生产和使用背驮式多管电极<em在体内</em>药理手法的神经反应

拉玻璃电极拉玻璃电极 拉出单桶电极使用单管玻璃毛细管用灯丝和拉小费测得的直径为约1-2微米，轴的长度为10-12毫米，和相应的约12兆欧姆（范围5-20兆欧姆）的电极电阻。在0.9％NaCl溶液。下电极的电阻会导致更多的背景活动从单个神经元中分离单一的活动，从而更加困难。对于拉动该电极，使用水平或垂直牵拉与任一加热丝或加热线圈。 拉出多管电极。由于更大的直径的多管玻璃和围绕整个多管受热均匀分布的需要，一个强大的牵拉与较大直径的加热线圈，不加热灯丝，是必要的。阿多管吸移管具有被插入在所述加热灯丝的中心与nO触点加热线圈。请注意，除了5桶移液器这里描述，3 – 的桶或7镜筒移液器是市售的替代品。拉出的玻璃吸移管前端的总直径约10微米，或更小。在下一步骤中的正确的直径的前端将被打破，因此，其准确的笔尖的大小比的整体形状的电极头中，这应该是长期的和相对薄的，在提拉过程中不太重要。请参阅图1C中的图像所需的电极头的形状。短而粗的电极形状（ 图1B），将导致大量的组织损伤非常长而细的电极形状（ 图1A）时提前进入大脑，而会弯曲，从而将难以打破的电极尖端到正确的直径（见步骤2）。 修改电极尖端修改电极秘诀。之前的两个电极可以粘在一起，它们必须被修改。该轴的单电极需要被弯曲之前，它可以连接到多管，使确保成品的小猪背面电极的结合轴是尽可能地薄。此外，的多管电极的前端具有用于离子电渗疗法，以确保低电阻的被折断。 弯曲轴约20度的一个单一的筒电极。使用最小本生灯火焰可能。典型的“小”标准的实验室供应商创建本生灯火焰的大小，此应用程序是过于庞大。为了规避此问题，使用最小的商业本生灯和固定的注射器针（〜18号）的燃烧器的顶部，并使用牙科用粘固剂的密封连接。当操作时，火焰应该是很难看到的，约5毫米或更小的直径，约8毫米高。任何在房间内的空气流动将熄灭火焰，因此它是一个好主意，在操作的燃烧器封闭的房间，或使用风盾。通过火焰移动单桶电极弯曲约20度。目的有燃烧器的火焰熔化玻璃的过渡区，在远离电极尖端大约10毫米。为了避免熔化我们建议，该电极被保持在约45度的电极的前端，前端朝下，并通过火焰移动电极相对较快。 折断的多管电极的前端，为了确保视觉打破了电极尖端的控制，同时，使用显微镜的最低10x物镜和10倍目镜。插在眼的测量规模也将需要测量头的大小。将一块有机玻璃的显微镜这样的结束，可以看出，在大约三分之一的有机玻璃鉴于在显微镜领域的二分之一。有机玻璃片在我们的例子中，大约是25×70毫米和5毫米厚的和连接的，通过螺钉可固定到一个自定义在显微镜载物台的线程。重要的是，有一个设计，它允许为有机玻璃独立的滑动移动。将多管电极在一张床上的橡皮泥在玻片上，并插入幻灯片，包含电极显微镜载物台的幻灯片夹。使用显微镜载物台的XY机械手，轻轻地移动电极尖端对有机玻璃片，并通过显微镜目镜观察破的尖端。尝试干净突破多管的尖端直径约25-35微米的累积。丢弃移液管尖直径不均匀的休息断绝过大，或提示。我们放弃我们的多管电极由于不良尖形状的约30％。 组装背驮式电极装配背驮式电极。 位置电极。删除步骤2.2从显微镜载物台的有机玻璃片。固定完成多管电极插入橡皮泥在玻片上，尖端指向略有上升。朝上将是重要的步骤3.2中，在两个电极的胶合。点上去的提示，导致胶水远离尖端，避免胶电极尖端。将弯曲单管电极，电极持有人定制的显微操纵器（ 图2）。使用可视化的指导意见，然后再微观指导，降低了单管的多管电极的电极上。直接进入的槽，其形成由5桶的布置的，其前端突出的多管尖端的前端由约5-10微米的单电极，应该降低。当降低单桶，密切观察]是在两电极之间形成的角度。对于最好的结果，在其中的提示点彼此分开，而是试图降低单电极到避免任何角度多完全平行或即使与它的端部第一次接触的多管，形成一个很轻微的“楔”的安排。由于单一的套筒尖端是非常灵活的，它会弯曲时，单个电极被降低一点进一步后的前端已达到多桶电极的顶表面，形成一个干净的复合尖端有少量的内置弹簧作用帮助的提示。但是，如果单管和多管电极之间的角度太陡（太多的楔形），弹簧的作用将是太高和向下弯曲的电极布置。 胶电极轴在一起。胶轴的两个电极一起使用氰基丙烯酸酯（强力胶）。将一个扁平的牙签和触摸电极组件用胶水下降到旁边的小滴一小滴胶水。在最远端的位置的提示开始，慢慢地将牙签用胶水降沿电极轴对电极尖端。使用太多胶水，或施胶吨的oo与接近的电极尖端将导致胶合电极开口，使所述电极的至少部分非功能。 用牙科水泥稳定关节。少量的牙科水泥和牙科丙烯酸混合在一个小的一次性塑料盘或权衡船，采用扁平的牙签。等待，直到水泥成为可模制的，并在两个电极之间的接头涂上少量稳定的联合（粉红色的图3中的材料）。允许约15分钟至干。 电极取出并妥善保管。小心地取出背驮式电极的微操作机器人的持有人，然后从载玻片上分离，并存储在防尘的容器中。 准备电极填充解决方案准备电极填充的解决方案。由于离子电渗疗法需要带电的分子，无论是在酸性或碱性的环境（通常是一个要溶解大多数代理商た约3-4的pH值，或约8-10的pH值，分别）。一些经常使用的化学物质，是在离子电渗疗法的列于表1。对于代理商而言，该表中未列出的，确定的pKa值，是否会更容易在酸性或碱性环境中使用的分子，使分子带电，并解散相应。为了达到最佳效果，混合所有的解决方案鲜的每日。 填写并准备电极填写，并准备电极。使用电极前，请填写每个桶各自的药物，使用碳纤维28 – 34号针头的注射器针头式过滤器。填写4个外桶5桶配置的首选药物，该中心作为一个平衡的桶桶3M氯化钠。填写单每桶记录电极以及与3M氯化钠。添加染料的NaCl溶液中，如快速绿色或酚红将使它更容易看到的电极头在放置过程中的脑表面上的电极。将电极插入电极持有人的记录设置，所有的电线插入到合适的玻璃桶。使用从约1厘米的绝缘已被移除的尖端处的绝缘银线。应该有5根为多管电极（4药物桶和一个平衡的桶），再加上需要被插入到记录单管电极的放大器导线。 打开电离子透入泵模块打开离子电渗泵模块和测试所有的酒桶。每一个泵模块的电极测试功能，将有助于确定如果电极筒功能。从桶的药物，以防止泄漏，在不使用时，保持在作为分子的电荷相反的极性的电压，需要施加。