쥐의 뇌에서 뇌 표면 Vasculature 및 관련 Meninges의 해부 및 맥락막 얼기의 시각적 설명

동영상에 표시되지 않지만, 쥐가 먼저 미만의 3 분의 마취의 결과로, pentobarbital 300 밀리그램 / kg의 과다 복용을 부여하고 목 베기에 의해 사망​​했다. 그들의 두뇌는 빠른 속도로 다음했지만주의 깊게 두개골에서 제거하고 5 분을 위해 얼음처럼 차가운 정상적인 생리에 냉각. 그것은 이전에 MAV가 (레이어 I 상단) 피질의 표면에서 분리 될 수 있도록 MAV을 해부 할 시간이 양의 뇌는 쿨하게하는 것이 중요합니다. 뇌 그런 다음 얼음처럼 차가운 정상적인 생리 또는 0.1 M의 인산 나트륨 버퍼 생리 산도 = 7.4의 가득 얼음을 쉬고있는 유리 페트리 접시 (1cm 깊이)의 하단에 배치되었습니다. 모든 해부는 생리에 익숙해 대부분 뇌가 이루어집니다. 1. 뇌의 송과선의 제거 뇌 등쪽 측면까지를 (페트리 접시의 바닥에 상대적으로) 배치합니다. 뇌의 송과선은 t에 불과 뱃 부리 장식이있는 두 반구 사이에 가장 꼬리 복부 지역에 위치하고 있습니다그는 소뇌 (솔방울 모양의 리 세스)를 아래 또는 colliculi를 통해 meninges의 표면에 있습니다. 처음 두 개의 작은 구부러진 팁 집게를 사용하여 뇌의 송과선을 제거합니다. 이 피질과 같은 색상으로 분홍색이지만, 종종 혈액과 뇌 제거에서 잔류 vasculature의 흔적에 둘러싸여 있습니다. 2. MAV의 제거 "거꾸로"를 통해 뇌를 뒤집기과 척추 동맥, forebrain의 meninges과 vasculature에서 폰스를 덮고 작은 동맥과 meninges를 구분합니다. forebrain MAV의 제거 그 다음 시작됩니다. 이 분해 과정에 ventrally 시작하는 것이 중요합니다. 윌리스의 원의 큰 동맥, 중, 뇌동맥 (MCA)와 앞 동맥 강한하고있는에 "비계"역할을 pial의 작은 표면 동맥과 arterioles 막은 다음 meninges의 나머지 부분과 피질에서 제거 할 수 있습니다. m에 대한 Scremin에 7 리뷰보기광석 시각적 표현과 대뇌 표면 vasculature에 대한 자세한 내용. 두 반구를 시작으로, 내부 경동맥 시점에 바로 뒤 뒤 교통 동맥을 잘라야 작은 구부러진 팁 집게를 사용합니다. 따라서, forebrain의 더 앞쪽과 뒤쪽 동맥 나무를 분리. contralateral 반구에 대해 동일한 과정을 반복합니다. MCA와 포셉과 앞쪽 동맥 그립, 복부 앞쪽 피질 (piriform, 후각 결절)을 덮고있는 MAV가 후각 기관을 통해 주위를 둘러 해제 될 수 있도록 앞 – 등쪽 방향으로 부드럽게 당겨. 이 훨씬 앞 피질 (cingulated 및 궤도) 커버 MAV의를 제거합니다. 페트리 접시에 45-90 ° 각도로 뇌를 켜십시오. 측면 대뇌 피질의 영역을 (세분화 된 섬나라, 보조 somatosensory 및 청각 피질) 주변 MAV의 측면보다 앞쪽 영역은 MCA 및 관련 arter을 그립하여 피질에서 해방 될 수있다이거 야는 부드럽게 피질을 따라 dorsally 당겨. 필요한 경우, 포셉의 끝은 절개 중에 피질에서 주요 동맥를 들고 확보하는 데 사용할 수 있습니다. 이제 MAV의 더 뒤쪽 측면 영역을 제거합니다. (참고, 그것은 MAV는 추위와 수화 상태를 유지하려면이 수확 과정에서 다른 한 반구에서 전환하는 것이 가장 좋습니다. 또한, 피질에서 MAV를 자유롭게에 저항이 일시적으로 contralateral 반구 한 반구의 스위치가 발생하는 경우 그리고 나중에 원래 남반구로 이동합니다.) 기본 somatosensory을 둘러싼 MAV의 가장 등쪽의 영역을 제거하고 모터 피질 뇌 등쪽 측면까지를 (페트리 접시의 바닥에 상대적으로) 설정하려면 다음과 같이하십시오. 결국 뇌에서 MAV를 확보하려면 sagital 굴을 따라 포셉의 끝 부분을 사용합니다. 수확 MAV의이 부분은 어느 테스트 및 분석을 할 때까지 얼음 차가운 생리에 일시적으로 보관거나 그 이상의 처리를 위해 냉동 할 수 있습니다. 자주피질의 가장 뒤쪽 / 꼬리 지역 (entorhinal 영상 및 대부분의 꼬리 청각 cortices) 덮고있는 MAV는 피질에 부착 남아 있습니다. 의 제거는 retrosplenial 피질과 colliculi 놓인 사이의 MAV가 해부하는 동영상에 나중에 표시됩니다. 3. 맥락막 얼기의 제거 뇌 등쪽면을 배치하고 큰 집게는 반구 사이의 중간 선을 통해 작은 포셉을 밀어 후 상단에 피질과 코퍼스 callosum (bregma에서 ≈ -3.3 mm)를 통해 구멍에 끝을 사용과 장소에서 개최 해마의 중간 선. 측면 뇌실의 대부분을 노출 등쪽 해마와 심장에서 떨어져 callosum과 피질을 끌어 포셉을 사용합니다. 맥락막 얼기가 자리 잡고 있으며 길이를 실행하는 주요 동맥을 demarcating 빨간색 물결 모양 선으로 식별 할 수 있습니다. 세 번째 벤처의 측면 벽을 놀리려는 포셉의 두 끝을 사용하여tricle과 가장 꼬리 끝 (bregma 8에서 ≈ -4.3 mm)에서 확대. 작은 집게 사용하여 맥락막 얼기 무료의 끝을 당겨. 그런 다음 심장과 꼬리가있는 / putamen 사이의 매우 앞 지역 (대부분의 뱃 부리 장식이있는 범위 내에서, Bregma에서 ≈ 1.6 mm)로 이동하여 포셉은 심실의이 섹션을 확대하고 맥락막 얼기 무료로 당겨와 함께. 두 번째 남은 맥락막 얼기를 얻기 위해 contralateral 반구에 동일한 절차를 수행합니다. 다시 조직은 하나 테스트 및 분석을 할 때까지 얼음 차가운 생리에 일시적으로 보관거나 그 이상의 처리를 위해 냉동 할 수 있습니다. 4. Retrosplenial, 청각 및 Visual 컴퓨터에 접속을 포함한 피질의 더 꼬리 지역에서뿐만 아니라 그 시상과 Colliculi 놓인 제 3 뇌실에 남아있는 MAV의 제거 시상 및 colliculi 이상 MAV를 노출 두 반구에서 전체 해마를 제거합니다. 의 제거MAV이 부분은 피질 이상 MAV의 제거보다 훨씬 덜 어렵습니다. 시상의 앞쪽 부분을 놓인 부드럽게 caudally 당겨 큰 vasculature을 쥐었고하여 MAV 무료의이 부분을 당겨. 이 vasculature는 위에의 collicular 네트워크에 연결되어 등쪽 해마와 등쪽 시상 네트워크에 혈액을 공급하고 있습니다. 꼬리 동맥 원 vasculature의 마지막 부분에 도달 할 때까지 caudally 점차적으로 무료 supracollicular 네트워크를 그냥 버려 당겨. 이 시점에서, 더 많은주의를 세분화 retrosplenial, 기본 청각 및 시각 cortices의 표면에 남아있는 뒤 복부 MAV를 제거하려면주의해야합니다. 피질의 더 앞쪽 부분을 덮고 MAV의 다른 부분과 마찬가지로,이 조직은 하나 테스트 및 분석을 할 때까지 얼음 차가운 생리에 일시적으로 보관하거나 나중에 처리하기 위해 고정. 이 두 번째 MAV 섹션에서 수확 남은 뒤 복부 MAV는 제거해야합니다그들은 개별적으로 분석 할 경우 d는 피질을 다루는 첫 번째 해부하는 MAV 섹션에 추가되었습니다. 5. 대표 결과 절개가 제대로 실행되면, 결과 MAV의 조직은 45-35에 대한 MG 총 무게가이 그대로 단체에 있어야합니다. 피질의 대부분을 둘러싼 처음 해부하는 MAV 25 밀리그램 및 시상를 덮고있는 MAV에 대해 무게해야 colliculi과 뒤통수 피질 약 15 밀리그램 무게해야합니다. 이 vasculature의 잔류 혈액의 색이 약간 분홍빛이 도는해야합니다. 양국 맥락막 얼기 수확은 각 무게 1-2 MG 두 개의 그대로 조직 샘플에 있어야합니다. 초과 물이 조직 손실을 방지하기 위해, 이러한 렌즈 청소에 사용하는 등 조직 종이를 사용하여 저장 또는 처리하기 전에 MAV에서 제거 할 수 있지만이 해부하는 맥락막 얼기에서 초과 물을 제거하는 좋은 생각이 아닙니다. 그림 1에 생성되었습니다 표현 profil을 비교 사용 제어 조건 하에서 세 지역에서 에스 (striatum, 정수리 피질과 MAV) 애질런트을 014,879 전체 쥐 게놈 4x44K 60mer oligonucleotide 어레이 (G4131F, 애질런트 테크놀로지스, 팔로 알토 (Palo Alto), CA, NCBI GEO 가입 # GPL7294, GSE23093과의 존재 GSE29733 NCBI GEO 저장소). 1) striatum의 정수리 피질에 비해 2) MAV는 정수리 피질에 비교하여 그림에서 두 플롯은 pictorially 표현을 보여줍니다. 이 striatum와 정수리 피질이 훨씬 더 밀접하게 MAV보다 서로 관련이있는 것이 분명하다. MAV로 맥락막 얼기를 비교 데이터는 향후 출판물에 표시됩니다. 그러나, MAV 및 맥락막 얼기의 표현 프로필이 더 가깝게는 striatum와 정수리 피질에보다 서로 관련되어있을 것입니다. 그림 2는 MAV의 차동 유전자 표현 고열에 대응 (EIH) 대 AMPH는 비교 표시 제어하고 서로합니다. 내용은 "> 제어 동물의 MAV의 공식 NCBI 유전자 기호가있는 이상 11,000 유전자의 유전자 발현은 striatum와 정수리 피질에 기록 된 사람들에 비해되었다.이 유전자 2000 이상 MAV의 2.5 배 이상 차이가 표현을했다 두 neuronal이 풍부한 조직에 비해, 그리고 550 유전자 표현의 10 배 이상 차이가 있었다. 이들 중 좀 더 40보다 % (253)는 10 배 또는 MAV에 이상 감소 표현과 유전자 있었고, 관련되었다 neuronal 기능.와 343 유전자는 정수리 피질과 striatum에 비해 MAV의 10 배 이상 표현으로이있었습니다. 유전자의이 목록은 MAV에서 매우 높은 농축과 유전자를 결정하는있는 출발점으로 사용되었습니다. 표 MAV 15 배 표현보다 더 큰 1 목록 유전자는 정수리 피질과 striatum에 비해과 기능에 대해를 분류합니다. 이러한 유전자의 대부분은 혈관 시스템 및 / 또는 면역 시스템에 관련된되었다.이 t는유전자의 ypes은 5에 대한 풍부한해야 – 10 -로 인해 증가 vasculature 자체와 그 안에 존재하는 혈액의 이동이 포착되었다. 그러나, 알려진 일반적인 혈관 기능을 가진 유전자를 들어, 15 배 이상 증가 MAV의 농축을 나타냅니다. 유전자의 숫자였다 매우 큰 배 변화도있었습니다, 1) 세포 외 기질 단백질 (특히 vasculature 관련이 없습니다), 2) 용질 수송 및 3) 지질 및 retinoic 산성 대사. 물론, 몇 가지 성장과 차별화 유전자 나 전사 인자가 발견되었습니다 있습니다. 1 그림. 정수리 컴퓨터에 접속하고 Striatum와 MAV의 유전자 발현의 비교. 정수리 피질과 striatum (위 플롯)와 정수리 피질과 MAV (아래의 음모)의 유전자 발현 수준을 비교 화산 줄거리. 빨간색 기호가 크게 다른 betwe있는 유전자를 나타냅니다실내 P에서 지역 <0.05와 지역 사이 1.5 배 이상 차등 표현되어 있습니다. 검은 색 기호는 크게 (P> 0.05) 지역 사이에 차이가없는 유전자를 대표하고 1.5 배 식에 서로 다른 미만의 거리에 있습니다. 핑크 기호는 P는 <0.05에서 표현의 1.5 배 차이보다하지만, 통계적으로 크게 다른과 유전자를 나타냅니다. 노란색 기호는 1.5 배 이상 표현이 유전자를 식별하지만,이 변경 사항은 P에서 <0.05 통계적으로 의미가 없습니다. 약어 AMPH의 암페타민 EIH 환경에서 비롯된 고열이었을 MAV의 meninges 및 관련 뇌성 vasculature 규격 normothermic 컨트롤 그림 2. 비교 고열과 MAV의 유전자 발현에 암페타민의 효과. 화산 플롯3 시간의 시점에서 생리, EIH 또는 AMPH 후 MAV의 유전자 발현 수준. 빨간색 기호가 검은 점 / 원은 크게 지역 사이에 차이가없는 유전자를 대표하면서 전혀 다른 것으로 간주되는 유전자를 나타냅니다. 추가 통계 분석 관리 및 치료 사이의 차이가 통계적으로 의미가 사실상 된 표현을 확인하는 데 사용되었다. MAV의 표현 뇌 표현 NCBI 유전자 기호 조직 특이성 또는보고 기능 (들) > 50 배 Col8a1 Anxa2, 데, Esm1, Glycam1, KL, Lect1, Lepr, Lum, Myh11, Ogn, Tagln, Thbs2, Tnnt2 Vasculature & 하트 > 50 배 Ccl19, Cd74, Defb1, Lrrc21, Mgl1, Mrc1, Msln, PLa2g5, Prg4, RT1-BB, RT1 – 다 면역 시스템 > 50 배 Adh1, Aebp1, Aldh1a2, Gstm2 Retinoic 산성 및 지질 처리 > 50 배 Cdh1, Col3a1, Col1a2, Colec12, Cpxm2, Cpz, Dcn, Emp3, Gpc3, Nupr1, Omd, Pcolce Slamf9, Tmem27, Tspan8 세포 외 기질 및 세포 세포 접합 > 50 배 Aqp1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, TTR 이온 및 용질 항상성 > 50 배 Alx3, Cdkn1c, Foxc2, Igfbp2, Ifitm1, Ifitm2, Nkx6-1, Osr1, Prrx2, Sfrp1, Tbx15. Upk1b, Wisp2, Wnt6 개발 및 스크립트 규정 > 50 배 Gpha2, Mfap5, Mpzl2 Plac8, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1 알 수없는 및 기타 30-50 배 </TD> Anxa1, Angpt2, C6, Gjb2, Ptgis, Thbd, Timp1 Vasculature & 하트 30-50 배 Casp12, Ccl2, Ccr1, Cd14, Cxcl10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, Spp1, Xcl1 면역 시스템 30-50 배 Col6a3, Cpxm1, Efemp1, Fmod, MGP, Nid2 세포 외 기질 및 세포 세포 접합 30-50 배 CP, Cubn, Gcgr, S100a6, Scn7a, 스코틀랜드, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5 이온 및 용질 항상성 30-50 배 CFD, Ch25h, Crabp2, Rarres2 Retinoic 산성 및 지질 처리 30-50 배 Bmp6, Casp12, Dab2, Folr1, Igf2, Msx1, Tbx18, Twist1, Wnt5b 개발 및 스크립트 규정 30-50 배 Cela3b, Cln6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, VIM 알 수없는 및 기타 15 30 배에 ADM, Angpt1, Angptl2, Bgn, Cklf, Cnn1, Cox8h, Ctsk, F13a1, Gja5, Klf4, 훈제 연어, Lyz, Myl9, Procr, Pros1, RT1 – 바, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, Tgm2, Tnmd, Trim63, Txnip , Vamp5, Vtn Vasculature & 하트 15 30 배에 에이다, Bst2, Ccl6, Cd40, Cd68, Ctsc, DAP, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, Fmo1, Glipr1, Ier3, Ifi47, Igsf6, MSC, Nfatc4, RT1 – Db1, Serpinb1a, Tir4, Tubb6 면역 시스템 15 30 배에 Adamtsl4, Col1a1, Crb3, Dpt, Egfl3, Fbn1, Fbln1, Fbln5, Fn1, Itgb4, Lama2, Lgals3bp, Loxl1, Mfap4, Mmp14, Mmp23, Ppic, Serpinh1, Timp3 세포 외 기질 및 세포 세포 접합 15 30 배에 Cybrd1, Selenbp1, Slc2a4, Slc9A2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18 이온 및 용질 항상성 15 30 배에 Agpat2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, Olr1, Pon3, Rbp1, Rbp4 Retinoic 산성 및 지질 처리 15 30 배에 Atf3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2, Ptrf, Sphk1, Tgfbi, Tcea3 Tcfap2b, Wnt2b, Wnt5a, Zic1 개발 및 스크립트 규정 15 30 배에 Adamts12, Adamtsl3, C1r, Crispld2, Crygn, Cyp1b1, DSE, Enpep, Enpp2, Epn3, Flna, Fmo3, Gnmt, Gprc5c, Hspb1, Klc3, Krt18, Krt19, MDK, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, Net1, Pdlim2, Phactr2, Plp2, Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, Spag11, Sult1a1, Tmem106a, Wfikkn2 알 수없는 및 기타 * 표에 포함 된 유전자는 striatum과 pariet에 두 개 이상의 15 배 이상 표현해야합니다알 피질과 배경 레벨 위의 5 배. 각 유전자의 두 비율 (MAV / striatum 또는 MAV / 정수리 피질)의 낮은은 그룹화에 사용되었다. 유전자는 내피 세포에서 발견뿐만 아니라, 가능성이 면역 반응을 중재에 중요한 역할을하고 있습니다. 표 1. 15 배 * 또는 striatum와 정수리 피질에 비해 MAV에 더 증가 표정으로 유전자.