Monte todo imunomarcação de Neurônios Receptores Olfatórios no<em> Drosophila</em> Antena
Summary
Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.
Abstract
Moléculas odoríferas ligam aos seus receptores-alvo de forma precisa e coordenada. Cada receptor reconhece um determinado sinal e retransmite essa informação para o cérebro. Como tal, a determinação de como a informação é transferida para olfactiva do cérebro, modificando tanto a percepção e comportamento, a investigação mérito. Curiosamente, não há evidências emergentes que transdução celular e transcrição fatores estão envolvidos na diversificação de neurônio receptor olfativo. Aqui nós fornecemos um todo robusto montar método de marcação imunológica do ensaio in vivo olfativo organização neurônio receptor. Usando este método, identificamos todos os neurônios receptores olfativos com o anticorpo anti-elav, um marcador pan-neural conhecido e Or49a-mCD8 :: GFP, um neurônio receptor olfativo especificamente expressos em Nba neurônio usando anticorpo anti-GFP.
Introduction
O sistema olfactivo é usado para distinguir entre uma imensa variedade de moléculas de odor e, subsequentemente, para enviar a informação resultante para os centros do cérebro superior. Esta entrada é usada para controlar com precisão os comportamentos animais fundamentais, como alimentação e acasalamento 1-6. Como cada tipo de neurônio olfativo está associada a um conjunto específico de odores, a diversificação de neurônios receptores olfativos (ORN) s é essencial para o bom funcionamento do sistema olfativo 7.
Genética de Drosophila nos permite realizar investigação único nível celular que envolve mecanismos moleculares associados ao desenvolvimento de ORN e função fisiológica 8-16. Whole immunostaining montagem de Drosophila antenas nos permitiu compreender em maior detalhe os mecanismos moleculares envolvidos na diversificação de neurônios receptores olfativos (ORN) s 7. Aqui nós fornecemos uma descrição completa de um método simples para achieve este.
Protocol
Representative Results
Discussion
A dissecção da antena Drosophila descrevemos é simples e fácil de executar em um ambiente de laboratório. Para garantir uma dissecção bem sucedido, é essencial utilizar uma tesoura fina gumes. Enquanto a antena imunocoloração dissecado, que é importante para incubar em um recipiente cheio de humidade para evitar a evaporação da solução de anticorpo. A antena dissecados tem uma tendência para flutuar na solução. Utilizando 0,1% de Triton em PBS, durante a fixação e bloqueio passos irá facili…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este estudo foi apoiado pelo Programa MEXT-suportada para a Fundação de Pesquisa Estratégica em Universidades Privadas e JSPS Jovem Cientista B subvenção para HT Gostaríamos de agradecer Ohtake Norihito para editar os vídeos.
Materials
| Stemi DV4 dissection microscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
| Glass bottom culture dishes | MatTek corporation | P35G-0-10-C | |
| Dissection scissor | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| Rat anti-ELAV | Developmental Studies Hybridoma Bank | 7E8A10 | Dilution 1:200 |
| Mouse anti-GFP | Invitrogen | A11122 | Dilution 1:400 |
| Donkey Anti-Rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 711-225-152 | Dilution 1:200 |
| Donkey Anti-Rat IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 712-165-150 | Dilution 1:200 |
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