局部应用药物研究烟碱型乙酰胆碱受体功能的小鼠脑片

烟草使用导致许多健康问题，包括癌症，心脏疾病，肺气肿和中风。吸烟成瘾是一种普遍的神经精神疾病，源于尼古丁对整个中枢神经系统的烟碱型乙酰胆碱受体（nAChRs）细胞生物物理和行动。理解不同胆碱受体亚型中存在的对尼古丁上瘾有关的脑区是一个重要的优先事项。

实验，采用如全细胞膜片钳或两电极电压钳记录的电生理技术是有用的药理特性的兴趣的nAChRs。细胞表达的nAChRs，如哺乳动物组织培养细胞或非洲爪蟾卵母细胞，在物理上隔离的，因此容易使用现代药理学工具研究。已经取得了很大的进展，特别是当使用这些技术的目标受体已知一个第二异位表达很容易实现。然而，通常情况下，有必要在他们的母语环境中学习的nAChRs：从实验室小鼠或大鼠急性收获大脑切片的神经元在。 ，例如，小鼠表达“过敏性”胆碱受体亚基如的α4L9'A小鼠¹和α6L9'S的小鼠^2，允许用于明确识别它们的功能表达的特定的胆碱受体亚单位的基础上的神经元。虽然全细胞膜片钳技术记录神经元在大脑切片的由熟练的电生理常规的做法，它是具有挑战性的局部应用药物，如乙酰胆碱或尼古丁的记录细胞内的脑切片。药物稀释成灌流（沐浴应用）是不可逆的迅速，和不容易适应U型管系统与大脑切片。

在本文中，我们描述了一种方法，迅速将胆碱受体激活的神经元的药物在成人米乌斯大脑切片。标准全细胞的记录，则在切片中的神经元，并填充与感兴趣的药物的第二微吸管被操纵到所记录的小区附近的位置。加压的空气或惰性填充药物的吸移管的入氮气的注入会导致少量药液要喷射到记录小区从移液管。胆碱受体介导的电流是使用这种方法，能够解决的问题与毫秒的精度。药物的应用时间可以很容易地被改变，和填充药物的吸移管可以缩回和替换一个新的移液管，使浓度 – 反应曲线，以创建为一个单一的神经元。虽然描述的胆碱受体神经生物学的上下文中，这种技术应该是有用的用于研究许多类型配体门控离子通道或受体的神经元从大脑切片。