Inyección intraductal de entrega de la droga localizada a la glándula mamaria de ratón

1. Preparación de la solución de inyección Preparar 0,2% colorante azul de Evans en solución salina tamponada de fosfato (PBS) u otra solución acuosa de interés. Este colorante vital es útil para evaluar el éxito de las inyecciones intraductal y se recomienda como una ayuda para la visualización en el desarrollo de conocimientos especializados en la técnica. El volumen requerido dependerá del número y ubicación de las glándulas para ser inyectado. Todos los 10 glándulas mamarias de ratones hembras pueden ser inyectados, pero debido al tamaño más pequeño de la glándula, pares de glándulas 1 y 5 son típicamente inyectados con 10 l de solución. Todos los otros pares mamarias son inyectados con 20 l. Estos volúmenes son suficientes para cubrir todo el árbol ductal. 2. Preparación preoperatoria Anotar el peso corporal de cada ratón. Al igual que con todos los estudios preclínicos, los pesos de los animales deben ser controlados regularmente (dos veces por semana o más) para evaluar la toxicidad potencial. Se anestesia la mOuse usando una cámara de isoflurano y aplicar lubricante ocular. Durante el procedimiento de ratones continuarán siendo anestesiado utilizando inhalado concentración de 2-4% de isoflurano en oxígeno a través de un cono de nariz. Es importante vigilar cuidadosamente el ratón para los cambios en la frecuencia respiratoria, el ajuste del nivel de isoflurano en consecuencia. Inyectar el meloxicam (5-10 mg / kg) por vía subcutánea antes del procedimiento como la analgesia. Aplique una crema de depilación over-the-counter de la zona del pezón. Espere 5 minutos y retire suavemente el cabello suelto con un aplicador de punta de algodón con un movimiento circular. Retire la crema usando toallas de papel húmedas mojadas con agua tibia. El afeitado no se recomienda debido al riesgo de dañar los pezones. Asegure el ratón bajo el estereoscopio pegando suavemente las extremidades. Lugares de inyección limpias con toallitas de alcohol. 3. Inyección intraductal Localice pezones adecuados para ser inyectado bajo el estereoscopio. Utilice fina micro-disección tweezers para eliminar la piel muerta que cubre la abertura del pezón. Cargar 10-20 l de solución de inyección en una jeringa de 50 l con un G cubo de la aguja de metal 33 fijada. A veces, después de la inyección, pequeñas cantidades (1 mu l o menos) pueden filtrarse del pezón al tirar la aguja. Por lo tanto, se recomienda para inyectar 11 o 21 l, respectivamente, para tener en cuenta la pérdida potencial. Sostenga el pezón suavemente con las pinzas finas y levántelo ligeramente para posicionarla para inyección. No es necesario cortar el pezón. Se inyecta la solución lentamente para minimizar el daño potencial causado por el fluido que se mueve rápidamente dentro de los lúmenes ductales. La velocidad de inyección debe mantenerse a aproximadamente 40 l / min. 4. Cuidado Postoperatorio Observe el lugar de la inyección. No debe haber signos de trauma a la región del pezón o el tejido circundante. Hinchazón en el área que rodea el pezón probablemente indica una almohadilla de grasa mamaria Rathe inyecciónR que una inyección intraductal éxito. Quite el animal del cono de la nariz y pasar a una jaula separada para la recuperación. Coloque la jaula bajo una lámpara de calor para prevenir la hipotermia y ayudar en la recuperación. Los ratones son alojados individualmente y serán monitoreados de cerca hasta que recobren el conocimiento y la movilidad. 5. Análisis de glándula mamaria de tejidos Al finalizar el estudio, los ratones se sacrifican por dislocación cervical después de CO 2 de gas comprimido en una cámara de aislamiento. Las glándulas mamarias se extirpan y se pueden usar para la preparación de todo el montaje 11, la histología, o ARN y aislamiento de las proteínas.