免疫応答と行動の間のリンクを理解するために、我々は中に運動行動を測定する方法を説明します<em>ショウジョウバエ</em>細菌感染だけでなく、モニタリングの生存、細菌負荷、及び先天性免疫、NFκBの重要な調節因子でのリアルタイムのアクティビティによって免疫応答をマウントするには、ハエの能力の中に。
免疫応答とホストの動作の間の複雑な相互作用は、種の広い範囲に記載されている。過剰睡眠は、特に、哺乳類1感染に対する反応として起こることが知られており、また、最近、 キイロショウジョウバエ 2に記載されている。これは、一般的に睡眠が感染時に宿主に有益であり、それは強力な免疫システム3,4の維持に重要であることが受け入れられている。しかし、この仮説を支持する実験的証拠は、4限られており、免疫応答時の過剰睡眠の機能は不明なままである。我々は、この複雑な問題に対処するための学際的なアプローチを使用していて、単純な遺伝モデル系、ショウジョウバエキイロショウジョウバエの研究を行ってきた。我々はハエの運動行動と睡眠を測定するための標準的なアッセイを使用し、このアッセイはハエinfecteにおける挙動を測定するために使用される方法を示してい細菌の病原性株でd。このアッセイはまた、感染時に個々のハエの生存期間を監視するのに役立ちます。免疫機能の追加措置は、感染症およびNFκB、 ショウジョウバエの自然免疫応答の中心となる重要な転写因子の活性化をクリアするハエの能力を含んでいます。感染時の生存転帰と細菌クリアランスの両方が一緒に感染に対する抵抗性と寛容の指標である。許容範囲は、感染による被害を制限し、それによりシステム5内病原体の高レベルにもかかわらず、生き残るためには、ホストの能力と定義されていて抵抗が、感染をクリアするには、ハエの能力を指します。感染中のNFκB活性のリアルタイム監視は、感染時に生存の分子機構への洞察を提供します。これらの簡単なアッセイにおけるショウジョウバエの使用は睡眠の遺伝学的および分子生物学的解析を容易にと免疫応答とどのようにこれらの2複雑なシステムが相互に影響を受けています。
このプロトコルは、どのような動作を調査するためのアプローチを概説し、特に睡眠、免疫応答パラメータにリンクされています。これらのパラメータは、in vivoでのルシフェラーゼレポーターによって測定された細菌負荷、生存転帰、およびNFκB活性が挙げられる。一緒に、これらのパラメータは、ハエは感染と闘うことができるどれだけの情報を提供します。細菌負荷と生存転帰は?…
The authors have nothing to disclose.
この作品は、顎に助成#1R21NS078582-01の下に交付金#IOS-1025627の下で国立科学財団によってと米国立衛生研究所によってサポートされていました
Material Name | Company | Catalogue number | Comments |
Equipment | |||
Incubators | Percival Scientific, Inc. | I30BLLC8 I36VLC8 |
Any incubator capable of running programmed light/temperature schedules is appropriate. |
Drosophila Activitiy Monitors | Trikinetics Inc., Waltham, MA | DAM2 | As described elsewhere6, this system requires a computer interface, software, and other accessories. |
Pyrex Glass Tubes | Trikinetics Inc., Waltham, MA | PGT-5×65 | |
Microplate scintillation and luminescence counter | Perkin Elmer | TopCount NXT 12 detector |
Any microplate reader capable of detecting luminescence can be used for this type of reporter assay. TopCount contains multiple detectors and an automated stacker; it is capable of being programmed to read continuously from multiple plates. |
FluorChem 8900 | Alpha Innotech | Imaging of bacterial cultures is optional; any digital imaging system with visual light capability is sufficient. | |
Micropipette Puller | Tritech Research, Inc. | Narishige PC-10 | |
Supplies | |||
Borosilicate Glass Capillaries | World Precision Instrument Inc. | 1B100F-4 | |
3 ml Syringe | Fisher Scientific | BD 305482 | |
Syringe Needles | Fisher Scientific | BD 305196 | 18 G – cut off the tip of the needle to prevent damage to the tubing. |
Silicone Tubing, i.d. (0.030″) o.d. (0.065″) Wall Thickness (0.018″) | VWR | 60985-706 | Used for attaching glass capillary needles to a syringe |
3 Way Stopcock | American Pharmaseal Company | K75 | |
Kontes Pellet Pestle Cordless Motor | Fisher Scientific | K749540-0000 | |
Kontes Pellet Pestle | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
Glass balls 3mm | VWR | 26396-630 | |
Microplate Microlite 1+ | Thermo Scientific | 7571 | Select 96-well plates that are appropriate for luminescence – they must be opaque. |
TopSeal-A:96-well Microplates | PerkinElmer | 6005185 | Microplate Press-On Adhesive Sealing Film |
D-Luciferin, Potassium Salt | Gold BioTechnology, Inc. | LUCNA | |
Software | |||
Insomniac2 | Available upon request to the authors | custom; written by Lesley Ashmore, Ph.D. (Westminster College) | Matlab based software that has been used routinely for analysis of sleep2,6,11 |
Drosonex | Available upon request to the authors | custom; written by Thomas Coradetti (Sidewalk Software) | A PC MSVC6 program used for survival analysis from raw data files collected with the Trikinetics system |
Photoshop CS3 | Adobe | Useful for obtaining numbers of cfu/plate from digital images (optional) |