VIGS介导的正向遗传学筛选参与非寄主抗性基因鉴定

非寄主抗性是对一个特定的病原体^1,2种族的所有植物物种的阻力。这赋予广谱和持久抗病植物中^2,3。然而，其作用机制，尤其是对细菌病原体，没有得到很好的理解^。妥协非寄主抗性，高通量转录分析识别差异表达的基因在非寄主抗性^5-9有两种主要方法，以前用于解剖细菌非寄主抗性的突变体或沉默植株的筛选。因为非寄主抗性是由一个复杂的机制^（S）4与许多基因的参与，高通量功能基因组学方法进行基因识别控制，是为更好地理解非寄主抗性机制（S）的关键。

病毒诱导的基因沉默（VIGS）已成功地用于植物内源沉默基因在许多植物物种^10,11。 烟草（Nicotiana benthamiana）是最适合的植物病毒诱导的基因沉默^10,12和它的基因组序列草图，现已^13。 烟草脆裂病毒 （TRV）基于VIGS技术已被广泛用作反向遗传学工具表征基因参与非寄主抗性^2,4,14。这VIGS载体及衍生产品现已通过拟南芥生物资源中心（ABRC， http://www.arabidopsis.org/abrc/catalog/individ_cloned_gene_1.html ）。 VIGS也被用来确定参与植物免疫力^15-17，特别是^6,18非寄主抗性基因作为一个正向遗传学工具。评估过敏性反应（HR）介导的细胞死亡由一个特定的非寄主植物对病原体引起和评估疾病诱导的细胞死亡，是两个主要检测主要用于identifyin的克易感基因沉默植株。然而，HR细胞死亡不仅对II型非寄主病原体引起的，而不是针对I型非寄主病原体^2。因此，人力资源分析不能被普遍用来识别非寄主抗性被植物所利用的策略，特别是针对广泛的I型非寄主病原体。此外，在基因沉默的植物非寄主抗性的部分损失并不总是导致疾病的症状，因此不能用来确定损害非寄主抗性的植物疾病的得分。相反，评估非寄主病原体的基因沉默植株的增长是一个更好的方法研究非寄主抗性基因沉默植株的损失。

以往的生长测定^6,19，更快速的方法，以评估非寄 ​​主细菌生长的基因沉默的植物相比，可以缩短在正向遗传学筛选所需的时间。我们此前报道的方法观察细菌升病原体生长在紫外线（UV）光叶肉眼使用细菌表达绿色荧光蛋白^{（GFP）19。}在这篇稿件中，我们表现出的实用性表达GFPuv的非寄主细菌病原体受到损害非寄主抗性基因沉默植株易于识别。这种方法是准确识别敏感的植物，适合高通量筛选。