ベンチトップリアクターの操作

容器のセットアップを使用して操作を開始します。従来の発酵槽（ 図1）をインストールする必要のある次のコンポーネントがあります。 pHプローブ – ライブ、培養中のpHの測定のために。インストールの前にプローブを校正し、容器を滅菌する。ヘッドプレートにプローブを取り付けます。 のpO 2プローブ-発酵中の容器内の溶存酸素量の測定のため。ヘッドプレートに取り付けます。 文化をサンプリングするための収穫パイプ。ヘッドプレートは、この高さ調節が可能なコンポーネントをインストールします。 ガススパーは – 容器の底に存在し、文化へのガス注入を提供します。発酵槽でのガス源にスパーを接続し、ヘッドプレートにマウントします。 インペラシャフトとインペラ – インペラは文化を撹拌し、容器内の培養均一性を維持するために重要である。 排気ガス冷却器 – 排気ガス通路を冷却することによって容器内の蒸発損失を抑制するための。 pH制御や飼料添加のための試薬ポンプライン。 容器をきれいにし、石鹸と水でヘッドプレート。柔らかいブラシは、容器とヘッドプレートを洗浄するために推奨されている。塩素漂白剤や洗剤は、容器を洗浄するために使用することはできません。 メディアは不安定な熱されていない場合は、清浄な容器に追加します。最大使用量に到達するまでにのみ追加します。この場合、最大使用量を5 Lの総容積容器3.3 Lである。 Oリングシールが正しく取り付けられていることを確実にする、血管のヘッドプレートを取り付けます。 排気ガスコンデンサーを取り付けます。 その10ミリメートルポートに消泡プローブを取り付けます。 その10ミリメートルポートに収穫パイプを取り付けます。その上に、チューブの部分を入れて、それを固定します。 散布口にチューブと0.20μmのフィルターをインストールしてから、これをオフにクランプします。 pHプローブを校正： 2小さなビーカー内のリファレンス·バッファ、洗浄瓶、スペアWAを集めるSHビーカー。 発酵槽にpHプローブを上にフックし、発酵槽、電源を入れます。 pHのパラメータにスクロールして、メニューボタンを使って、「カル」オプションまでスクロールし、「Enter」キーを押し。 2点校正のための'2 'を選択します。 プローブ先端を洗浄し、低基準バッファに沈める。発酵槽での値が安定します。 +を使用し、 – キー、pH比較バッファの値と一致するように表示される値を調整します。それが点滅を停止したら、「Enter」キーを押し。 オフプローブを洗浄し、第二のリファレンス·バッファに挿入します。値が安定してから表示される値が高いリファレンス·バッファの値と一致しているように、キーパッドを使用することができます。押して確認しEnterキーを。 プローブ先端を洗浄し、発酵槽から外し。接続時に保護キャップを入れて、ヘッドプレートに取り付けます。 pO 2がプローブ先端を開き、そこに次のことを確認するためにチェックするチップを覆うために十分な電解質がある。そうでない場合、リザーバーにいくつかを追加して、それを閉じるBack。 ヘッドプレートにはpO 2プローブをインストールし、オートクレーブキャップは、その電気的接続を保護するために装着されていることを確認してください。これは、滅菌後に校正されます。 ディップチューブ、エアフィルターと試薬の供給のためのボトルを取得します。ディップチューブポートにポンプチューブを追加し、発酵槽に流入ポートにもう一方の端を取り付けます。 すべての未使用のポートの上に置いてチューブを入れ直しチューブクランプ。 排気ガスコンデンサーに0.45μmのフィルターを取り付けます。このフィルタは、容器がオートクレーブ内で加圧しないことが保証されます。 メディアのレベルを下回るすべてのチューブが出てくるからメディアを防ぐために、オフにクランプされていることを確認してください。 121℃、液体サイクルで30分間 – 25オートクレーブに容器を置きます。注意：それが出て来ると、それは非常に熱くなります。 発酵槽ベースに容器をインストールします。 pHをつなぐケーブルを探る。 のpO 2プローブケーブルを接続します。 ガス添加ロータメータにスパーを上に引っ掛けます。 無菌ディップチューブをボトルに1MのNaOH試薬を追加し、基本ポンプヘッドスピンドルにポンプヘッドを取り付けてください。 ヘッドプレートにサーモウェルに温度センサーを置く。それはサーモウェルの底に道のすべてを行くことを確認してください。 船インペラカップに攪拌アームを下げます。 発酵槽がオンになっていることを確認してください。 水は発酵槽に使用可能であることを確認してください。 発酵槽への空気供給をオンにします。 温度パラメータまでスクロールし、37℃に温度を設定温度制御を開始するためのボタンをEnterキーを押します。容器は15分以下に熱くなる。 分以下のメディアの1容器容積へのガス流をオンにします。このセットアップのために、ガス流は3リットル/分である。気泡が一番下に表示されます。 攪拌Pまでスクロールarameterおよび300 rpmに設定してください。 Enterキーを押して、攪拌をオンにする」と入力します '。 温度が37℃に達した後、pHをパラメータにスクロールして6.8に設定します。 「入力」ボタンを押して、pHコントロール、電源を入れます。 実行の1,000 rpmで最高速度に攪拌を設定します。 はpO 2プローブは、適切な値を表示するために適切に偏光していることを確認してください。 2時間後のPO 2パラメータまでスクロールし、「キャリブレーション機能」を選択し、1点校正を選択するには「メニュー」ボタンを使用します。 15分後、100を押して値を設定するために、カーソルを使用」と入力します。 'これはのpO 2を校正します。 撹拌にスクロールして、300 rpmに設定してください。 「メニュー」ボタンを使用して、中の攪拌メニュー 'on'に 'カスケード」をオンにします。これは、気泡を切り刻む成長需要が増加するにつれて、溶液中に多くの酸素を強制する目的で、攪拌の速度を増加させる。 </李> pO 2がパラメータにスクロールし、値を30に設定してください。 pO 2が開始する「入力」ボタンを押してください。 PC上の制御ソフトウェアパッケージを開始します。 プローブが校正されると、攪拌を300rpmで安定している、温度は37℃であり、pHは6.8に近く、それは接種するための時間です。アルコールを用いて、接種に使用するポートを滅菌する。 注射器に接種物を描画し、滅菌ポートに追加します。ポートを閉じる。 ログブックに接種時をマーク。 これは、滅菌時間でサンプルを取ることも重要である。アルコールと収穫管管の端部を滅菌する。 収穫ポートをカバークランプを開き、サンプルを描画するための注射器を使用しています。それがパイプに座ってきたので、この最初のサンプルは、通常、廃棄される。 別のサンプルを引っ張って、別の注射器を使用してください。 第三の注射器で、できるだけ多くのデッドボリュームを削除するために、パイプを通って空気を押し出すラインからラインをオフにクランプします。 細胞密度およびpHを測定し、値を記録。微生物培養により、値が1時間ごとにログに記録するのに便利です。間隔は文化に依存しています。 成長が完了した後に収穫の方法論は、培養のために意図によって異なります。この場合には、培養の細胞密度および湿潤細胞重量の可能なpHまたは測定のためのエンドポイント値を受信するための最終的な時間をサンプリングする。漂白剤や他の抗菌剤との指定された「キルタンク」内のコンテンツ処分ヘッドプレートを開きます。