Utilização de<em> In vivo</em> Imagem para monitorar a progressão da infecção pelo citomegalovírus Experimental Rato em recém-nascidos

Citomegalovírus Humano (HCMV/HHV-5) é um membro da família β-herpesvírus. HCMV é altamente prevalente, patógeno oportunista que é geralmente adquirida durante a infância como uma infecção assintomática ^1. Tal como todos os vírus de herpes, o HCMV persiste durante toda a vida do hospedeiro, cujo sistema imunitário bem controla a replicação viral. Episódios de reativação viral ocorrem principalmente em indivíduos imunocomprometidos, como pacientes transplantados que recebem medicamentos para evitar a rejeição do enxerto ^2. Nos adultos, o HCMV também foi ligada a glioblastomas ^3. Além disso, o HCMV é um patógeno importante para recém-nascidos com imunidade imaturo ^4-6. A infecção primária no desenvolvimento do feto ou recém-nascido pode ter consequências graves. Infecção por HCMV é a causa infecciosa mais comum de defeitos congênitos e doenças da infância em países desenvolvidos. Estima-se que a incidência de infecção neonatal HCMV afecta 0,5-1% of todos os nascidos vivos, entre os quais 5-10% vão sofrer de sintomas graves, tais como microcefalia ou hipoplasia. Além disso, 10% das crianças infectadas com infecção viral subclínica, mais tarde, desenvolver sequelas levando a retardo mental, perda, defeitos visuais ou convulsão e epilepsia ^7,8 audição.

Ao contrário de outros herpesvírus humanos, tais como herpes simplex 1 (HSV-1/HHV-1) que podem ser inoculadas aos ratos via diferentes vias de injecção ^9, a replicação do citomegalovírus é específico da espécie. Este recurso investigações de HCMV patogênese que são realizadas em diferentes modelos animais severamente prejudicada (rato, porquinho da índia, macaco rhesus) e seus respectivos CMVs específica do host genuínos. Todos os CMVs apresentam semelhanças significativas no tamanho do genoma e organização, tropismo tecidual e regulação da expressão gênica. Eles também induzir patologias semelhantes nas suas respectivas hospedeiro. Apesar da diversidade genômica serinterpolação de HCMV e rato citomegalovírus (MCMV) (50% das ORFs presentes no vírus humano estão identificadas no CMV de murino), o modelo de rato demonstrou recentemente a ser vantajoso, principalmente porque as estirpes mutantes podem ser testados quanto à sua capacidade para controlar viral replicação in vivo. Isto levou a uma tela genética que permitiu uma estimativa do número de genes do rato expressos na fase adulta, que compõem a "resistome" para este vírus ^10. No total, isto indica que os ratinhos infectados com MCMV representam um modelo atractivo para o estudo das interacções hospedeiro-vírus em adultos. A exploração de infecção congênita por CMV é mais complexa porque as diferenças na organização camada da placenta entre humanos e camundongos prejudicar a transmissão da mãe para o feto da infecção viral em camundongos. Recentemente, a injeção direta de MCMV na placenta no dia 12,5 de gestação permitiu infecção cerebral de ratos recém-nascidos que levaram à deterioração ¹¹ de audição. No entanto, a maioria investigations agora usam injeção intraperitoneal de 4-20 neonatos hr de idade para proporcionar a disseminação viral sistêmica potencialmente levando à infecção cerebral hematogênica, um modelo que é mais relevante do que a de uma injeção intracraniana. Este protocolo fornecido conhecimentos importantes sobre patogénese CMV e, mais particularmente, foi demonstrado que a infecção MCMV de recém-nascidos resulta em replicação virai em células neuronais e gliais localizados nos focos inflamatórios, que são infiltrados com células mononucleares como macrófagos ^12. Este relatório também descrito morfogénese alterada do cerebelo acompanhado com proliferação diminuída granular neuronal e da migração e indução de múltiplos genes do interferão-estimuladas. O papel essencial das células T CD8 + para o controlo de MCMV no sistema nervoso central também foi avaliado pelo mesmo grupo ^13. Um aspecto importante a considerar quando se analisa o efeito patológico de um micróbio é a dinâmica do infectaríons. No caso do MCMV, é particularmente crucial para explorar e quantificar a progressão da disseminação do vírus no cérebro em desenvolvimento de modo a compreender e prever a magnitude das futuras lesões neurobiológicos. Tradicionalmente, a quantificação da progressão de uma infecção normal requer o sacrifício dos animais infectados titule o patógeno em tecidos, tais como o cérebro, que são de outro modo inacessíveis. Este tipo de protocolo é agora desafiado por necessária melhoria do bem-estar animal e os 3Rs (Reduzir, Refine, Replace) Princípios ^14. Usando em tecnologias de imagem in vivo pode permitir uma redução drástica do número de animais que são necessárias em experiências de infecção in vivo. Aqui, vamos relatar e descrever a análise tempo-curso de disseminação viral para o cérebro sobre intraperitoneal MCMV-Luc injeção para recém-nascidos de rato. Usando os mesmos animais, nós rastreados e monitorizados in vivo os locais de intensa viral de replicação durante um período de 2 semanas.