Beurteilung der Sensomotorik in Maus-Modellen der Parkinson-Krankheit

Optimal Mäuse sollten während ihrer aktiven (dunkel) Zyklus getestet werden. Die Mäuse in unserem Labor auf einem Rückfahrscheinwerfer / Dunkel-Zyklus, die uns bequem testen die Mäuse während ihrer aktiven Zeit (und unsere) ermöglicht gepflegt. Eine Prüfung wird nicht bis mindestens eine Stunde in die Dunkel-Zyklus gestartet. Allerdings ist es nicht immer für einen Ermittler, einen separaten Raum mit einer Maus Rückfahrscheinwerfer Zyklus beizubehalten möglich. In diesem Fall können alle drei Tests während des Licht-Zyklus durchgeführt werden, aber bedenken Sie, dass die Zeit auf dem Balken überqueren, Anzahl der Schritte und bäumt sich im Zylinder, und Kontakt-und Abbauzeiten kann länger sein, wenn während dieser Zeit getestet. Alle drei nachfolgend beschriebenen Tests können von einem Experimentator durchgeführt werden, aber für diejenigen, die nicht so erfahrenen Umgang und die Arbeit mit Mäusen oder haben wenig bis gar keine Erfahrung Messung Verhalten bei Mäusen dann ein zusätzlicher Experimentator kann erforderlich sein. In diesem Fall ist die zweite Experimentator kann helfenDie anspruchsvolle Balkenprüfung indem Mäuse auf dem Balken, während die andere Experimentator zeichnet die Studie oder im Klebstoff Entfernung Test der zweite Experimentator können den Timer laufen, während die anderen Orte der Aufkleber auf die Schnauze und stellt die Maus in den Käfig. 1. Herausfordernde Breite Durchlaufmethode Umkehren 3 sauber Mäusekäfige auf einen Tisch oder in einem Maus-Käfig verändernden Station. Richten Sie die Käfige up gleichmäßig, so dass sie die Länge des Balkens (1 Meter) zu unterstützen. Befestigen Sie die vier Abschnitte des Strahls von der breitesten zu schmalsten Abschnitt und auf der Oberseite der umgedrehten Mäusekäfige. Legen Sie die homecage der Mäuse, dass Sie planen, auf seiner Seite und am Ende des Strahls zu testen, so dass die schmalste Ende des Balkens führt direkt in die homecage. Pick-up die erste Maus von der Basis seines Schwanzes und unterstützt seine Hinterbeine mit der Handfläche. Platzieren Sie die Maus auf das breite Ende des Strahls und lassen Sie den Schwanz und entfernen Sie Ihre hand. Lassen Sie die Maus schnuppern und sich bewegen, um besser zu werden, orientiert sich an das Gerät-wenn die Maus dreht sich sanft leiten es in die gewünschte Richtung. Heben Sie die homecage (auch wenn es in sich hat Käfiggefährten) halten es in der gleichen Position auf die Seite und bringen es auf die Probe Maus schließen. Da der Test beginnt mit der Maus, um zu versuchen, und geben Sie die homecage verschieben Sie es zurück, so dass die Maus nicht geben, sondern macht einen Schritt nach vorn. Nehmen Sie dieses den ganzen Weg hinunter den Strahl zu tun. Am Ende lassen die Maus, um den homecage geben. Haben Sie diesen Vorgang für jede Maus im Käfig. Dies ist die erste "assisted" trial. Der Strahl sollte gründlich zwischen den Käfigen mit einem Desinfektionsmittel durch die Tierpflege oder tierärztliche Personal bereitgestellt gereinigt werden. Innerhalb eines Käfigs ist es wichtig, nach dem Entfernen jeglicher Urin oder Exkrementen aus dem Strahl, bevor die nächste Maus ausgeführt werden, da dies die nächste Maus ablenken. Sobald alle Mäuse im Käfig haben durch eine Studie unterstützte gegangen dannholen die erste Maus wieder und legen Sie es am breiten Ende des Balkens. Wenn nötig, mit der Hand sanft orientieren sich die Maus in die gewünschte Richtung und leicht berühren seiner Rückseite, um es zu ermutigen, die entlang der Länge des Strahls in seiner homecage bewegen. Wenn die Maus nicht mehr zu riechen oder zu Fuß von der Strahl korrigieren Sie die Maus mit der Hand oder es abholen und legen Sie es auf dem gleichen Abschnitt, wo es ging. Haben Sie Ihre Hand in der Nähe, um die Maus an das Ende des Strahls zu führen. Sie wollen versuchen, minimieren Sie die Maus zu stoppen und die Erkundung, während auf dem Balken. Je mehr dies wird während des Trainings desto geringer ist die Maus, um es während des Tests tun neigt getan. Der Prozess endet, wenn die Maus legt eines seiner Vorderbeine in die homecage. Die nächste Maus kann dann erhalten seine 2. Versuch. Mäuse erhalten insgesamt 5 Studien auf dem ersten Trainingstag, abwechselnd zwischen Mäusen, so dass jede Maus hat eine intertrial Intervall von ~ 30 sec oder mehr. Typischerweise von den letzten Studien Mäusen durchqueren die Länge derBalken, auf ihre eigene, ohne die Notwendigkeit zur Korrektur. 24 Stunden später 2. Tag der Ausbildung beginnen kann. Am 2. Tag erhalten die Mäuse 5 weitere Studien auf dem gleichen Strahl Set-up wie in 1 Tag. Die Mäuse sollten nicht irgendeine Unterstützung benötigen, müssen aber möglicherweise korrigiert oder auf der Rückseite zu stoppen oder die Erkundung verhindern berührt werden. 24 Stunden später der eigentliche Test Tag kann beginnen. Für den Test Tag wird der Strahl in einer ähnlichen Weise zu den vorherigen 2 Trainingstage gesetzt. Aber jetzt ein Maschengitter, die jedem Öffnungswinkel entspricht, ist auf der Oberseite jedes Balkens Abschnitt platziert. Eine Videokamera wird zur Bezeichnung aller Strahl Traversal Studien aufnehmen und durch einen oder mehrere Experimentatoren durchgeführt werden. Beschriften Sie eine Karte mit den grundlegenden Experiment Angaben (Datum, Maus #, Versuch #, etc.). Legen Sie diese Karte vor der Kamera und Rekord für 2-3 Sekunden, so dass es klar ist, welche Maus getestet wird und was es auf Versuch. Die Maus wird auf der Gitteroberfläche auf dem breitesten Abschnitt des Trägers angeordnet und erfasst eines bewegt es sich entlang des Strahls. Die Aufnahme sollte nahe genug, so dass die gesamte Länge der Maus Körper sichtbar auf der Kamera ist. Wenn es zu weit ist dann rutscht es schwer zu sehen, und wenn sie zu schließen ist Beinbewegungen können verpasst werden. Die Kamera ist so positioniert werden, dass das Raster in der Mitte des Betrachters ist. Am Testtag alle Mäuse erhalten 5 Studien auf dem Grid-Strahl aufgetaucht. 2. Analyse von Beam Video Videos können direkt von der Kamera betrachtet werden oder angeschlossen an einen Fernseher oder Computer für eine größere Bildschirmansicht. Videobänder sollte von einem Experimentator blind Genotyp und Behandlung Zustand innerhalb des Experiments erzielt werden. Fehler für jeden Versuch werden erzielt, wie das Video in Zeitlupe abgespielt wird. Slips oder Fehler werden gezählt, wenn die Maus vor und vorwärts. Ein Ausrutscher durch oder außerhalb des Netzes wird als ein Fehler, wenn das Glied rutscht über 0,5 cm unterhalb des Gitters Oberfläche (auf halbem Weg nach unten). Alle Belegegemacht, nachdem eine Maus stoppt oder orientiert sein Kopf zur Seite gelten nicht als Fehler. Wenn die Maus nicht bewegt vorne und ein Körper oder Gliedmaßen wieder rutscht durch das Gitter ist es nicht als Fehler angesehen. Auf dem schmalen Abschnitt des Balkens die Basis der Hinterbeine auf dem Netz und den Zehen hängen von der Seite sein kann, ist dies nicht als Fehler angesehen. Schritte werden auch in Zeitlupe gezählt. Das Hinterbein vor der Kamera wird verwendet, um die Anzahl der Schritte zu verfolgen. Zählen beginnt, wenn die Maus macht den ersten Schritt nach vorne und endet, wenn die Maus stellt seine Vorderbeine in die homecage. Zeit zu durchqueren wird erzielt mit einer Stoppuhr und wird in Echtzeit durchgeführt. Der Timer wird gestartet, wenn die Maus beginnt, vorwärts zu bewegen, und endet, wenn der erste in der Vorderpfote homecage platziert wird. 3. Spontane Aktivität im Zylinder Vorgehensweise Umkehren 3 sauber Mäusekäfige auf einen Tisch oder in einem Maus-Käfig verändernden Station. Vereinbaren zwei Käfige neben each anderen ~ 18 cm voneinander entfernt, so dass die Vorderseite der Käfige gegenüber dem Experimentator. Der verbleibende Käfig hinter den beiden anderen Käfigen und wird dazu dienen, den Spiegel zu unterstützen. Legen Sie das Stück Glas auf der Oberseite der 2 Käfige und positionieren Sie es so wird das Glas von der Außenkante der ersten 2 Käfigen unterstützt wird. Setzen Sie den Zylinder auf der Oberseite des Glases und der Spiegel in einem Winkel unter dem Glas, stützte sich auf den 3. Käfig zurück. Der Winkel kann irgendwo im Bereich von 30 ° – 45 °, aber noch wichtiger ist der Blick aus dem Spiegel, um den vollen Durchmesser des Zylinders sind. Stellen Sie die Videokamera up vor dem Spiegel und stellen sowohl den Spiegel und Videokamera bis Sie den gesamten Durchmesser des Bodens des Zylinders können. Stellen Sie den Timer für 3 min und beschriften Sie eine Karte mit den wichtigen Experiment (Datum, Maus #, etc.). VideoRecord das Label für 2-3 Sekunden. Platzieren Sie die Maus in den Zylinder und die Aufnahmetaste drücken und den Timer. Record die Maus für drei Minuten. Es ist wichtig, dass die Prüfung Gegend ruhig ist so laute Geräusche und Gespräche mit der Maus ablenken kann und möglicherweise dazu führen, Einfrieren Verhalten. Während der 3 min verwenden eine Hand, um die Anzahl der Hinterreifen die Maus macht, während in den Zylinder zu zählen. Eine hintere ist als vertikale Bewegung mit beiden Vorderbeine aus dem Boden, so dass die Maus nur auf seine Hinterbeine stehen definiert ist. Am Ende der 3 min entfernen Sie die Maus und setzen Sie ihn wieder in seine homecage. Reinigen Sie den Zylinder und Glas mit einem Desinfektionsmittel durch die Tierpflege oder tierärztliche Personal zur Verfügung gestellt. Lassen Sie die Reinigungslösung vor dem Setzen des nächsten Maus in dem Zylinder zu trocknen. 4. Analyse der spontanen Aktivität Videos können direkt von der Kamera betrachtet werden oder angeschlossen an einen Fernseher oder Computer für eine größere Bildschirmansicht. Die Videobänder sollte von einem Experimentator blind Genotyp und Behandlung Zustand innerhalb des Experiments erzielt werden. Vorderbein Schritte gezählt als das Video in Zeitlupe gespielt. Ein forelimb Schritt wird gezählt, wenn ein Tier beide Vorderbeine nacheinander bewegt über den Boden des Zylinders in einer aufeinander folgenden Bewegung. Ein forelimb Bewegung wird nicht gezählt, wenn die Zeit zwischen der Bewegung von einem Vorderbein und das andere Vorderbein ist länger als 5 Sekunden. Hindlimb Schritte werden in der gleichen Weise wie forelimb Schritten. Zeitaufwand Pflege gemessen mit einer Stoppuhr und Wiedergabe des Videos in Echtzeit. Grooming Kämpfe auf der Schnauze, vibrissae und Körper gemessen. 5. Adhesive Removal Bewegen Sie die Maus in ihrer homecage in den Testraum oder in einem Maus-Käfig verändernden Station. Entfernen Sie die Feeder bin aus dem Käfig und ersetzen Sie den Käfig Deckel. Lassen Sie die Maus / Maus, um den Testraum und dem Käfig ohne Feeder für 1 Stunde zu gewöhnen. Für die Prüfung mit einem sauberen Käfig Käfiggefährten platzieren, so dass die Test-Maus ist die einzige in der homecage.Entfernen ~ 3/4 der Bettwäsche und legen Sie es in den sauberen Käfig mit den Käfiggefährten. Im homecage scruff der Test Maus, um sie zurückzuhalten und mit ein Paar kleinen Zange Ort ein Etikett auf der Schnauze der Maus. Drücken Sie das Etikett auf die Schnauze mit der Zange und lassen Sie die Maustaste. Setzen Sie den Deckel auf den Käfig und starten Sie eine Stoppuhr. Wenn die Maus macht einen Versuch, um das Label mit seinen Vorderpfoten notieren Sie die Zeit zu entfernen. Wenn die Maus berührt jedoch nicht das Etikett entfernen dann halten die Zeit gehen, bis er es entfernen und notieren Sie die Zeit sowie (Kontakt-und Abbauzeit). Wenn die Maus nicht berührt oder entfernen Sie den Aufkleber innerhalb von 60 sec dann der Prozess beendet und der Aufkleber wird manuell durch den Experimentator entfernt. Setzen Sie den Test mit der Maus in den Käfig sauber und entfernen Sie die nächste Maus und legen Sie es in den homecage und dem Testen beginnen. Alle Mäuse erhalten 3-Studien. Es ist wichtig, zwischen Mäusen eher wechseln als gar alle drei Studien ineine Maus zu einem Zeitpunkt. Trials, wo das Etikett fällt oder nicht auf die Schnauze zu sichern, werden nicht gezählt.