات الرائحة ربط المستقبلات هدفهم بطريقة دقيقة ومنسقة. كل مستقبلات تعترف إشارة محددة والتبديلات هذه المعلومات إلى الدماغ. على هذا النحو، وتحديد كيفية نقل المعلومات الشمية إلى الدماغ، وتعديل كل من الإدراك والسلوك، والتحقيق الوقائع الموضوعية. ومن المثير للاهتمام، وهناك أدلة الناشئة التي تشارك تنبيغ الخلوية والنسخي العوامل في تنويع حاسة الشم مستقبلات الخلايا العصبية. هنا نقدم ككل قوية الأسلوب جبل الوسم المناعية لفحص حاسة الشم في الجسم الحي منظمة مستقبلات الخلايا العصبية. باستخدام هذا الأسلوب، حددنا جميع الخلايا العصبية مستقبلات حاسة الشم مع الأجسام المضادة لمكافحة ELAV، علامة عموم العصبية المعروفة وOr49a-mCD8 :: GFP، والخلايا العصبية مستقبلات الشمية أعرب تحديدا في الدوري الاميركي للمحترفين الخلايا العصبية باستخدام الأجسام المضادة لمكافحة GFP.

Introduction

ويستخدم نظام حاسة الشم للتمييز بين مجموعة متنوعة وهائلة من جزيئات الرائحة، وبعد ذلك لإرسال المعلومات الناتجة إلى مراكز المخ العليا. يستخدم هذا المدخل إلى التحكم بدقة السلوكيات الحيوانية الأساسية، مثل التغذية والتزاوج 1-6. كما يرتبط كل نوع الخلايا العصبية الشمية مع مجموعة محددة من الروائح، وتنويع الخلايا العصبية مستقبلات الشم (ORN) و هو ضروري لالسليم وظيفة الجهاز الشمي 7.

علم الوراثة ذبابة الفاكهة تمكننا من إجراء تحقيق واحد على مستوى الخلية التي تنطوي على الآليات الجزيئية المرتبطة بالتنمية ORN وظيفة فسيولوجية 8-16. وقد مكنتنا كله المناعية جبل ذبابة الفاكهة هوائيات لفهم بمزيد من التفصيل الآليات الجزيئية المشاركة في تنويع الخلايا العصبية مستقبلات الشمية (ORN) ق 7. هنا نقدم وصفا شاملا لطريقة بسيطة لميلانhieve هذا.

Protocol

1. إعداد لوحة التفاح مزيج 12.5 ز آغار، 125 مل 100٪ عصير التفاح المتاحة تجاريا، 12.5 غرام جلوكوز، و 375 مل H 2 O. الميكروويف الخليط لمدة 1-2 دقائق وتصب في صحن الثقافة 3 سم الخلية. تخزين عند 4 درجات مئوية. <p class="jove_title" style=";text-a…

Representative Results

ضمان أن كلا من تشريح والتثبيت يتم تنفيذها بسرعة هي عامل رئيسي في تحقيق النجاح مع هذا البروتوكول. باستخدام مقص غرامة ملقط وحاسم أيضا. بعد المناعية، تم فحص الفلورسنت المسمى هوائيات تحت المجهر متحد البؤر. نحن عادة ما تأخذ أقسام 1μm باستخدام عدسة 20x و. نحن وصفت الدوري الامي…

Discussion

تشريح الهوائي ذبابة الفاكهة وصفنا بسيطة وسهلة لأداء في بيئة المختبر. لضمان تشريح ناجحة، لا بد من استخدام مقص ذو حدين غرامة. بينما المناعية الهوائي تشريح، فمن المهم لاحتضان لهم في حاوية مملوءة رطوبة لتجنب التبخر من الحل الضد. الهوائي تشريح لديه ميل لتطفو في الحل. …

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

وأيد هذه الدراسة من قبل وزارة التربية المدعومة من برنامج لمؤسسة البحوث الاستراتيجية في الجامعات الخاصة ومنحة JSPS الشباب عالم B لحزب التحرير ونود أن نشكر Ohtake Norihito لتحرير مقاطع الفيديو.

Materials

Stemi DV4 dissection microscope Zeiss Stemi DV4
Glass bottom culture dishes  MatTek corporation P35G-0-10-C
Dissection scissor Fine Science Tools 15000-08
Rat anti-ELAV Developmental Studies Hybridoma Bank 7E8A10 Dilution 1:200
Mouse anti-GFP Invitrogen A11122 Dilution 1:400
Donkey Anti-Rabbit IgG Jackson ImmunoResearch Laboratories 711-225-152 Dilution 1:200
Donkey Anti-Rat IgG Jackson ImmunoResearch Laboratories 712-165-150 Dilution 1:200

Referencias

  1. Christensen, T. A., White, J. . Representation of olfactory information in the brain In The Neurobiology of Taste and Smell. , 201-232 (2000).
  2. Ache, B. W. Towards a common strategy for transducing olfactory information. Sem. Cell Biol. 5, 55-63 (1994).
  3. Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction. C. elegans. Cell. 13, 515-527 (1993).
  4. Barth, A. L., Justice, N. J., Ngai, J. Asynchronous onset of odorant receptor expression in the developing zebrafish olfactory system. Neuron. 16, 23-34 (1996).
  5. Firestein, S. How the olfactory system makes sense of scents. Nature. 413, 211-218 (2001).
  6. Stockinger, P., et al. Neural circuitry that governs Drosophila male courtship behavior. Cell. 121, 795-807 (2005).
  7. Endo, K., et al. Chromatin modification of Notch targets in olfactory receptor neuron diversification. Nat Neurosci. 15, 224-233 (2011).
  8. Karim, M. R., Moore, A. W. Morphological analysis of Drosophila larval peripheral sensory neuron dendrites and axons using genetic mosaics. J Vis Exp. , (2011).
  9. Suh, G. S., et al. A single population of olfactory sensory neurons mediates an innate avoidance behaviour in Drosophila. Nature. 431, 854-859 (2004).
  10. Sachse, S., Galizia, C. G. Role of inhibition for temporal and spatial odor representation in olfactory output neurons: A calcium imaging study. J Neurophysiol. 87, 1106-1117 (2002).
  11. Hallem, E. A., Ho, M. G., Carlson, J. R. The molecular basis of odor coding in the Drosophila antenna. Cell. 117, 965-979 (2004).
  12. Vosshall, L. B., Wong, A. M., Axel, R. An olfactory sensory map in the fly brain. Cell. 102, 147-159 (2000).
  13. Couto, A., Alenius, M., Dickson, B. J. Molecular, anatomical and functional organization of the Drosophila olfactory system. Curr Biol. 15, 1535-1547 (2005).
  14. Clyne, P., et al. Odorant response of individual sensilla on the Drosophila antenna. Invert Neurosci. 3, 127-135 (1997).
  15. Vosshall, L. B., et al. A spatial map of olfactory receptor expression in the Drosophila antenna. Cell. 96, 725-736 (1999).
  16. Wang, J. W., et al. Two-photon calcium imaging reveals an odor-evoked map of activity in the fly brain. Cell. 112, 271-282 (2003).

Play Video

Citar este artículo
Karim, M. R., Endo, K., Moore, A. W., Taniguchi, H. Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna. J. Vis. Exp. (87), e51245, doi:10.3791/51245 (2014).

View Video