البكتيرية التصوير Bioluminescent<em> في الجسم الحي</em
Summary
توضح هذه المقالة إدارة<em> لوكس الموسومة</em> البكتيريا على الفئران واللاحقة<em> في الجسم الحي</em> التحليل باستخدام التصوير تلألؤ بيولوجي IVIS.
Abstract
هذا الفيديو يصف استخدام كامل الجسم bioluminesce التصوير (BLI) لدراسة الاتجار البكتيرية في الفئران الحية، مع التركيز على استخدام البكتيريا في الجينات والعلاج بالخلايا لمرض السرطان. البكتيريا تقديم فئة جذابة من ناقلات لعلاج السرطان، وحيازة القدرة الطبيعية على النمو داخل الأورام بعد تفضيلي الإدارة النظامية. بكتيريا مهندسة للتعبير عن الجينات لوكس راديو كاسيت تصريح BLI الكشف عن البكتيريا ومواقع الورم في نفس الوقت. ويمكن تصور موقع ومستويات البكتيريا داخل الأورام مع مرور الوقت درست بسهولة، في اثنين أو ثلاثة أبعاد. هذه الطريقة تنطبق على مجموعة واسعة من الأنواع البكتيرية وأنواع طعم أجنبي الورم. توضح هذه المقالة بروتوكول لتحليل البكتيريا داخل الفئران bioluminescent تحت الجلد تحمل الورم. يوصف أيضا من البكتيريا المتعايشة التصور في القناة الهضمية (GIT) من BLI. هذه قوية، ورخيصة، واستراتيجية في الوقت الحقيقي التصوير تمثيلاTS وسيلة مثالية لدراسة البكتيريا في الجسم الحي في سياق أبحاث السرطان، العلاج الجيني في وجه الخصوص، والأمراض المعدية. هذا الفيديو يوضح الإجراء لدراسة لوكس الموسومة E. القولونية في الفئران الحية، مما يدل على قراءات المكاني والزماني للتحقيق BLI استخدام مع نظام IVIS.
Protocol
Discussion
في سياق العلاج الجيني، أظهرت استخدام العوامل البيولوجية لتسليم الجينات العلاجية للمرضى وعدا كبيرا 3-5. مثل الفيروسات، والخصائص البيولوجية الفطرية من البكتيريا تسمح الكفاءة في تنفيذ DNA إلى الخلايا أو الأنسجة، وخاصة في سياق السرطان. وقد تبين أن البكتيريا قادرة ط…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
الكتاب ترغب في الاعتراف الدعم ذات الصلة لهذه المخطوطة من المفوضية الأوروبية البرنامج الإطاري السابع (PIOF-GA-2009-255466) والايرلندي مجلس البحوث الصحية (HRA_POR/2010/138). وكس الموسومة E. كان القولونية النوع هدية من الدكتور جيهان كورماك، كلية جامعة كورك.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| 4T1 cell line | ATCC | CRL-2539 | Syngeneic breast cancer model derived from a spontaneously arising BALB/c mammary tumor |
| DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium |
| PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | Phosphate Buffered Saline |
| Xenogen IVIS | Caliper Life Sciences | IVIS 100 for 2D imaging; IVIS Spectrum for 3D. | |
| Luria Broth Miller (LB) | Sigma-Aldrich | L2542 | Growth medium for E. coli |
| Erythromycin | Sigma-Aldrich | E5389 | Antibiotic |
| Streptomycin | Sigma-Aldrich | S9137 | Antibiotic |
| MF1nu/nu mice | Harlan (UK) | 069(nu)/070(nu/+) | Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu |
| Balb/c mice | Harlan (UK) | 066 | Haplotype: H-2d |
| Gavage needle | Vet-tech Solutions (UK) | DE009 | 22G x 38mm straight gavage needle |
| Syringe for IV injection | BD BioSciences | 309309 – 1 ml | Insulin syringe with 28 G x ½ inch micro-fine IV needle. |
| Syringe for tumor inoculation | Braun | 9161376V | Omnifix 26 G x ½ inch needle |
Referencias
- Cronin, M., et al. High resolution in vivo bioluminescent imaging for the study of bacterial tumour targeting. PLoS One. 7, e30940 (2012).
- Kuo, C., Coquoz, O., Troy, T. L., Xu, H., Rice, B. W. Three-dimensional reconstruction of in vivo bioluminescent sources based on multispectral imaging. J. Biomed. Opt. 12, 024007 (2007).
- Tangney, M., Ahmad, S., Collins, S. A., O’Sullivan, G. C. Gene therapy for prostate cancer. Postgrad Med. 122, 166-180 (2010).
- Morrissey, D., O’Sullivan, G. C., Tangney, M. Tumour targeting with systemically administered bacteria. Curr. Gene Ther. 10, 3-14 (2010).
- Collins, S. A., et al. Viral vectors in cancer immunotherapy: which vector for which strategy. Curr. Gene Ther. 8, 66-78 (2008).
- Yu, Y. A., Zhang, Q., Szalay, A. A. Establishment and characterization of conditions required for tumor colonization by intravenously delivered bacteria. Biotechnol. Bioeng. 100, 567-578 (2008).
- Baban, C. K., Cronin, M., O’Hanlon, D., O’Sullivan, G. C., Tangney, M. Bacteria as vectors for gene therapy of cancer. Bioeng. Bugs. 1, 385-394 (2010).
- Cronin, M., et al. Orally administered bifidobacteria as vehicles for delivery of agents to systemic tumors. Mol. Ther. 18, 1397-1407 (2010).
- van Pijkeren, J. P., et al. A novel Listeria monocytogenes-based DNA delivery system for cancer gene therapy. Hum. Gene Ther. 21, 405-416 (2010).
- Ahmad, S., et al. Induction of effective antitumor response after mucosal bacterial vector mediated DNA vaccination with endogenous prostate cancer specific antigen. J. Urol. 186, 687-693 (2011).
- Riedel, C. U., et al. Improved luciferase tagging system for Listeria monocytogenes allows real-time monitoring in vivo and in vitro. Appl Environ Microbiol. 73, 3091-3094 (2007).
- Cheng, C. M., et al. Tumor-targeting prodrug-activating bacteria for cancer therapy. Cancer Gene Ther. 15, 393-401 (2008).
- Foucault, M. L., Thomas, L., Goussard, S., Branchini, B. R., Grillot-Courvalin, C. In vivo bioluminescence imaging for the study of intestinal colonization by Escherichia coli in mice. Appl. Environ. Microbiol. 76, 264-274 (2010).
- Collins, S. A., Hiraoka, K., Inagaki, A., Kasahara, N., Tangney, M. PET Imaging For Gene & Cell Therapy. Curr. Gene Ther. , (2012).
- Tangney, M., Francis, K. P. In vivo Optical Imaging in Gene & Cell Therapy. Curr. Gene Ther. , (2012).
