Здесь мы опишем тест для роста<em> Золотистый стафилококк</em> С помощью гемоглобина в качестве единственного источника доступных питательных железа. Этот анализ устанавливает роль бактериальных факторов, влияющих на гемоглобин полученных приобретения железа.
Золотистого стафилококка является патогенная бактерия, которая требует железо для выполнения жизненно важных функций обмена веществ и вызывают болезнь. Наиболее распространенными водохранилища железа внутрь человеческого организма является гема, который является кофактором гемоглобина. Для получения железа из гемоглобина, С. золотистого использует сложные системы, известной как железо-регулируемых поверхности определителя (Isd) системы 1. Компоненты Isd системы в первую очередь связывают гемоглобин хоста, а затем извлечь и импортировать гема, и, наконец, освобождение железа из гема в бактериальной цитоплазме 2,3. Этот путь был расчлененный через многочисленные лабораторные исследования 4-9. Кроме того, вклад Isd системы инфекцию неоднократно продемонстрирована на мышах 8,10-14. Создание вклад Isd система гемоглобина, полученных железа приобретения и рост оказался более сложным. Рост анализов с использованием гемоглобина в качестве единственного источника железа сложно бУ нестабильность коммерчески доступных гемоглобина, загрязняя свободного железа в питательной среде, и токсичность, связанная с железом энтеросорбенты. Здесь мы представляем метод, который преодолевает эти ограничения. Высокий гемоглобин качества получается из свежей крови и хранится в жидком азоте. Очищенная гемоглобина дополняется в железо-разрушающих среднего имитируя железа плохих условиях, с которыми сталкивается патогенов внутри позвоночного хозяина. К голодающим С. золотистого свободного железа и дополнения с минимально манипулировать формой гемоглобина Мы вызвать рост в манере, которая полностью зависит от способности связывать гемоглобин, извлечь гема, проходит через гема бактериальной клетки конверт и ухудшить гема в цитоплазме. Этот анализ будет полезен для исследователей, стремящихся выяснения механизмов hemoglobin-/heme-derived приобретения железа в S. стафилококка и, возможно, других бактериальных патогенов.
Железо является важнейшим питательным требуется организмов из всех царств жизни 15. У позвоночных, железо поглощенных чтобы избежать токсичности, вызванные этим элементом. Это поглощение таит в себе железо от вторжения микробов в процессе, известном как питание иммунитет 16.</sup…
The authors have nothing to disclose.
Это исследование было поддержано США Public Health Service гранты AI69233 и AI073843 из Национального института аллергии и инфекционных заболеваний. EPS является членом Burroughs Wellcome в патогенезе инфекционных заболеваний. KPH был профинансирован клеточной и молекулярной микробиологии Обучение гранта Программы 5 T32 A107611-10.
Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Comments |
HPLC anion exchange column | Varian | PL1551-3802 | |
Drabkin’s reagent | Sigma | D5941-6VL | |
Hemoglobin standard | Pointe Scientific | H7506-STD | |
RPMI | HyClone | SH30011.02 | |
Chelex 100 sodium form | Sigma | C7901 | |
EDDHA | LGC Standards GmbH | ANC 001 | |
Hemoglobin a antibody | Santa Cruz Biotechnology, Inc | SC-21005 | |
Tryptic soy agar | BD | 236920 |