Внутрилимфатическое иммунотерапия и вакцинации у мышей
Summary
Профилактическая и терапевтическая вакцинация часто не удается стимулировать сильный иммунный ответ за счет неделе дренажа вакцины в лимфатические узлы и, следовательно, плохой участие иммунных клеток. Прямым инъекции вакцины к лимфоузлах так называемый внутрилимфатическое инъекция эффективность вакцины можно сильно улучшены и доз вакцины можно уменьшить.
Abstract
Вакцины обычно вводят подкожно или внутримышечно для стимуляции иммунного ответа. Успех это требует эффективного дренажа вакцины к лимфатическим узлам, где антиген представляющие клетки могут взаимодействовать с лимфоцитами для генерации хотели иммунных реакций. Сила и тип иммунных реакций, индуцируемых также зависит от плотности или частоты взаимодействий, а также микросреды, особенно содержания цитокинов. Как только минуту доля периферии введенных вакцин достигает лимфатических узлов, вакцинация мышей и людей проводились путем прямой инъекции вакцины в паховых лимфатических узлов, то есть внутрилимфатическое инъекции. В человеке, процедура руководствуется ультразвука. У мышей, небольшой (5-10 мм) надрез в паховой области анестезированных животных, лимфатический узел локализуется и иммобилизованных пинцетом, а объем 10-20 мкл вакцины вводят под визуальным контролем.Разрез закрывается с помощью одного стежка с помощью хирургических швов. Мыши были вакцинированы с плазмидной ДНК, РНК пептида, белка, частиц и бактерий, а также в качестве адъювантов, и наблюдалось сильное повышение иммунных реакций против всех типов вакцин. Внутрилимфатическое метод вакцинации особенно подходит в ситуациях, когда обычные вакцинация вырабатывает недостаточное иммунитет или где количество доступной вакцины ограничено.
Introduction
Вакцины обычно вводят подкожно или внутримышечно для стимуляции иммунного ответа. Успех этой процедуры требует эффективного дренажа вакцины в лимфатические узлы, где антиген представляющие клетки могут взаимодействовать с лимфоцитами для генерации Т-и ответов B-клеток. Кроме того, прочность и тип иммунных реакций, индуцируемых также зависит от плотности или частоты таких взаимодействий, так как сама микросреды, особенно содержания цитокинов. Как только небольшая часть вакцины вводят в периферийной ткани достигает лимфатического узла, прививки мышей и человека путем прямой инъекции вакцины в лимфатических узлах, сайт иммунные ответы были сгенерированы, были выполнены. В человеке, процедура руководствуется ультразвука, процедура также используется для управления изображениями агентов для визуализации и диагностики в лимфатическую систему. У мышей, процедура является инвазивным. Здесь небольшой (5-10 мм) incisioн выполнен в паховой области анестезированных животных 1, лимфатических узлов локализован и иммобилизованных пинцетом, а объем 10-20 мкл вакцины вводят под визуальным контролем; 10 мкл используется для первой инъекции и у молодых мышей с небольшими лимфатических узлов, тогда как 20 мкл может быть введен в лимфатических узлах старшего возраста или уже грунтованные мышей, которые имеют большие лимфатические узлы. Разрез может быть закрыт с помощью одного стежка с помощью хирургических швов. С помощью этого метода, мышей, вакцинированных ДНК плазмиды, 2,3 РНК 4, 1,3,5,6 пептида, белка 7-10 частиц, бактерий 11 12, а в качестве адъювантов 7,13 и сильного улучшения иммунной ответы против всех типов вакцин были обнаружены. Внутрилимфатическое метод вакцинации особенно подходит в ситуациях, когда обычные вакцинация вырабатывает недостаточное иммунитет или где количество доступной вакцины ограничено или веру дорогостоящим. У человека, внутрилимфатическое способ иммунизации был применен к аллергии пациентов 14,15, или пациентов с раком 16-21. Хотя в настоящее время понятие является то, что внутрилимфатическое метод является более инвазивными, чем других инъекционных методов, таких как внутримышечных и подкожных инъекций, восприятие боли не выше, чем после венозной пункции 15. Ожидается, что внутрилимфатическое вакцинация станет альтернативой или дополнением к другим методам профилактики и особенно лечебных прививок. Эта статья подробно описывает, как процедура внутрилимфатическое вакцинации, проведенных в мышей. Все процедуры, описанные, были утверждены кантона ветеринарной агентства Цюриха и осуществляется в соответствии швейцарских федеральных руководящих принципов и директив по защите животных, используемых для научных целей.
Protocol
Representative Results
Discussion
Внутрилимфатическое иммунизации и иммунотерапия как было показано, не подходить для стимуляции обоих реакции антител и Т-клеточных реакций. Как показано в этом видео-статьи, внутрилимфатическое процедура вакцинации является быстрый и простой способ для стимулирования сильный иммун?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы выражают благодарность за помощь в экспериментальной разработке метода внутрилимфатическое иммунизации у мышей из Iris Эрдмана, Барбара фон Бейста, и Юлия Мария Мартинес-Гомес. Спасибо также Мэгги Аррас и Никола Cesarovic за разрешение использовать их хирургическое театр для этого видео производства.
Materials
| Ketamine (Ketasol-100) | Graeub AG, Switzerland | Anesthetics | |
| Xylazine (Rompun) | Bayer, Germany | Anesthetics | |
| Viscotears Eye-Gel | Novartis, Switzerland | To keep eyes from drying out during anesthesia. | |
| BD Micro-Fine 0.5 ml | BD Medical, France | 29 G Insulin syringes with permanently attached needles | |
| 6-0 Dermalon Monofilament nylon | Covidien, MA, USA | For sutures (0.7 metric, 18G, 45 cm, Blue) | |
| Curved forceps, 4.5 inch | Polymed, Switzerland | For incision and holding of lymph node | |
| Straight surgical scissors, 4.5 inch | Polymed, Switzerland | For incision | |
| Needle holder, 5.5 inch | Polymed, Switzerland | To close incision with suture | |
Referencias
- Johansen, P., et al. Direct intralymphatic injection of peptide vaccines enhances immunogenicity. Eur. J. Immunol. 35, 568-574 (2005).
- Maloy, K. J., et al. Intralymphatic immunization enhances DNA vaccination. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 3299-3303 (2001).
- Smith, K. A., et al. Enhancing DNA vaccination by sequential injection of lymph nodes with plasmid vectors and peptides. Vaccine. 27, 2603-2615 (2009).
- Kreiter, S., et al. Intranodal vaccination with naked antigen-encoding RNA elicits potent prophylactic and therapeutic antitumoral immunity. Cancer Res. 70, 9031-9040 (2010).
- Johansen, P., et al. Antigen kinetics determines immune reactivity. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 5189-5194 (2008).
- Smith, K. A., et al. Lymph node-targeted immunotherapy mediates potent immunity resulting in regression of isolated or metastatic human papillomavirus-transformed tumors. Clin. Cancer Res. 15, 6167-6176 (2009).
- Johansen, P., et al. Toll-like receptor ligands as adjuvants in allergen-specific immunotherapy. Clin. Exp. Allergy. 35, 1591-1598 (2005).
- Johansen, P., et al. Heat denaturation, a simple method to improve the immunotherapeutic potential of allergens. Eur. J. Immunol. 35, 3591-3598 (2005).
- Martinez-Gomez, J. M., et al. Intralymphatic injections as a new administration route for allergen-specific immunotherapy. Int. Arch. Allergy Immunol. 150, 59-65 (2009).
- Martinez-Gomez, J. M., et al. Targeting the MHC class II pathway of antigen presentation enhances immunogenicity and safety of allergen immunotherapy. Allergy. 64, 172-178 (2009).
- Mohanan, D., et al. Administration routes affect the quality of immune responses: A cross-sectional evaluation of particulate antigen-delivery systems. J. Control Release. 147, 342-349 (2010).
- Waeckerle-Men, Y., et al. Lymph node targeting of BCG vaccines amplifies CD4 and CD8 T-cell responses and protection against Mycobacterium tuberculosis. Vaccine. 31, 1057-1064 (2013).
- von Beust, B. R., et al. Improving the therapeutic index of CpG oligodeoxynucleotides by intralymphatic administration. Eur. J. Immunol. 35, 1869-1876 (2005).
- Senti, G., et al. Intralymphatic immunotherapy for cat allergy induces tolerance after only 3 injections. J. Allergy Clin. Immunol. 129, 1290-1296 (2012).
- Senti, G., et al. Intralymphatic allergen administration renders specific immunotherapy faster and safer: a randomized controlled trial. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 17908-17912 (2008).
- Lesterhuis, W. J., et al. Route of administration modulates the induction of dendritic cell vaccine-induced antigen-specific T cells in advanced melanoma patients. Clin. Cancer Res. 17, 5725-5735 (2011).
- Fadul, C. E., et al. Immune response in patients with newly diagnosed glioblastoma multiforme treated with intranodal autologous tumor lysate-dendritic cell vaccination after radiation chemotherapy. J. Immunother. 34, 382-389 (2011).
- Eizenberg, P., et al. Acceptance of Intanza(R) 9 mug intradermal influenza vaccine in routine clinical practice in Australia and Argentina. Adv. Ther. 28, 640-649 (2011).
- Durando, P., et al. Adjuvants and alternative routes of administration towards the development of the ideal influenza vaccine. Hum. Vaccin. 7, 29-40 (2011).
- Barth, R. J., et al. A randomized trial of ex vivo CD40L activation of a dendritic cell vaccine in colorectal cancer patients: tumor-specific immune responses are associated with improved survival. Clin. Cancer Res. 16, 5548-5556 (2010).
- Schwaab, T., et al. Clinical and immunologic effects of intranodal autologous tumor lysate-dendritic cell vaccine with Aldesleukin (Interleukin 2) and IFN-{alpha}2a therapy in metastatic renal cell carcinoma patients. Clin. Cancer Res. 15, 4986-4992 (2009).
- Senti, G., Johansen, P., Kundig, T. M. Intralymphatic immunotherapy. Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. 9, 537-543 (2009).
- Catron, D. M., Itano, A. A., Pape, K. A., Mueller, D. L., Jenkins, M. K. Visualizing the first 50 hr of the primary immune response to a soluble antigen. Immunity. 21, 341-347 (2004).
- Itano, A. A., Jenkins, M. K. Antigen presentation to naive CD4 T cells in the lymph node. Nat. Immunol. 4, 733-739 (2003).
- Johansen, P., Mohanan, D., Martinez-Gomez, J. M., Kundig, T. M., Gander, B. Lympho-geographical concepts in vaccine delivery. J. Control Release. 148, 56-62 (2010).
- Johansen, P., von Moos, S., Mohanan, D., Kundig, T. M., Senti, G. New routes for allergen immunotherapy. Hum. Vacc. Immunother. 8, 1525-1533 (2012).
- Senti, G., Johansen, P., Kundig, T. M. Intralymphatic immunotherapy: from the rationale to human applications. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 352, 71-84 (2011).
- Duthie, M. S., Windish, H. P., Fox, C. B., Reed, S. G. Use of defined TLR ligands as adjuvants within human vaccines. Immunol. Rev. 239, 178-196 (2011).
- Ribas, A., et al. Intra-lymph node prime-boost vaccination against Melan A and tyrosinase for the treatment of metastatic melanoma: results of a phase 1 clinical trial. Clin. Cancer Res. 17, 2987-2996 (2011).
- Bedrosian, I., et al. Intranodal administration of peptide-pulsed mature dendritic cell vaccines results in superior CD8+ T-cell function in melanoma patients. J. Clin. Oncol. 21, 3826-3835 (2003).
- Lesimple, T., et al. Injection by various routes of melanoma antigen-associated macrophages: biodistribution and clinical effects. Cancer Immunol. Immunother. 52, 438-444 (2003).
- Brown, K., et al. Adenovirus-transduced dendritic cells injected into skin or lymph node prime potent simian immunodeficiency virus-specific T cell immunity in monkeys. J. Immunol. 171, 6875-6882 (2003).
- Fong, L., Brockstedt, D., Benike, C., Wu, L., Engleman, E. G. Dendritic cells injected via different routes induce immunity in cancer patients. J. Immunol. 166, 4254-4259 (2001).
