我们描述了一种技术,细胞外记录和刺激神经,肌肉和个人的神经元,<em在体外</em>同时引出和观察在馈送装置的取食行为的不同类型的<em>海兔</em>。
多功能的,一个外围结构的能力,生成多个不同的行为,使动物能够迅速调整自己的行为,以适应不断变化的环境。海洋软体动物 Aplysia 夜蛾提供了一个易于处理系统的多功能性的研究。 海兔的饲养过程中,产生了几种不同类型的使用相同的进给装置,颊质量的行为。控制这些行为的神经节包含了一些大型,确定了神经元的电生理研究访问。已经描述了这些神经元的活性,可分为两种类型,摄食和egestive方案上的神经活动的定时关闭食品抓取器相对的神经活动,是根据在电机的程序,protracts或缩回抓钳2。然而,在孤立的神经,肌肉的运动,会产生这些行为是不存在的,使得它更难某些电机的方案观察是否是相关的实际行为。 在体内 ,神经和肌肉的录音中已取得相应的喂养方案2,3,4,但它是非常困难的直接记录从单个神经元的5。此外, 在体内 ,摄食方案可进一步分为叮咬和燕子1,2,区别是难以在体外准备。
暂停的的口腔大量制备( 图1)孤立的神经节和完整的动物之间架起了一座桥梁。在该制剂中,可摄食行为-包括咬和吞咽-和egestive的行为(拒绝)引出,在同一时间可以记录作为单独的神经元,刺激使用胞外电极6。与这些不同的行为的进给运动,可以收音DED,量化,直接关系到电机的程序。运动程序中的悬浮口腔大量制备似乎是更相似, 在体内观察到的是运动程序引起的孤立节。因此,电动机在此制备方案可以更直接地在体内的行为有关的,在相同的时间,单个神经元的较完整的动物更容易访问的记录和刺激。此外,作为隔离神经节和完整的动物之间的中间步骤,从暂停的颊质量结果可以有助于更加减少,更完整的设置中获得的数据的解释。暂停的的口腔大量制备是一个非常有用的工具,在海兔的神经控制的多功能特性。
以前的工作特点的海兔电机计划在完整的动物和减少的准备工作,如孤立的神经。在完整的动物,虽然单个神经元的记录已经获得了5,这样的实验是非常困难的,和电极不能移动从神经元到神经元在喂养过程中。在离体神经节,神经活动引起的进给运动不能观察到。暂停的的口腔大量制备这两个极端之间架起了一座桥梁。
其他半完整制剂已被用于在以前的研?…
The authors have nothing to disclose.
这项研究是由美国国立卫生研究院授予NS047073和国家科学基金会资助DMS1010434。
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Sodium chloride | Fisher Scientific | S671 | Biological, Certified |
Potassium chloride | Fisher Scientific | P217 | Certified ACS |
Magnesium chloride hexahydrate | Acros Organics | 19753 | 99% |
Magnesium sulfate heptahydrate | Fisher Scientific | M63 | Certified ACS |
Calcium chloride dihydrate | Fisher Scientifc | C79 | Certified ACS |
Glucose (dextrose) | Sigma-Aldrich | G7528 | BioXtra |
MOPS buffer | Acros Organics | 17263 | 99% |
Carbachol | Acros Organics | 10824 | 99% |
Sodium hydroxide | Fisher Scientific | SS255 | Certified |
Hydrochloric acid | Fisher Scientific | SA49 | Certified |
Single-barreled capillary glass | A-M Systems | 6150 | |
Flaming-Brown micropipette puller model P-80/PC | Sutter Instruments | Filament used: FT345B | |
Enamel coated stainless steel wire | California Fine Wire | 0.001D, coating h | |
Household Silicone II Glue | GE | ||
Duro Quick-Gel superglue | Henkel corp. | ||
A-M Systems model 1700 amplifier | A-M Systems | Filter settings: 300-500 Hz nerves,10-500 Hz I2 muscle | |
Pulsemaster Multi-Channel Stimulator | World Precision Instruments | A300 | |
Stimulus Isolator | World Precision Instruments | A360 | |
AxoGraph X | AxoGraph Scientific | ||
Veeder-Root Totalizing Counter | Danaher | C342-0562 | |
Gold Connector Pins | Bulgin | SA3148/1 | |
Gold Connector Sockets | Bulgin | SA3149/1 | |
Sylgard 184 Silicone Elastomer | Dow Corning | ||
100 x 50 mm Crystalizing Dish | Pyrex | ||
High Vacuum Grease | Dow Corning | ||
Pipet Tips | Fisher Scientific | 21-375D | |
Minutien Pins | Fine Science Tools | 26002-10 | |
Modeling Clay | Sargent Art | 22-4400 | |
Silk Sutures | Ethicon | K89OH | |
Whisper Air Pump | Tetra | 77849 | |
Aquarium Tubing | Eheim | 7783 | 12/16 mm |
Elite Airstone | Hagen | A962 | |
Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 15000-08 | |
Dumont #5 Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | |
Yaki Sushi Nori Seaweed | Rhee Bros | ||
Kimwipes | Kimberly-Clark | 34155 |